一组生化试剂操作

纤维蛋白原测定试剂盒—Fg

(免疫比浊法)

简介：

本试剂盒用于定量测定血清中Fg的含量。

高值时：感染症、手术后、恶性肿瘤、脑血栓、心肌梗塞、糖尿症。

低值时：无血纤维蛋白原症、低血纤维蛋白原症、血纤维蛋白原异常症、肝硬化、大量出血，尿激酶大量投入后。

测定原理：

血浆中纤维蛋白原与其相应抗体（羊抗人纤维蛋白原血清）在液相中相遇，立即形成抗原——抗体复合物，形成一定浊度。该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。

试剂盒组成：

1、 纤维蛋白原抗体：内含：羊抗人纤维蛋白原血清、表面活性剂、电解质、防腐剂、动物蛋白等。

2、 纤维蛋白原标准血清一瓶：2。5g/L(应用时与每瓶加0。5ml蒸馏水复溶)。

a. 单点定标：每瓶冻干品加入0。5ml蒸馏水复溶，静置20分钟后使用。定值“x”：

b. 多点定标：每瓶冻干品加入0。5ml蒸馏水复溶，静置20分钟后使用。按下表加蒸馏水稀释，形成多标：

管号	1	2	3	4	5
稀释比例	蒸馏水	1+7	1+3	1+1	原液
Fg浓度	0	x/8	x/8	x/2	x

复溶后标准液在2-8度可保存一周，-20度可保存2个月。

试剂稳定性：

原包装试剂储存在2-8度至标签所示失效日期，15-25度保存两周。

标本收集：

标本为血清，或肝素、EDTA抗凝血浆。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	3
试剂（R）	reagent	ul	300
样本+R在37度保温5分钟，以试剂空白调零，记录吸光度值A。
主波长	main wavelength	nm	340
副波长	sub wavelength	nm	700
反应类型	Reaction type		终点法
反应方向	Reaction direction		升反应（+）
正常范围	Normal range	g/L	2.0-3.8
校正方法	Calib.method	单点	linear
		多点	Nonelinear/Logit-log4p

计算：

Fg浓度=A标本/A标准×标准液浓度

备注：

1、 样本：R=1：100，可根据需要按比例调节。

2、 如仪器内无所提供波长的滤光片，选择波长接近的滤光片数值输入。

3、建议各实验室建立自己的正常值范围。

碱性磷酸酶（ALP）测定试剂

（2-氨基-2-甲基丙醇法）分析仪专用

方法原理：

ALP

4-NPP+2A2M1P 4-硝基酚+2A2M1P-磷酸盐

ALP

4-NPP+H₂O 4-硝基酚+磷酸盐

可用速率法测定4-硝基酚的生成速率，亦可用比色法测定4-硝基酚的生成量，推算出ALP的活力。

试剂组成

本试剂参照美国临床化学学会（AACC）参考方法和国际临床化学联合会（IFCC）推荐法配制。

4-NPP 18mmol/L EDTA 2 mmol/L

2-氮基-2-甲基-丙醇（2A2M1P） 357 mmol/L ZnSO₄ 1 mmol/L

Mg(C₂H₃O₂) 2 mmol/L _PH10.4(30℃)

试剂包装

试剂Ⅰ：缓冲液 90ml 试剂Ⅱ：底物1瓶 底物溶剂：10ml

工作试剂制备

临用前将底物溶剂倒于试剂Ⅱ中，溶解后，与试剂Ⅰ组成双试剂，能加双试剂的仪器可直接应用，试剂Ⅰ和Ⅱ以9：1比例混匀，即为单一试剂。

试剂稳定性

试剂盒贮4℃稳定一年，工作试剂贮4℃稳定15天。

试剂混浊或空白A405nm(1cm光径)＞0.60不能再使用。

仪器要求：

各种类型的自动分析仪。

标本制备

血清，采血后及时分离，避免溶血。

测定参数：

反应类型：速率法 延迟时间：620秒 样 本：6ul

波长：405nm（主）/600 nm（次） 读数时间：60秒 试 剂：300 ul*

温度：37℃ 比色杯光径：1.0cm 常数（K）：2764（405 nm）

*如为双试剂 R1 270ul，R2 30ul 3125（410 nm）

参考值：

37℃ 15-112 IU/L（成人）

儿童的碱性磷酸酶活力较高，约为成人的二倍。

谷丙转氨酶（液体试剂ALT/GPT

（IFCC速率法）

原理：谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移,生成丙酮酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD⁺。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。

