激光技术应用在血液分析仪的最新进展[转帖]

一).自从发明了电阻法，这几十年来现代科学技术的迅速发展，加上微型处理器和激光的应用，令血球分析仪的工作原理也从单纯的电阻法得到了突破性的进展。目前临床上普遍使用的血球分类的工作原理有以下几种: 细胞分类 计数孔口 试剂 数据来源 1. 基本三分类 1. 电阻法 3 2个 3种 270管道直方图 2. 五分类 2.1 电阻法+射频 5 2 4种 270管道直方图 +光散射法 2.2 电阻法+射频 5 4 5种 270管道直方图 +Eos试剂+Baso试剂 2.3 电阻法+光散射法+ 5 1 5种 270管道直方图 Baso试剂 3. 融合流式 3.1 多角度激光偏振 5 1 3种 每个细胞; 细胞仪原理 散射法(MAPSS) 10，000白血球 3.2 电阻法+多角度激光 11 2 4种 每个细胞; 偏振散射法+动态监 <10.000白细胞 察流速数目 或30.000红血球 就最新的MAPSS，多角度激光偏振散射法(在这里简称激光法)，有以下介绍: 二). 流式细胞仪定义 “在过程中每一颗血球排成一线，被一个或多个感应器量度其中所展示的物理性或化学性现象”。 三). 流动液聚焦集束方法(Hydrodynamic Focusing)用在流式细胞仪上 由两边带动液夹着当中的血球，令血球排成一线逐个进入量度区域，排除血球回流干扰或血球重复计算，亦能扩大线性范围(WBC:0-250K/μL)。就像在三条行车道上，两旁是摩托车，中间是自行车，摩托车的速度跟自行车不一样( 在物理上Sheath带动液也跟样本流动速度不一样，造成Laminar Flow，或一个圆的空心，血球样本在内里流动)。然后，三条行车道收窄变成一线， 那么自行车便顺利地在中间通过那段收窄处。而每一辆自行车的大小，复杂性都被记录下来。 四). 最新的激光法(MAPPS) 最新的激光法是融合了流式细胞仪定义和流动液聚焦集束方法，量度白细胞 作者单位:美国亚培公司 对激光造成的高、低和直角的散射角度，加上量度一个直角的消偏振光的角度，作白血球分类和同时量度数目，又由电阻法复数白细胞数目。 分类的原理:约10.000颗血球经过激光区域，每颗细胞从0°、10°、90°直角和90°直角消偏振光的数据会被记录下来。 　(1) 0°表示大小;10°表示细胞内里的复杂性，例如:有粒的、多核的、10 °讯号就比较强;90°直角表示分叶情况和90°直角消偏振光用来显示嗜酸性细胞。电脑从90°直角与10°分出多核细胞和少核细胞，又由多核细胞里认出嗜酸性细胞会有较强的90°直角消偏振光，因而与嗜中性细胞分开。 　(2)之后又由0°和10°，利用浮动界标分出淋巴、单核及嗜碱性细胞，而白细胞的数目也由0°找出，故分类及数目的结果是在同一个步骤里完成， 这是跟其也融合多种技术，但不是利用流式细胞仪原理的血球分析仪相异的地方。 (3)这最新的90°直角消偏振光的应用，跟其它用光散射法的仪器不一样。 通常来说，其它只用高或低散射角度，而未有用消偏振光技术。这在临床病例里，例如爱滋病，用这新的方法准确报告嗜酸性细胞。 (4)共它白细胞分类，除了基本的五分类外，多角度激光法也提供了其它4 种分类及数目，指示在病理一些特别的报警，提供化验人员这些资料，以便比较从人手推片得出来的结果。这报告亦提供用户一些可能存在的病理成因。 例如: 异常淋巴%及# 胚细胞%及# 未成熟粒细胞%及# 带形核嗜中性细胞%及# 五). 免受干扰的白血球分类 我们知道白血球分类的干扰，包括有核红细胞干扰淋巴或有一些抗溶性红细胞被误为淋巴，影响分类及白细胞数目。