[转帖]时间分辨荧光免疫分析法

时间分辨荧光免疫分析法（Time - Resolved Fluorescence，简称TRF）是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物(代替荧光物质、同位素或酶)，标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系（如：抗原抗体免疫反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等）发生后，用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度。 TRF 分析法之所以能够继放免、酶标、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法，主要取决于它所用标记物（稀土离子）的独一无二的物理性质及化学性质：标记物体积很小(为原子标记)，标记后不会影响被标记物的空间立体结构，保证了被检测物质的稳定性(尤其对蛋白质影响更小)；此方法实现了多位点标记，这不仅使检测更灵敏，也使一个试剂盒能够同时检测出两种或两中以上的项目（如PSA的检测）；目前只有原子标记才能准确的定量检测DNA、RNA。 稀土原子具有的荧光发射峰谱范围窄、激发光波长范围宽的特点，有利于增强荧光的特异性，提高分辨率；激发光和发射光之间存在较大的STOKES位移，有利于排除非特异性荧光的干扰、降低本底荧光强度；稀土离子螯合物产生的荧光强度高、寿命长，有利于消除环境中其它荧光物质的影响，并可对样品进行多次检测。 时间分辨荧光免疫分析技术具有标记物制备简便、有效期长、不污染环境、操作流程短、标准曲线线性范围宽、有效期长、应用范围十分广泛等优点。虽然问世仅十余年，但在方法学研究和应用方面均发展迅速。国外( 如：WALLAC公司)已有商品化试剂盒40余种，荧光测试仪研制已进入第三代，分析技术也已实现高度自动化。