[求]手工血常规的操作步骤及技巧

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白细胞目视计数及分类计数

一、白细胞目视计数

1．原理

用稀醋酸溶液将血液稀释后，红细胞被溶解破坏，白细胞却保留完整的形态，混匀后充入计数池，在显微镜下计数一定体积中的白细胞，经换算得出每升血液中的白细胞数。

2．试剂

2％冰醋酸

冰醋酸2 ml

蒸馏水98 ml

10g／L 亚甲蓝溶液3 滴

3．器材

（1）显微镜:普通光学显微镜。

（2）一次性微量吸管。为血细胞计数采血专用。容积为20μl 的毛细管，一人一根。

（3）计数板:计数各种血细胞专用工具。现一般都使用改良Neubauer计数板，此计数板为一优质厚玻璃板，通过H型槽将其分割成上下两个相同计数池。计数池两侧各有一支柱，将盖片盖于计数池的支柱上，盖片与计数池间就形成了0.1mm高的缝隙。在各池玻板上刻划有9mm²面积的刻度，分为9个大方格，每格长、宽1mm，面积为1mm² ，体积为0.1mm³ ，容量0.1μl。四角大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的白细胞用。中央的一个大方格，用双线划分为25个中方格，每个中方格又被单线划分为16个小方格，共有400个小方格，供计数密度大的红细胞用。

（4）盖玻片:特制的计数池专用盖片，厚度约为0.4～0.7mm，规格为24mm×20mm。

4．方法

（1）取小试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。

（2）用血红蛋白吸管准确吸取末梢血20μl。

（3）擦去管尖外部余血，将吸管插入盛0.38ml稀释液的试管底部，轻轻吹出血液，并吸取上清液洗涮3次，注意每次不能冲混稀释液，最后用手振摇试管混匀。

（4）充液，将计数池和盖玻片擦净，盖玻片盖在计数池上，再用微量吸管迅速吸取混匀悬液充入计数池中，静置2～3分钟后镜检。

（5）用低倍镜计数四角的4个大方格内的白细胞总数。对于压线的白细胞，应采取数上不数下、数左不数右的原则，保证计数区域的计数结果的一致性和准确性。

5．计算

白细胞数／升＝4个大方格内白细胞总数／4×10×20×10⁶

＝4个大方格内白细胞数×50×10⁶

式中　÷4得每个大格内白细胞数

×10由0.1μl换算为1μl

×20乘稀释倍数，得1μl血液中白细胞数

×10⁶由1μl换算为1L

6．正常参考值

成人　（4～10）×10⁹／L

新生儿　（15～20）×10⁹／L

6个月～2岁　（11～12）×10⁹／L

红细胞目视计数

1．原理

用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池，计数一定体积内的红细胞，再换算成每升血液中的红细胞数。

2．器材

（1）显微镜:普通光学显微镜。

（2）一次性微量吸管。为血细胞计数采血专用。容积为20μl 的毛细管，一人一根。

（3）计数板:计数各种血细胞专用工具。现一般都使用改良Neubauer计数板，此计数板为一优质厚玻璃板，通过H型槽将其分割成上下两个相同计数池。计数池两侧各有一支柱，将盖片盖于计数池的支柱上，盖片与计数池间就形成了0.1mm高的缝隙。在各池玻板上刻划有9mm²面积的刻度，分为9个大方格，每格长、宽1mm，面积为1mm² ，体积为0.1mm³ ，容量0.1μl。四角大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的白细胞用。中央的一个大方格，用双线划分为25个中方格，每个中方格又被单线划分为16个小方格，共有400个小方格，供计数密度大的红细胞用。