试剂组成

组 成	R1：R2=5：1 混合后溶液的浓度
R1：Tris缓冲液：	80mmol/L PH=7.8
L-丙氨酸	450mmol/L
LDH	18mmol/L
R2：起动液
NADH	0.18 mmol/L
α-酮戊二酸	＞1200U/L

试剂稳定性

1、原包装试剂2-8℃储存至失效期。

2、R1与R2试剂以5：1比例混合后，2-8℃可稳定16天，18-25℃可稳定3天。

试剂失效指标：

混合后试剂变混浊，340nm空白吸光度低于0.8ABS。

标本收集：

血清或血浆，应避免溶血。ALT在室温中稳定性差，采血后应忙测试或置于冰箱储存。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	20
试剂1（R1）	Reagent 1	ul	200
试剂2（R2）	Reagent 2	ul	40
标本+R1+R2在37℃保温60秒后，测量2分钟内的吸光度变化。
主波长	Main wavelength	nm	340
副波长	Sub wavelength	nm	380/410
反应类型	Reaction type		速率法（RATE）
反应方向	Reaction direction		降反应（-）
试剂空白吸光度	Reagent limit OD		＞0.8
正常值范围	Normal range	U/L	0-38
线性范围	Linear	U/L	＜600
F值	factor	（-）2090*副波长选用380nm，则F值为2620。

ALT手工法测定参数：

试剂1与试剂2按5：1比例混合使用。

试剂：500 ul 血清：50 ul 测定时间：60秒 延迟时间：30秒 波长：340 nm

因数：1760

谷草转氨酶（液体试剂）——AST/GOT

（IFCC速率法）

原理

谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联，使NADH氧化成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。

试剂组成

组 成	R1：R2=5：1 混合后溶液的浓度
R1：Tris缓冲液：	80mmol/L PH=7.8
L-天冬氨酸	200mmol/L
LDH	＞1.2U/mL
MDH	＞0.8 U/mL
R2：起动液
NADH	0.18 mmol/L
α-酮戊二酸	12 mmol/L

试剂稳定性

1、原包装试剂2-8℃储存至失效期。

2、R1与R2试剂以5：1比例混合后，2-8℃可稳定16天，18-25℃可稳定3天。

试剂失效指标：

R1、R2混合后试剂变混浊，340nm空白吸光度低于0.8ABS。

标本收集：

血清或血浆，应避免溶血。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	20
试剂1（R1）	Reagent 1	ul	200
试剂2（R2）	Reagent 2	ul	40
标本+R1+R2在37℃保温60秒后，测量2分钟内的吸光度变化。
主波长	Main wavelength	nm	340
副波长	Sub wavelength	nm	380/410
反应类型	Reaction type		速率法（RATE）
反应方向	Reaction direction		降反应（-）
试剂空白吸光度	Reagent limit OD		＞0.8
正常值范围	Normal range	U/L	0-38
线性范围	Linear	U/L	＜600
F值	factor		（-）2090 *副波长选用380nm，则F值为2620。

参考值：

＜40u

白蛋白（Alb）测定试剂

（BCG）自动或手工分析

方法原理

本试剂按WHO推荐的溴甲酚绿（BCG）法配制，原理如下：

在酸性溶液（PH4.15）中白蛋白与BCG形成绿色络合物，其色泽与白蛋白含量成正比，对照标准可测定其含量。

试剂组成

BCG 0.36mmol/L Brij-35 2.4g/L

琥珀酸缓冲液 005mol/L， PH4.15±0.15（25℃）

试剂包装

1、BCG试剂 100 ml×2

2、标准液（混合人血清）：定值见瓶签。

标本制备

血清，采血后及时分离，避免溶血。

测定方法：

分析仪参数

分析类型：终点法 空白：试剂空白 波长：600（主）/700（次）nm

温度：37℃ 样本：3ul 试剂：300 ul

标准：按标定值 反应时间：60秒

手工操作按下表

测定管 标准管 空白管

血清（浆） ul 10 — —

标准 ul 10

生理盐水 ul — 10

BCG试剂 ml 3 3 3

混匀，置室温10分钟后，用600nm波长，空白管校零，读取各管的吸光率（A），按下式计算：（测定管A/标准管A）×标准管浓度=白蛋白。

附注：

BCG反应的特异性较差，除和白蛋白反应外，还能和多种球蛋白反应，但前者反应迅速，而后者反应缓慢，需1小时才能完成，因此有人主张10秒钟比色，这对实际操作是有困难的，本试剂盒采用定值人血清作参考物，可以抵消除蛋白的干扰。

参考值

40-53g/L