[转发]苏木素-伊红染色法

苏木素、伊红染色，简称HE染色，是组织学技术的常规染色方法。恒定优质
HE切片应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明。
一、石蜡切片苏木素一伊红染色法的基本步骤：
脱蜡
（1）二甲苯I 15分钟
（2）二甲苯II（应完全透明） 10分钟
逐级降浓度酒精水化
（3）无水酒精I（变为不透明） 1－2分钟
（4）无水酒精II 1－2分钟
（5）95% 酒精 1－2分钟
（6）80% 酒精 1－2分钟
（7）自来水洗 片刻
染色
（8）蒸馏水 片刻
（9）苏木素液染核 10—15分钟
（10）自来水洗 片刻
（11）1%盐酸酒精分化 0.5—1分钟
（12）流水冲洗 片刻至数小时
（13）碳酸锂饱和水溶液反蓝 1分钟
（14）流水冲洗 15分钟至数小时
（15）复染 0．5％伊红水溶液（对比染色） 2—5分钟
逐级升浓度酒精脱水（若为醇溶伊红可直接人90％酒精）
（16）自来水洗（分化伊红） 片刻
（17）95％酒精I 1－2分钟
（18）95%酒精 II I—2分钟
（I9）无水酒精 I 1—2分钟
（20）无水酒精II l－2分钟
透明
（21）二甲苯I 5—10分钟
（22）二甲苯II 5—10分钟
可作透明度试验：在黑色背景下以光线照于切片如果见有乳白色斑片系脱水不足，需
再行脱水。
封固
（23）盖玻片下封固
结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈桔红色，其它成分呈深浅不同红色。
二、染色过程中的加热
为了缩短某些程度的染色时间，通常可用加热的方法来实现。一般是将切片或涂片浸在染色液内，连同染色皿置于37℃或56℃温箱内至所需时间。
有的染色需用煮沸或近于煮沸的技术，可将染色液在试管内煮沸后倾在载玻片上；或在注满染液的载玻片下面直接加热，直接加热会因溶剂蒸发而使染色剂发生沉淀。这可在倾人染色剂以前在切片上覆盖一块方形滤纸束加以防止。染色完成后冲洗切片时可以很容易地除掉滤纸而又不会损伤切片。
三、染色时应注意事项
一张优质的HE染色切片，绝非仅指染色而言，它包括很多方面，首先应重视“固
定”环节，其次注意脱水、透明、组织浸蜡，包埋和切片等各个步骤。一张因固定、脱水等步骤有所缺陷的切片，染色是不可能鲜艳、透明、层次分明的。解决上述各细节问题的方法已在前面各章节中均提到过。但在进行HE染色时还应注意以下问题：
1．组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分，若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低，若室温过低，可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。
2．苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物，这可能是液体表面的过氧化物，必须过滤除去，以防沉渣污染组织切片。苏木素液一般染过三、四百张切片后，着色力会减弱，着色不鲜艳，呈灰蓝色时应及时更换新液。
3．染色的时间长短需依据：染剂对组织的染色作用，室温条件，切片厚薄，固定液的类别，染液的新旧而进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。
4．分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象，因此分化后一定要镜检，观察胞核是否清晰，胞浆呈淡白色。否则需再次分化，不然一旦复染后，组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。
5．还原液不宜过浓，若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。
6．伊红宜淡染，复染过深胞核会不清晰，影响镜检。
7．若脱水，透明等步骤不够彻底，则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象，应立即更换纯酒精脱水，再次透明。在潮湿的季节里应注意酒精的浓度、若降低要及时更换。
8．染色后的组织切片、要将组织四周的污染物痕迹擦掉，以免影响美观。
9．封固剂要适量，滴加时应小心倾滴，盖玻片要轻轻放置，以免气泡产生影响镜检。盖玻片大小选择要合适，一般要大于组织块，以防封盖不全，盖玻片要放正，标签贴牢，编号清楚。从而保证切片的封藏和美观。
10．染好的切片应妥为保存，更应避免日光照射，否则切片容易褪色。