[转帖]ELISA法检测梅毒螺旋体抗体质控血清的试制及应用

ELISA法检测梅毒螺旋体抗体质控血清的试制及应用

温涛作者单位:河南省红十字血液中心检验科,河南　郑州　450012

【主题词】　质量控制;密螺旋体,苍白/免疫学;抗体/分析;酶联免疫吸附测定

【中图分类号】　R377.1;R446.622　【文献标识码】　A　【文章编号】　1009-6647(2004)03-0407-02　

　酶联免疫吸附实验(ELISA)检测梅毒螺旋体抗体,不仅灵敏度高,特异性强[1],而且操作简便,适合于自动化系统检测与微机管理。在实际工作中,由于多种因素的影响,有时会导致检测结果出现较大的偏差。在试验中建立质控,进行动态控制,对于保证检测结果的可靠性有重要的意义。

1 材料和方法

1.1 材料　梅毒阳性混合血清,本站提供;梅毒ELISA试剂盒,北京吉比爱公司生产;AT/2全自动加样器,FAME24/20全自动酶免分析系统,均为瑞士Hamilton公司产;ht3酶标仪,奥地利产;Auslab软件,北京澳斯邦公司提供。

1.2 方法　1将梅毒阳性混合血清用正常人血清作倍比稀释,用ELISA法检测各稀释后的血清,以S/CO值为2左右的稀释倍数,将梅毒阳性混合血清稀释,灭活,分装,-20℃冻存,作为梅毒质控血清。2在最佳条件下,用ELISA法检测20次已分装的梅毒质控血清,去除最高值及最低值,然后计算S/CO的均值x?,标准差s及CV。3每次试验时,融化混匀分装后梅毒质控血清,和样品一起平行检测。

2 结果

2.1 建立质控框架　依据最佳条件下的检测结果,以日期或次数为横坐标,S/CO值为纵坐标,画出x?,x?±2s,x?±3s的质控线,确定Levey-jennings失控界限。

2.2 绘制质控图　以同一批号的试剂作为一个质控单元,每次实验时,将质控血清与标本一起检测,并计算质控血清S/CO值,并画在质控架上。如以x?±2s作为质控的上下限,则该S/CO值落在x?±2s范围内,本次实验有效,如果该值落在x?±2s范围外,说明本次实验失败,应寻找原因,重复实验。

3 讨论在检测梅毒螺旋体抗体时,设立质控试验,操作过程中一旦出现变化,可造成质控血清检测结果的偏移[2],有利于及时发现问题,分析原因,以此警惕临界值标本。在建立质控图时,应注意:1本试验的选择levey-jennings质控法,以x?±2s作为质控的上下限。在全自动酶免分析系统如FAME及Ausfine,Auslab软件系统中,系统有自动建立质控图的功能。在试验中,如果发现室内质控血清的检测结果虽在质控表的控制范围内,但连续几次一直处于低值或高值范围,即一直处于平均值的一侧,应查找原因,看是否有失控的倾向。2由于不同试剂间及同一试剂不同批号之间的差异,因此若更换试剂或试剂批号,应重新建立质控图。3采用全自动仪器检测梅毒,在正常情况下,试验结果的重复性及精密性均比手工操作高,因此在用全自动仪器建立室内质控时,CV值不宜过大。应控制在20%以内。

【参考文献】[1]　苏艳丽,王书祥,王亚婷,等.RPR、TPPA、ELISA在梅毒血清学检测中的对比观察.中国误诊学杂志,2002,2(5):738-739.[2]　李介华,徐辉.TPPA在梅毒临床血清诊断和室间质评中的应用.中国误诊学杂志,2001,1(5):668-669.