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COULTER EPICS XL型流式细胞仪标准操作规程

一、仪器开机标准操作规程

1．开机之前，分别将鞘液盒及清洁液盒分别加满鞘液和清洁液 ，废液桶倒净。

2．打开稳压电源，如仪器已连接在整体稳压电源上，无需操作此步。

3．开启计算机，仪器自动进入程序，启动流式细胞仪

4．打开电源箱门，检查 WATER TRAP(水陷阱) 、 AIRFILTER（空气过滤器） 、 VACUUM FILTER（真空泵过滤器） ，如有下列情况通知工程师：

4．1 TRAP 超过 1 ／ 3。

4．2 FILTER 有液体 。

4．3SYSTEM VACUUM 表超过－ 17 至－ 25 in.Hg 。

4．4SYSTEM PRESURE 表（系统压力表）如超过 8 － 23psi 之间 。

4．5VACUUM TRAP 如有超过 0.5 英寸液体 。

5．预热三十分钟，仪器提示插入标本管 。

6．按Protocol选择需要的 Protocol（程序），进行光路与流路检测。

7．在QC-保养程序中记录。

二、 COULTER EPICS XL型流式细胞仪光路、流路校准

1．将 FLOW- Check液 放在室温下 10 分钟。

2．按Protocol选择需要的 Protocol（程序）。

3．取 0.5ml(15～20滴) FLOW- Check液放在塑料试管内。

4．将试管放在进样台上，仪器自动取数至5000 （ FS ）

5．核查 FS 及所有荧光信号（ FL1、FL2、FL3、FL4 ） 的 HPCV（半峰宽CV）值，核对是否少于2%，是否与以前的记录相符。

6．如FL1、FL2、FL3、FL4 荧光信号 的 HPCV值超过2%，则应检查：

6．1 观察仪器是否预热≥20min。

6．2 按主机上PRIME键，排除气泡干扰后重测。

6．3在Acquisition状态栏下，选择 PANEL 中的 CLEANING – Panel，清洗机器后重测。

6．4若以上处理后，HPCV均未达标，应进行光路调整，由工程师完成。

三、COULTER EPICS XL型流式细胞仪保养标准操作规程

(一)日常清洗标准操作规程

1．准备清洗液：

1．1次氯酸钠：5%次氯酸钠1ml+蒸馏水1ml 等量混匀。

1．2蒸馏水 5ml 。

2．在Acquisition状态栏下，选择 PANEL 中的 CLEANING – Panel。

3．按仪器提示，用次氯酸钠一次，蒸馏水三次依次放入标本台,仪器自动清洗。

(二)真空管清洗标准操作规程

1．按 RUN 键， RUN 键指示闪烁

2．真空清洗器内加入 5ml 双蒸水（黑色管）

3．将清洗器放置于样品台上，水被吸入

4．拿下清洗器，按 CLEANSE 键，当清洗循环结束， RUN 键指示灯亮，仪器显示 Cytometer Ready,RUN灯亮

5．注意事项

5．1出现下述情况后必须立即进行清洗：

5．1．1使用以下染料后如 PI 、 EB 、 AO 、 TO 、 Coriphosphine-0、 FITC`Fura3 、 Fiuorescein Diacetate

5．1．2使用以上染料，进行免疫分型前。

5．1．3如果有碎片或计数有明显增加。

5．2工作 24 小时至少关机一次。

5．3重新启动激光必须在仪器关闭 30 分钟之后。

5．4每2～4周清洗一次空气滤膜。

5．5每月清洗鞘液盒一次。

5．6每 60 天清洗清洁液盒一次。

四、COULTER EPICS XL型流式细胞仪关机标准操作规程

1．完成日常清洗程序。

2．完成真空管清洗。

3．用 70 ％酒精清洗标本台。

4．将有双蒸水的试管放在样品台上

5．在 Applications 状态中的，选择 EXIT 退出system软件

6．若在DOS方式下开机，则在C：\XL 状态下键入 XLOFF ；若在WINDOWS方式下开机，则返回 WINDOWS界面，双击“ XLOFF”图标。

7．依次关闭计算机主机、打印机以及电源箱开关。

8．关闭 UPS。

五、COULTER EPICS XL型流式细胞仪参数设置的标准操作规程

（一）单色荧光分析的参数设置

1．选择参数：在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol，于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色，如FS、SS、FL1或FS、SS、FL2等。

2．选择参数后，可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词，如将FL1 LOG改为FITC，FL2 LOG改为PE等。

3．利用参数构建直方图：用鼠标将屏幕右上方的参数点亮，然后放在直方图的X、Y轴，创建需要的直方图。

4．设立分析区域：在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键，将需要设立分析区域的直方图放大， 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT，在屏幕右侧选择分析区域类型，连续点击即可改变。

5．利用GATING建立直方图之间的关系：在设立分析区域的界面下，返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域，如A，并将其点亮，放在所要GATED的直方图上方。