（4）盖玻片:特制的计数池专用盖片，厚度约为0.4～0.7mm，规格为24mm×20mm。

3．试剂

赫姆稀释液：

氯化钠 1.0g （起调解渗透压的作用）

结晶硫酸钠（Na₂SO ₄·10 H ₂O） 5.0g （提高相对比密和防止细胞粘连）

（或无水硫酸钠　2.5g）

氯化高汞 0.5g （防腐剂）

蒸馏水加至200 ml 。溶解后加20g／L 的伊红水溶液1 滴，过滤后使用。

4．操作

（1）取试管一支加稀释液2 ml 。

（2）用清洁干燥一次性微量吸管吸取末梢血10μl 。

（3）擦去管尖外部余血，轻轻吹入红细胞稀释液底部，再轻吸上层清液漱洗吸管2～3 次，然后立即混匀。

（4）将计数池与盖片用软布擦净，将盖片盖于计数池上。

（5）用吸管取已混匀的红细胞悬液，充入计数池中。

（6）充液后2～3min ，用低倍镜依次计数中央大方格内四角和中央5个中方格内的红细胞数。

（7）计算

红细胞数／L＝5个中方格内红细胞数×5×10×200×10⁶／L

＝5 个中方格内红细胞数×10000×106

式中：×5是5个中方格换算成1个大方格。

×10 是1个大方格的容积为0.1μl ，换算成1.0μl 。

×200 是血液的稀释倍数。

×10⁶ 是由μl 换算成L 。

报告方式：　　X．X X ×10¹²／L

5．注意事项

（1）针刺深度必须适当，吸血时不能用力过大。

（2）计数原则：数上不数下，数左不数右，以防止重复计数。

（3）正常数值范围内，两次红细胞计数相差不得超过5％。

（4）不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数。

血小板目视计数

1．原理

将血液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再计算出每升血液中的血小板数。

2．器材

（1）显微镜:普通光学显微镜。

（2）一次性微量吸管。为血细胞计数采血专用。容积为20μl 的毛细管，一人一根。

（3）计数板:计数各种血细胞专用工具。现一般都使用改良Neubauer计数板，此计数板为一优质厚玻璃板，通过H型槽将其分割成上下两个相同计数池。计数池两侧各有一支柱，将盖片盖于计数池的支柱上，盖片与计数池间就形成了0.1mm高的缝隙。在各池玻板上刻划有9mm²面积的刻度，分为9个大方格，每格长、宽1mm，面积为1mm² ，体积为0.1mm³ ，容量0.1μl。四角大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的白细胞用。中央的一个大方格，用双线划分为25个中方格，每个中方格又被单线划分为16个小方格，共有400个小方格，供计数密度大的红细胞用。

（4）盖玻片:特制的计数池专用盖片，厚度约为0.4～0.7mm，规格为24mm×20mm。

3．试剂

草酸铵稀释液

草酸铵 1.0g

EDTA－Na2 0.012g

分别溶解 合并加蒸馏水至100ml，混匀。

冰箱保存。

4．操作

（1）取清洁小试管一支，加稀释液0.38ml。

（2）准确吸取毛细血管血液20μl ，混匀，溶血后再混匀1min 。

（3）取上述混匀的血小板悬液1 滴，注入计数池内，静置10～15min 。

（4）用高倍镜计数，中央红细胞计数区分5个中方格内血小板。

5．计算

每升血中血小板数=5个中方格内的PLT×5×10×20×10⁶

报告方式：X．XX×10⁹／L

6．注意事项

（1）血小板稀释液配好后应过滤，防止微粒和细菌污染。试管及吸管也应清洁干燥。

（2）针刺应稍深，使血流通畅。拭去第一滴血后首先采血作血小板测定，操作应迅速，防止血小板聚集和破坏。采取标本后尽快计数，以免影响结果。

（3）血液加入稀释液内要充分混匀， 滴入计数池后一定静止10～15min。室温高时注意保持计数池周围的湿度，以免水分蒸发而影响计数结果。

（4）计数时光线要适中，不可太强，应注意有折光性的血小板和杂质、灰尘相区别。附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏掉。

7．临床意义

正常参考值：（100～300）×10⁹／L

血小板减少（＜100 ×10⁹／L） 见于

（1）血小板生成障碍：再障、急性白血病、急性放线病；

（2）血小板破坏增多：原发性血小板减少性紫癜（ITP）、脾功能亢进；

（3）血小板消耗过多：DIC ；家族性血小板减少：巨大血小板综合征等。

血小板增多（＞400 ×10⁹／L） 见于

（1）骨髓增生综合征：慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症等；

（2）急性反应：急性感染、急性失血、急性溶血；

（3）其他：脾切除术后。

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