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肌钙蛋白测定今天的性能和明天的性能
摘自：Clin Chem 48/6，809-810，2002
Mauro Pantegnini（杂志社论）
国际科学团体最近建议使用肌钙蛋白检出心肌坏死（1，2）。有些肌钙蛋白的测定在引入临床使用前没有进行适当的评估（3）。IFCC的心肌损害标志物标准化委员会（C-SMCD，Committee on Standardization on Markers of Cardiac Damage）提出了心肌肌钙蛋白测定的质量规格，作为目标有助于检测厂商和临床实验室，并催促科学界对肌钙蛋白的测定去设计和研究这个主要的问题（4）。Uettwiller-Geiger等的研究（5）出版于本期Clin Chem杂志上代表了满足这些建议的好例子。
评估的首要问题是在肌钙蛋白免疫测定中抗体的特异性。决定簇的位置在肌钙蛋白I（cTnI）测定中是重要的，因为分子的氨基和羧基端容易被解离，降解的程度和组织缺血有关（6） 在急性心肌梗死病人血清中检出11种修饰的cTnI产物。释放的cTnI原先为肌钙蛋白C（IC）的二元复合物，在血液中也发现少量的游离cTnI（7）。而且，释放的cTnI有氧化和还原形式，氧化型为在分子内的2个半胱氨酸形成二硫键（8）。最后，cTnI也能被磷酸化（8）。
研究临床肌钙蛋白测定必须注意测定中抗体对的特异性。理想的抗体只识别分子稳定部分的决定簇，不受IC或肌钙蛋白I、T和C（ITC）复合物形式和其他“体内”修饰的影响。十分完善的是Uettwiller-Geiger等（5）检测了被评估免疫测定对存在于血液中cTnI的主要形式，也即包括游离蛋白、它得二元形式、三元形式复合物、磷酸化和去磷酸化形式等的免疫活性，说明测定对这些形式具有等摩尔的响应。
第二个问题是校准。cTnI没有国际参考材料，厂商均自行制备他们自己的校准品，所以使用不同的纯化方法和校准抗原类型（天然的或重组的，或游离的或复合蛋白）。加上不同抗体特异性，这些就是市售cTnI商品测定不一致的最重要的原因（9）。C-SMCD推荐：cTnI测定的校准材料必须能代表组织释放后血液中存在的天然和主要的类型，即复合形式（4）。AACC的cTnI标准化委员会指定3个候选的参考材料，即肌钙蛋白C、I、和T（10）。期望使用其中之一为参考材料将在cTnI检测系统间具有可接受的协调（一致）。
现在只有在协调是可能的，但是真正的标准化应该是目标。检测的标准化和可溯源性需要完整的参考检测系统，包括纯化的肌钙蛋白复合物为初级参考材料，具有基体（以血清为基础）的二级参考材料，和参考方法，用来对二级参考材料定值，评估常规方法的分析性能（11）。
标准化计划最重要的好处是在不同cTnI检测系统间具有共同的参考和决定限。只有使适当的cTnI标准化成为可能，才能由每个检测系统分别确定参考值和临床判断限。依据MI重定义的文件（2），诊断厂商应从出版同组的信息中，需要提供检测的99％参考限。这样的研究很少。Uettwiller-Geiger等的文献说明在确定临床决定水平时需要实验室、临床医生、和厂商的合作。
现今的免疫技术提供了很宽的分析范围，但是在许多场合下，几乎很少需要稀释。但是，如果需要，应在作认真研究后再作样品稀释，因为稀释可能和校准曲线不平行。尽管平行是使用前的先决条件，但是在推出产品前往往没有说明线性的表现。在多中心研究中，协作组评估了线性，发现样品的稀释没有明显的偏倚（5）。
在各个cTnI测定中，不精密度也不一致（12）。C-SMCD推荐总不精密度在MI决定限处应小于10％(1,4)。达不到这个目标会增加临床误导的结果。毫无疑问，对检测需要非常精密的方法是困难的挑战（13）。可是，在同一仪器上进行不同“代”产品的结果的比较明显地说明，新检测方法的精密度有了改进，改进精密度是厂商在设计新检测考虑的主要目标（5，14）。
肌钙蛋白测定的非特异性也使结果具有分析干扰。在各种免疫测定中，因为抗原-抗体反应干扰使结果为假阳性。因类风湿因子或人抗鼠抗体，通常称为“heterophilic 抗体”（Has），可以模仿肌钙蛋白和捕获、检测抗体结合。这些假阳性结果导致无保证和困难是危险的处理（16）。
没有Has干扰的检测系统应该认真说明：对样品具有高浓度类风湿因子和具有人抗鼠抗体的，如何处理以排除Has的干扰（4）。用这种方式，Uettwiller-Geiger（5）在评估的cTnI测定中，说明了嗜异性干扰的可能性。这个方法说明，当样品中含有Has时使cTnI结果升高（6倍于参考上限）；用含有HA封闭管处理后，结果明显下降。
CtnI在体外的稳定性看来依赖于不同的方法，需要有各个系统测定的数据（4）。Uettwiller-Geiger等大致上研究了储存对标志物的影响（虽然仅3天，在-20℃）。
用血浆替代血清作肌钙蛋白测定很有用，因为可以消除了血凝的额外时间，减少分析前时间（1）。但是，血浆和血清的肌钙蛋白浓度棉线不同，至少在一些系统是这样。肌钙蛋白和肝素结合降低肌钙蛋白的免疫活性到各种程度，取决于测定的决定簇和样品管中肝素的浓度。另一方面，EDTA裂解依赖钙的ITC和IC肌钙蛋白复合物，在肌钙蛋白测定中降低了检测浓度，因为首先测定的是这些形式。所以将用于常规前，应对抗凝剂作详细的研究（4）。应收集MI开始的早期和后期时，不同类型样品（如肝素锂血浆和血清）作比较，以此确定某些抗凝剂的使用（17）。用这个方法，Uettwiller-Geiger等（5）说明，血清和EDTA血浆比配对的肝素锂样品低4％和14％，但是他们没有说明样品间的差异。
决定性的检验，如肌钙蛋白做出判断的决定，将需要高度可靠的方法。新检测在医院实验室正式实施前一般需要有更多的同类型的比较。Uettwiller-Geiger等（5）应该被鼓励，由于他们的工作，提供了一个在这样领域中如此出色的例子。 | 