6．选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

5．存储分析参数：在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS，给此分析参数取名。

（二）双色荧光分析的参数设置

1．选择参数：在Acquisition状态栏下选择SETUP SCREEN下的 Protocol，于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色，如FS，SS，FL1，FL2。

2．选择参数后，可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词，如将FL1 LOG改为FITC或FL2 LOG改为PE等。

3．利用参数构建直方图：用鼠标将屏幕右上方的参数点亮，然后放在直方图的X、Y轴，创建需要的直方图。

4．设立分析区域：在Acquisition状态栏下选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION ， 单击鼠标左键，将需要设立分析区域的直方图放大， 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT，在屏幕右侧选择分析区域类型，连续点击即可改变。

5．利用GATING建立直方图之间的关系：在设立分析区域的界面下，返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域，如A，并将其点亮，放在所要GATED的直方图上方。

6．选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

7．存储分析参数：在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS，给此分析参数取名。

（三）多色荧光分析的参数设置

1．选择参数：在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol，于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色，如FS、SS、FL1、FL2、FL3等。

2．选择参数后，可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词，如将FL1 LOG改为FITC，FL2 LOG改为PE等。

3．利用参数构建直方图：用鼠标将屏幕右上方的参数点亮，然后放在直方图的X、Y轴，创建需要的直方图。

4．设立分析区域：在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键，将需要设立分析区域的直方图放大， 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT，在屏幕右侧选择分析区域类型，连续点击即可改变。

5．利用GATING建立直方图之间的关系：在设立分析区域的界面下，返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域，如A，并将其点亮，放在所要GATED的直方图上方。

6．选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

7．存储分析参数：在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS，给此分析参数取名。

（四）细胞DNA周期及倍体分析参数设置

1．选择参数：在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol，于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色，如FS、SS、FL3、AUX（FL3 Peak）、RATIO、TIME等。

1．1选择AUX参数时，需先将SIG点亮，并选择对数FL3 Peak。

1．2选择RATIO对数时，需行将MUN、DEN点亮，并选择参数AUX、FL3，然后再点亮RATIO参数。

2．选择参数后，可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词，如将FL3 LOG改为PI。

3．如图示构建直方图，用鼠标将屏幕右上方的参数点亮，然后放在直方图的X、Y轴，创建需要的直方图。将所需要的分析直方图中NO SAVE改为SAVE。

4．设立分析区域：在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键，将需要设立分析区域的直方图放大， 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT，在屏幕右侧选择分析区域类型，连续点击即可改变。

5．利用GATING建立直方图之间的关系：在设立分析区域的界面下，返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域，如A，并将其点亮，放在所要GATED的直方图上方。

6．在直方图的上方点击一下，将出现一个对话框Enter Histgram Title，将所需要的标题写进即可。

7．选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

8．存储分析参数：在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS，给此分析参数取名。

五）细胞免疫表型绝对计数参数设置

1．CD34+细胞绝对计数的参数设置（ISHAGE方案）

1． 1根据上面同样方法设门( ISHAGE方案)

1．2在Set up Screen栏中选择Statics，将随FLOW-COUNT提供的微球应用浓度输入校准因子区域。

1．3 标记3管全血标本：Tube1(trol/45/34)加10ml CD45-FITC、10ml CD34-PE； Tube2(45/34)加10ml CD45-FITC、10ml CD34-PE； Tube3(trol/45/G1)加10ml CD45-FITC、10ml IgG1-PE;三管都加50全血标本，然后在 Tube1、 Tube2中加入100 ml StemTrol。混匀后室温避光15min,Q-Prep溶血。

1．4振荡混匀Flowcount,加100ml Flowcount到三反应管，注意不要带入气泡，并混匀，上机前必须重复振荡混匀一次。

1．5上FCM分析，并计算各类CD34+细胞，包括内参照及全血标本。标本上机后，当CAL区域计数FLOWCOUNT达应用浓度以上，各区域统计数据中的COUNT将自动转换为各分析区域绝对计数，单位为细胞数/ ml 。StemTrol结果经标准化因子(100ml /20ml =5)校正，与 StemTrol提供的标准值比较，差异在±15%以内通过。这样 Tube2测得的CD34+细胞数为全血标本的绝对CD34+细胞数

（六）数据分析的标准操作规程

1．DOS状态下SYSTEM 软件数据存储方式有两种：

1．1在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol，于屏幕右下方用鼠标将LIST SAVE OFF 改为 LIST SAVE ON，即这种数据保存方式为 LISTMODE，这种存储方式可重新进行设门分析。

1．2在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol，将直方图中NO SAVE改为SAVE, 这种数据保存方式为为HISTGRAM, 这种存储方式为单张直方图存储，不可进行重新分析。

2．EXPO32软件分析

2．1 WINDOWS状态应用 EXPO32分析软件，直接点击 EXPO32分析软件快捷方式，软件即会显示列出所有用户。

2．2选择所需要的路径及密码，然后点击NEXT继续

2．3直接点击Finish图标或从已建立好的方案，开始运行 EXPO32分析软件