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特种蛋白测定历史
免疫测定的基础是抗原抗体结合反应，在早期的免疫学检测或血清学检测至目前的自动免疫分析中，抗原一抗体特异性结合反应仍是免疫化学研究的核心内容和建立新实验方法的重要基础。抗原抗体反应的最大特点是抗原一抗体的结合具有特异性 speci Icity，即某一特定抗原只能与其相应的特定抗体发生结合反应。抗原与抗体结合的特异性取决于抗原决定簇的化学性质、决定簇的数目及空间构型和立体构象，也与抗体的抗原结合部位与之相匹配或互补的结构有关。体液中的各种蛋白质均具有各自的抗原性，只要获取了针对某蛋白质抗原决定簇的抗体分子，均可在不需要分离蛋白分子的条件下，定量测定体液中的特定蛋白成分。
随着免疫学的飞速发展，体液中的特定蛋白，特别是免疫蛋白成分的有效快速测定，一直是人们关注的方向。
1897年,Kraus发现细菌培养液与相应抗血清混合后出现肉眼可见的沉淀反应。
1902年Ascoli 建立了环状沉淀试验。
1905年BECHHOLD将抗体混溶在明胶中，然后再将相应特异抗原加于其中抗原抗体的特异结合可在明胶中出现沉淀
1964年 OUDIN报道了试管各单向免疫扩散试验1965年 MANCINI又提出了平板单向免疫扩散试验)
GRABAR和WILLLAMS在1953年报道了免疫电泳(对流免疫电泳、火箭免疫电泳和免在固定电泳)。上述为经典免疫沉淀试验发展阶段，测定范围窄10--100ug/ml灵敏度低，繁琐费时，不能自动化。
1959年SCHULTZE等报道了透射比浊法TRANSMISSION TURBIDImetry。其基本原理是测定定体积的溶液在存在抗原抗体复合物粒子对光线的反射手口吸收，引起透射光的减少，测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。也就是说，在透射比浊中，测量透过不溶性复合物探测器而未被散射或吸收掉的光线，测量角度与正前方夹角为 0度。这种方法是常用于生化指标的测定，用于免菠沉淀反应有一些缺点.①溶液中存在的抗原一抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通过，②溶液中抗原一抗体复合物的数量要足够多，如果数量太少，溶液浊度变化大小，对光通量影响不大;③透射比浊采用光电池直接接收光通量，即光度计灵敏度不高，微小的浊度变化不易影响透光率的改变，④透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能测定抗原抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原一抗体温育反应时间，检测时间较长。因此，透射比浊测定主要用于生化分析仪，而且用于免疫测定已曰渐减少。
1967年RITCHie等提出了用激光散射来测定补体(II]和触珠蛋白形成的抗原抗体复合物，并称为散射比浊法 (nephelometry)。该方法将过去经典的需数十小时的;疑胶内免疫沉淀法缩短为几小时即可得到测定结果。
散射比浊是指一定波长的光沿水平照射，通过溶液时，遇到抗原一抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量呈正比，即待测抗原越多，形成的复合物越多，散射光强度超强。散射光的强度，与散射核心(颗粒)的大小和数目有关，还与各种物理因素，如加入抗体(或抗原)后的时间、光源的强弱、波长(单色光)以及测量角度等都密切相关。免疫散射比浊浪。定方法与免疫沉淀方法、透射比浊方法相比，灵敏度高，重复性好，测定范围宽，己用于临床体液特定蛋白含量的测定。
根据该原理 Technicon公司生产了AIP AUToMATED IMMUNO Preciptin自动检测系统公司生产了LN Laser Nephelometry自动检测系统。这些系统很快应用于临床检测工作，使免疫测定反应应用迈出了历史的一大步。但是，这些技术均是采用终点比浊，测定的是抗原抗体反应的第二反应阶段，也是抗原抗体复合物完全形成以后的检测，因此仍需2 -3小时才能完成一项检测。
终点散射比浊法 (Endpoint Nephelometry是在透射比浊法基础上进行了改良的测试方法。即将抗原一抗体混合后，待其反应趋于平稳、直到反应终末时测定结果。该方法用于免疫沉淀反应有很多缺陷①仪器设置为当抗原抗体反应一定时间后，一次性测定吸收值，认定该时间对于所有的样本、校正液和质控品都是反应终点，而没有考虑每一个待测样本的吸收和散射效果，而这种效果随每一个待测样本的抗原抗体反应的不同有很大差异，可导致测定的结果不准确，②反应时间在液丰目中仍需30一120分钟，测定的仍是抗原抗体反应的第二阶段，不适合快速检测，③在抗原抗体反应中，随时间的延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的改变，最后可能测出比反应早期还低的散射信号值，影响结果的准确性，④在终点散射比浊中，有反应本底存在，测定样本的含量越低，本底比例越大，因此在微量测定时，本底的干扰是影响准确测定的因素。由此看来，终点散射比浊法在免疫沉淀反应中，特别是微量检测中，受到限制，目前仅一些自动生化仪使用这种原理测定部分检测项目。
1977年 Sternberg 等提出了更快速的比浊法，称为速率散射比浊法 Rate nephelometry . 1.亥检测法可测抗原抗体结合反应的第一反应阶段，使免疫化学分析发生了质的飞跃。但是该方法对仪器的精密度要求非常高，目前仅用于全自动特种蛋白分析仪中。其基本原理是光沿水平轴照射时，碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散射散射光的强度与复合物的含量成正比，亦即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光就越强。速率散射比浊测定是种抗原抗体结合的动态测定法。经典的沉淀反应皆在抗原抗体结合完成后进行复合物的定性或定量测定(终点法） 若在抗原抗体反应的最高峰(约在rr.nm内)测定其复合物形成的速率(速率法） 则可达到快速、准确的目的。
近年来，散射比浊法又产生了定时散射比浊法( fixedtimenephelometry)
该方法的基本原理是，由于免疫沉淀反应是在抗原抗体相遇后立即开始，在极短的时间内反应介质中散射信号变动很大，如此时计算峰值信号而获得的结果会产生定误差，因此在测定散射信号时不与反应开始同步，而是推迟几秒钟用以扣除抗原抗体反应的不稳定阶段，从而将这种误差影响降至最低。故在抗原←抗体反应时，得出预反应时间，即散射光信号第一次读数在样品和抗体于反应缓冲液中开始反应，7.5秒至 2 分钟内，大多数情况下 2 分钟以后测.第二次读数，并从第二次测信号值扣除第一次读数信号值从而获得待测抗原的信号值并通过仪器处理转换为待测抗原浓度。该原理采用抗体过量来保证抗原-抗体反应中形成不可溶性小分子颗粒，获得小颗粒产生的最强散射光信号。由于每一项检测具有很大检测范围，抗体的结合能力可以达到待测样品正常血清浓度的 50 倍以上， 所以通常不会出现抗原过量而被检测到的现象。
美国德灵公司和贝克曼库尔特公司均有此类仪器，深圳市国赛生物技术有限公司采用全新的德国设计理念，于2005年推出代特种蛋白分析仪 NEPHTSARTM也是采用这种方法保证检测的快速、准确，以满足不断增长的特
种蛋白分析检测市场的需要。 | 
