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全血HLA-B27测定标准操作规程
美国BD公司的HLA-B27 Kit
1、抗体标记
1.1 取FALCON管一支,加荧光抗体20μl,再加摇匀的抗凝全血标本100μl,涡旋振荡数
秒;
1.2 避光室温放置20分钟;
1.3 FALCON管中加1×溶血素2 ml,涡旋振荡数秒;
1.4 避光室温放置10分钟;
1.5 离心,1000 rpm×5分钟、室温;
1.6 弃上清后加2 ml PBS,涡旋振荡数秒;
1.7 离心,1000 rpm×5分钟、室温;
1.8 弃上清后加0.5ml PBS,准备上机。
2、流式细胞仪分析
2.1从苹果菜单进入,选择HLA-B27软件;
2.2 点击右下角Accept;
2.3 在展示的窗口,在Data Source选择From Cytometer,在Automatic Saving Options,File Name Prefix, View Reports中,操作者的按所需要求进行诸项选择,最后点击Accept;
2.4在展示的窗口,如需进行FACSComp则点击Launch FACSComp,亦可直接进行样本检测则点击Skip FACSComp→Continue;
2.5在展示的窗口,顺序输入样本姓名(Sample Name),点击Run Tests,得分析结果。
二、全血TBNK淋巴细胞亚群流式分析
美国BD公司的MultiTESTTM IMK Kit
1、标本染色
1.1 取FALCON管2支,分别编号A、B,加对应荧光抗体20ul,再加抗凝全血标本50ul,涡漩振荡数秒;
1.2 避光室温放置20分钟;
1.3 加1×溶血素450 ul,涡旋振荡数秒;
1.4 避光室温放置15分钟;
1.5 24小时内上机检测。
2、流式细胞仪分析
2.1从苹果菜单进入,选择MultiSET软件;
2.2 点击右下角Accept;
2.3 在展示的窗口,在Data Source选择From Cytometer,在Automatic Saving Options,Entry Level File Name Prefix, View Reports中,操作者的按所需要求进行诸项选择,最后点击Accept;
2.4 在展示的窗口,如需进行FACSComp则点击Launch FACSComp,亦可直接进行样本检测则点击Skip FACSComp;
2.5 在展示的窗口,在Physicians Report Choices, Laboratory Report Choices, Summary Report ID, Report Reference Ranges, QC Message For Out OF Normal Range中,操作者的按所需要求进行诸项选择,最后点击Accept;
2.6 在展示的窗口,顺序输入样本姓名和测试项目,选择Calib.LNW作为获取条件;点击Run Tests,得到分析结果。 |