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ADVIA-120血球分析仪的临床应用
广东省佛山中医院 张劲丰
与以往的血球分析仪一样,ADVIA120血球分析仪主要用于血细胞分析检查,所不同的是其速度更快,检测的项目更多,结果准确性更好。有核红细胞的鉴别是采用过氧化物酶技术标记来鉴定。仪器的优越性能及使用,我想在此不作介绍,主要针对一些临床参考指标及应用方面作一些介绍。
ADVIA120五种模式可随意选择
l 细胞计数+分类(CBC+DC)
l 细胞计数+分类+网织红细胞(CBC+DC+RTC)
l 细胞计数+网织红细胞(CBC+RTC)
l 细胞计数(CBC)
l 网织红细胞(RTC)
ADVIA 120血细胞分析仪报告参数参考值及临床意义
以上众多项目,除了平时应用较多的WBC、Hb等外,我想重要介绍一下网织红细胞方面的应用。
ADVIA120的网织红细胞和红细胞参数在临床中的应用
l 鉴别诊断
l 监测和早期诊断
l 预后判断
l 疗效观察
l 铁缺乏的检测
l 地贫和血红蛋白病
l rHu-EPO治疗
l 大细胞性贫血
l 遗传性球形细胞增多症
l 镰状细胞性贫血
l 网织红细胞的概念:
网织红细胞(下称网红)是尚未完全成熟的红细胞,是晚幼红细胞脱核后到完全成熟之间的过渡细胞,由于其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构,因此得名为网织红细胞。网红是反映骨髓造血功能的重要指标,特别是在贫血中扮演著极其重要的角色。
l 网红显微镜目测法,流式细胞网红计数仪,Bayer ADVIA-120分析仪的对照:
1. 网红显微镜目测法:
迄今国内仍多采用显微镜目测法(下称目测法),可直观细胞形态且不需昂贵设备,不失为诊治贫血的重要实验方法,但操作费工费时,受主观因素影响,计数精确性较差为其不足。
2. 网红流式细胞仪法(Flow cytometer,简称FCM)
近年来,国外多使用自动分析仪代替目测法,无论从实验方法学还是临床应用,均取得了良好效果,早在1983年有专家就应用FCM方法学进行网红计数,且在血液病的鉴别诊断和疗效观察取得了满意的结果。并评价了FCM方法与目测法的实验结果,发现前者的测量精确度比后者明显提高。因为流式细胞仪(flow cytometer,FCM)的问世,开创了生物细胞研究的新领域, 也为网红计数提供了快速、准确的测试手段,可以通过某些染料(如吖啶橙、派若宁-Y 、噻唑橙)与网红中RNA结合,在FCM方法测量时发出特定颜色的荧光, 进行单参数定量RNA,已知在红细胞发育过程中,RNA含量有明显规律性变化,即由原始阶段较为丰富逐渐减低至细胞完全成熟后消失或接近消失。网织红细胞为成熟红细胞前阶段,通过FCM方法检测RNA可精确表示网织红细胞占成熟红细胞的百分率(RET%)。网织红细胞计数仪的临床应用价值已被公认。但由于其仅能测试网织红细胞,常给临床诊断带来不便。
3. BAYER ADVIA-120全自动细胞分析仪检测网红的方法学
1993年以来,可进行网红计数的血液分析仪相继问世,使血细胞分析仪应用进入了新的阶段,其代表公司有很多,(例如Coulter Maxm型,Sysmex SE系列等)而BAYER-120全自动细胞分析仪不但能检测有关白细胞、红细胞、血小板等等几十项测量参数,还可得到网织红细胞的实验参数。其的测试方法首先将样本与ADVIA-120的网红试剂混合,因网红测试中含有RNA染剂OXUZINE -750(即核酸染料:氧氮杂芑-750。)它可渗透到网状红细胞膜内,将细胞质内的RNA加以染色,细胞质内含有RNA的网状红细胞将被染成蓝色,且依照RNA含量的多寡反应染色的程度。细胞膜内不含RNA的红细胞与血小板则不被染色。再利用光学系统,经光电二极管的处理,低角度散射光可测定出血球体积,高角度散射光可测定血球血红蛋白浓度,吸光度变化的测量可以计算RNA染色程度,利用以上三个测定值就可以测得完整的网织红细胞分析参数。其参数包括RET绝对值(网织红细胞计数)、网织红的百分数(RET%)、网红的平均体积(MCVr)、网红细胞分布宽度(RDWr)、单个网红内血红蛋白分布宽度(HDWr)、单个网红内平均血红蛋白浓度(CHCMr)、单个网红内血红蛋白含量(CHr),小红细胞比率(%Micro)低色素红细胞比率(%Hypo),及根据荧光强度,还可将网织红细胞分成低荧光强度网织红细胞(Low Fluorescent Reticulo- cyte 简称LFR)、中荧光强度网织红细胞(Middle Fluorescent Reticulocyte简称MFR )和高荧光强度网织红细胞(High Fluorescent Reticulocyte 简称HFR)三部分。幼稚的网红显示最强的荧光,反之成熟红细胞极少或没有荧光。为了评价ADVIA-120的有关精密度,重复性及速度以及它的线性范围。我科进行了重复多次的高,中,低值的测试,以及同目测法的对照,实践证明ADVIA-120能更准确地进行网红计数,且能快速地精确地检出目测法所不能的更多的有用的网红数据结果。
