[转帖]MegaBACE 1000 型DNA测序仪操作规程

MegaBACE 1000 型DNA测序仪操作规程

 

 

一． 开机

1． 打开空调及通风开关，使测序仪处于适宜温度和超净环境。

2． 开氮气，把高压氮调至1000Psi和低压氮调至100Psi。

3． 开测序仪电源。

4． 开电脑使计算机与MegaBACE程序系统连接，用鼠标双击MegaBACE程序组Host Scan Controller程序。

二．毛细管清洗

1． 双击MegaBACE程序组中的工程师管理程序“ICS”。

2． 按“Clamplock open”，再按“Lower Catstage”和“Lower Anostage”。

3． 抽出Catstage，倒净Water Tank中的水。

4． 抽出Anostage，更换并加满Anostage中六管中的Millipore水，推入MegaBACE。

5． 按“Ｒaise Catstage”和“Raise Anostage”，再按“Clamplock close”。

6． 按“>”键，输入“hipress 9”并回车。

7． 重复2-6步3次，最后一次将“hipress 9”改为“hipress ５”，毛细管内清水冲洗完毕。

三．灌胶

１． 准备胶6管，96孔板每孔缓冲液100－200μl。

２． 双击MegaBACE程序组中的“Instrument control Manager”。

３． 点击“Instrument control”。

４． 选择“Matrix Fill and Prerun”，点击“Start”按钮。

５． 按照MegaBACE程序提示执行其余各步骤。

四．进样

１． 测序PCR产物经纯化、吹干后每孔加Loading Solution 10μl。

２． 点击“Instrument control Manager”中的“Plate Setup”，按“New”键，在“Plate ID”一栏中输入文件名。“Electrophoresis Parameters”中分别输入各参数，如“Sample injection voltage”， “Sample injection time”，“Run voltage”，“Run time”。“Chemistry parameters”中选择“ET Terminators”。“Sample Names”中输入样本名称。“Optional parameters”中 “PMT1 Voltage”和“PMT2 Voltage”均输入750Ｖ，“Run Temperature”为44℃，“Base caller”选择“cimarron　3.12”。按“Save” 键保存文件。

３． 点击“Instrument control”，选择“Inject Sample and Prerun”。按“Start”键。

４． 按照测序仪左边窗口提示，先在Catstage放入装满水的Water Tank，再放96孔样品板，然后放回灌胶时同一缓冲液，进样结束。

５． 点击“Instrument control Manager”中的“Run Image”可看到实时检测结果。

五．冲胶

１． 双击MegaBACE程序组中的工程师管理程序“ICS”。

２． 按“Lower Catstage”和“Lower Anostage”。

３． 抽出Catstage，取出96孔缓冲液板，放入空的Water Tank；抽出Anostage，将胶换成Millipore水。

４． 按“Raise Catstage”和“Raise Anostage”，并点击“Clamplock close”。

５． 按“>”键，输入“hipress 25”并回车。

６． 点击“Clamplock open”，重复２-5步，其中“hipress 25”改为“hipress 10” 并回车。

７． 重复第６步５次，最后一次按“>”键后输入“hipress 5”并回车。

８． 点击“Clamplock open”，按“Lower Catstage”和“Lower Anostage”。

９． 抽出Catstage，在Water Tank中倒满水；抽出Anostage，６支管中也注满Millipore水

１０． 按“Raise Catstage”和“Raise Anostage”，并点击“Clamplock close”。

六．关机

１． 打开“Host Scan Controller”，输入“Bye”。

２． 关闭测序仪电源开关。

３． 关闭氮气。

４． 关电脑。

５． 在记录本上记录使用情况。