不同条件保存血液对激光法检测红系参数的影响[转帖]

　摘要:用Technicon H·3血球计数仪对不同温度， 不同保存时间的血液标本进行检测，结果表明：用激光法检测醛化红细胞,其MCV等参数的稳定性高于普通电阻法血球计数，血液标本在20℃条件下保存红系各参数最为稳定，24小时内无明显变化;4℃次之，而在30℃条件下放置不能超过4小时。 　　关键词：血液分析仪、激光法、红细胞参数。 　随着自动化血球计数仪的日趋先进，不断涌现新的检测参数应用于临床。德国Technicon H·3全自动血球计数仪用激光法直接检测醛化成球形的红细胞[1]，得出RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、HDW等参数。 为了加强分析前质量控制，本文探讨各种条件下保存EDTA-K2抗凝静脉血，其红系各参数的变化。 　　　　　　　　材料与方法 1、仪器：德国Bater公司生产的Technicon H·3全自动血液分析仪, 实验前用该公司提供的高、中、低三浓度标定血校正。 2、试剂： 　 (1)、仪器所用均为原装进口试剂。 　 (2)、抗凝剂：EDTA-K2、37℃烘干， 一份抗凝剂加五份新鲜静脉血混合抗凝。 　　3、方法： 　　　　静脉取血20ml，立即测定后将血倒入内有已烘干抗凝剂的锥形瓶，混匀抗凝并24小瓶分装，分为三组，分别保存于4℃，20℃，30℃温度下,于30分钟，1、2、4、8、12、18、24小时测定,每个标本平行检测三次、 取平均值、并计录结果。 　　　　　　　　 结 果 结果见表 　根据上表可看出，4℃时，24小时内RBC、HGB、MCH、MCV、RDW 测定值基本保持恒定，变化小于3%，其中RDW变化＜2%， 说明红细胞大小不均一性随时间延长没有改变。HCT，MCV变化为4%，呈上升趋势。MCHC变化为3.7%略呈下降趋势,但总体变化不明显。 　20℃时，各参数稳定性优于4℃时相应测定值，基本无变化。 　32℃时，RBC较稳定，其余各指标波动较大，HCT、MCV、RDW明显升高， 变化率分别为10.7%、8.6%、7.7%。MCH，MCHC呈下降趋势，变化率分别为5.6%、13.2%。HDW反映红细胞血红蛋白分布宽度，为红细胞间血红蛋白浓度的比较[2]。24小时内不同温度下HDW波动都较大，在8、12小时所测值为最低，而后24小时又回升，没有明显规律。 　　　　　　讨 论 　　MCV是指红细胞平均体积，其随时间延长发生改变， 主要与抗凝血标本渗透压有关，其渗透压比未加抗凝剂时增加了约60mOsm/L，红细胞停留在一个高渗环境中，细胞内水分子与细胞外溶质相互交换，使细胞内渗透压随之升高。用普通电阻法计数仪测定时，稀释液的水份进入细胞中，使之体积增大。三种温度下MCV在8小时内变化已非常明显，（4小时处达高峰，而后趋于平稳）[3]，而用激光法测定4℃下保存的标本,其MCV值24小时内变化不明显，20℃、30℃下也是在8小时时才出现变化，且变化率分别为2.0%和3.5%。 由此可说明红细胞的醛化固定过程可一定程度上防止细胞突然进入低渗环境时因水分子渗入而造成体积的改变。该法测MCV的优越性高于电阻法。 　　H.3血球计数仪HCT值是由MCV计算得来[4],因此随MCV升高，HCT 呈相关性升高。30℃时，24小时MCHC从8小时时开始发生变化,24小时降低了13.2%,可能与压积变化有关。RDW升高7.7%，可能因为温度较高，时间过长， 红细胞部部分胀大，发生体积异质性变化。但4℃,20℃保存变化不明显。 　　综上所述，血液标本保存于20℃下各参数最稳定，30℃下保存4 小时内参数变化不明显，4小时后波动较大。 　　　　　　表1、4℃下不同时间红系各参数测定结果 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━项目　 　即　　　1　 　　2　 　　4 　　　8　 　　12 　　　18　 　　24 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━RBC 3.79 3.76 3.74 3.69 3.75 3.70 3.82 3.71 HGB 111.0 110.0 111.0 110.5 110.7 109.5 112.0 108.0 HCT 0.321 0.318 0.316 0.308 0.322 0.312 0.321 0.308 MCV 84.7 84.5 84.4 83.6 85.9 84.4 84.1 83.0 MCH 29.2 29.2 29.7 30.0 29.5 29.6 29.5 29.2 MCHC 345.5 346.0 352.0 358.5 344.0 351.0 350.0 351.0 RDW 0.143 0.142 0.143 0.144 0.144 0.144 0.145 0.143 HDW 0.273 0.272 0.279 0.286 0.255 0.253 0.268 0.279 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 表2、20℃下不同时间红系各参数测定结果 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━项目　　即 　　　1　 　　2 　 　4　 　　8　 　　12　 　　18　　 　24 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━RBC 3.74 3.73 3.73 3.72 3.78 3.76 3.91 3.70 HGB 111.0 111.5 111.0 112.0 111.5 111.0 114.0 109.3 HCT 0.316 0.313 0.315 0.312 0.326 0.325 0.336 0.317 MCV 84.7 84.1 84.3 83.7 86.35 86.65 86.7 85.3 MCHC 350.5 354.0 351.5 357.7 341.0 341.0 338.0 346.0 RDW 0.143 0.142 0.143 0.142 0.143 0.143 0.144 0.144 HDW 0.271 0.276 0.274 0.279 0.248 0.244 0.249 0.256 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 表3、30℃下不同时间红系各参数测定结果 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━项目　　即　 　　1　　 　2　　 　4　 　　8　　 　12 　　　18　　 　24 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━RBC 3.75 3.76 3.68 3.69 3.79 3.785 3.90 3.83 HGB 113.0 110.5 111.0 111.0 110.0 113.0 112.0 108.0 HCT 0.318 0.318 0.309 0.310 0.331 0.334 0.352 0.352 MCV 84.5 84.6 84.0 84.3 87.4 88.3 90.4 91.8 MCH 30.1 29.4 30.1 30.0 29.3 29.8 28.8 28.3 MCHC 355.0 348.0 359.0 356.5 332.5 338.0 318.5 308.0 RDW 0.142 0.143 0.143 0.142 0.144 0.143 0.152 0.153 HDW 0.270 0.270 0.274 0.267 0.238 0.237 0.265 0.273 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ (1解放军总医院 2吉林白山市三林职工医院) 参考文献 1、Tycko DH,et al: Flow-cytometry light scattering measurement of red blood cell volume and hemoglobin concentration. Applied Optics 24(9):1355-1365(1985) 2、Mohandas N,Kim YR,Tycko DH,Orlik J,Wyatt J,Groner W:Accurate and independent measurement of volume and hemoglobin concentration of individual red cells by laser light scattering.blood 68:506-513(1986) 3、马骏龙，等。红细胞体积及测定的影响因素。军医进修学报1992;13(1):86。 4 、 Wintrobe MM: The size and hemoglobin content of the erythrocyte.J Lab Clin Med 17:899-911(1932)