l 网织红细胞的有关正常参考值:
我科以HGB120—160g/L ,MCV90—100fl,MCH27—34Pg作健康组用BAYER-120全自动细胞分析仪对300例正常人进行了分析,其结果见下表。
表1-1 300例正常人网织红细胞检测结果
网织红计数 LFR MFR HFR MCVr RDWr HDWr CHr
x 1.1 88.1 11.2 2.6 112.0 17.85 33.8 25
s 0.40 3.78 4.01 1.77 5.5 2.35 5.4 4.0
l 网织红细胞的临床应用进展
130年以前Feb观察到贫血病人的 RBC 中的颗粒并用苦味酸显示了它们, 而后Erhich用亚甲蓝染色后发现了网状结构并建立了网织红细胞目测法,一个多世纪以来这种方法在贫血的诊断、疗效估计、鉴别诊断中的重要作用众所周知,笔者不再赘述。现将仪器法进行网织红计数的临床应用简述如下。
l 缺铁性贫血要点
缺铁性贫血是呈典型的小细胞低色素贫血,它的红细胞,血红蛋白浓度均减少,并有贫血的临床表现,且平均血红蛋白浓度(MCHC)〈26Pg细胞平均体积(MCV)〈80fl,平均血红蛋白含量〈0.31Pg单个网红内血红蛋白含量(CHr)〈25Pg,小红细胞比率(%Micro)/低色素红细胞比率(%Hypo)即M/H〈0.9可诊断为缺铁性贫血。缺铁性贫血是小儿的常见病,主要发生在6个月至3岁的婴儿。为了有效地诊断儿童缺铁的方法,我们经筛选将30例儿童,平均年龄2.9+/-2岁分为ß-地中海贫血,铁缺乏组(载铁蛋白饱和度TSAT〈20,〉及其它小细胞性贫血分为三组进行对单个网红内血红蛋白含量(CHr),小红细胞比率(%Micro)/低色素红细胞比率(%Hypo)即M/H作比较如下图1-2。从图中可明显看出单个网红内血红蛋白含量(CHr),小红细胞比率(%Micro)/低色素红细胞比率(%Hyp)即M/H对缺铁性贫血是很好的指标。
l 网红的HFR,MFR,LFR的应用
我们以Hb 120~160g/L、MCV 90~100fl 、MCH 27~34pg的患者作为健康组;WBC<3×109/L、PLT<50×109/L 的化疗后红细胞生成抑制者为骨髓抑制组,以慢性溶血性贫血患者为溶贫组,I缺铁性贫血DA组、血液透析组,老年无贫血组(70 岁以上 Hb 120 ~160g/L、MCV 90~100fl、MCH 27~34pg)、老年贫血组(70岁以上Hb不足 110g/L且无明显病因的个体)测得的网织红细胞百分比、HFR ,MFR及LFR四项参数如下图可证实HFR 和LFR 可能是反映造血功能的关键的新参数的结论。与贫血组相似, 血液透析组HGB为100g/L或更低,HFR上升,LFR下降,但是RET数不升高;因此,可将网织红细胞计数及其分类作为鉴别诊断的初筛指标。我们还可以从图中可看出老年健康组与健康对照组具有相似的特征,说明这些参数无年龄差异。老年贫血组RET数减少,但RET% 却与健康组相似。上述结论在图中一目了然。图中依次为:健康组、骨髓抑制组、溶贫组、IDA组、血液透析组,老年无贫血组(70 岁以上 Hb 120 ~160g/L、MCV 90~100fl、MCH 27~34pg)、老年贫血组(70岁以上Hb不足 110g/L且无明显病因的个体)。
l EPO治疗的监测
EPO是促红细胞生成素的简称。它在管理功能性缺铁的肾脏病人中特别重要。大多数肾脏衰竭病人根据不同的贫血程度,其血色素浓度都异常地低,故现在医师也常用EPO治疗这些病人。当HGB下降、组织氧化受阻时,EPO生成增多,EPO 促使干细胞向原始红细胞分化,也加速网织红细胞释放。因此,EPO增加,HFR也增多,并伴有网织红细胞的增多。化疗后骨髓EPO功能恢复早期,HFR增多比网织红细胞总数恢复早,这种反应时间的不同体现了EPO与HFR之间的密切关系。对于EPO检测我们将作进一步的研究。 |