最新的激光技术揉合了电阻法的强项，打开了一个新的局面，为技术人员提供可报告的结果，省却很多人手工夫作修正之用。 例如: 特殊病例 测定结果 报告采纳 解释 　　──── ─────── ─── ────────────── 有核红细胞 电阻法>激光法 激光法 电阻法误认有核红细胞为白细胞 抗溶性红细胞 电阻法<激光法 电阻法 抗溶性红细胞被电阻法的溶解 试剂克服; 激光法亦会报警有 过多细小细胞在淋巴附近区域 为处理抗溶性红细胞干扰，同常用比较强的溶解液或延长样本孵育时间，故揉合了电阻法的激光法分析仪能给予正当结果。 因在激光法没有溶解液， 只用Sheath带动液，保持细胞在原始状态，故单用激光法的仪器只会报警有可异发现。之后，用户可以用另外一个进样模式，就是“延长孵育时间”，进行操作。这结果与电阻法结果配合。 电阻法误认有核红细胞为白细胞，故电阻法的报告会比激光法高，基于这一差异，找出有核红细胞的估计就可以用以下程式: 电阻法WBC-激光法WBC ％有核红细胞= ━━━━━━━━━━━━━━━━ ×100 (在100个白细胞里) 激光法WBC 六). 网织红细胞的激光散射法分析 多角度激光法除了应用在基本白血球五分类，也给予定量的4 个白细胞病理分类(IG，Band，Var Lymph 及Blast)，并且在红细胞分析也发展了一些应用。 在某些医院，发现红细胞参数异常，需要人手推片的样本可能占较多数，多角度激光散射法除了提供RBC参数外，亦给予有核红细胞的分类， 现在亦应用激光散射法量度用New Methylene blue染的网织红细胞对激光产生的散射现象，提供更全面红细胞参数给用户参考。预稀释步骤` 孵育时间及样本量亦适合常规操作，见比较: 多角度激光法 其它牌子 预稀释步骤 1步 2步 样本量作量度 20UL 2UL 对孵育时间要求 有弹性 无弹性 急诊处理 可以(<20分钟) 不可以 七). 激光散射法对白细胞分析影响 (1) 扩大线性范围 由于用流动液聚焦集束法令到每一颗细胞到达激光区作计数及量度，将传统电阻法的线性范围0-99K/μL扩大至0-250K/μL， 省却很多用人手稀释的工夫和带来可能的操作误差。对一些特别多白血病的医院带来更适合的应用。 (2) 化疗后的愈合监察或在低白细胞时的应用 因传统电阻法有较高的背景噪音干扰，令到白细胞若低于1.0K/μL的时候，分类及数目就不可靠， 要用人手复查这个低白细胞的标本， 往往要在片上数上400至800粒细胞。这在临床监察上，带来不便。而激光散射法基本上是融合了流式细胞仪将每一个细胞量度及计数，在很低的白细胞样本里，也能提供报告。尤其是在进行移植前，已用重药将白细胞降低于1.0K/μL方作进行移植，而移植后亦要监察中性细胞的上升，从而判断移植成功和应采取何种隔离措施对待白细胞过低的病人。故在这个复杂的监察阶段，多角度激光散射法带来较多的资料给医师。同时，骨髓样本已可以用在这多角度激光散射法血球分析仪上。 (3) 白细胞分类的浮动均值法质控(X-B) 除了已有的3个红细胞参数用X-B监察，激光法带来另外7 个观察正常样本的白细胞分类的走势图作质控之用。这是首个血球分析仪将X-B 应用在白细胞上的质控程式，令到分类的准确有多一层的品质保证。 (4) 随机取样的质控操作程序 由于现时仪器大多都附有自动进样设计，而质控物又用试管盛载，故加上数码后，便能将质控物安排在标本中，作随机取样操作。对质控带来一定的便利和能随着化验人员的要求每日作多个质控物监察，观察品质或结果有否飘移。 (5) 不同进样形式可用定标液彼此调较 众所周知 ，以不同进样形式的检测结果存在一定的差异，例如， 以开盖式检测结果作为基础，以实际值作为定标基准，这样虽然可对开盖式精确定标，但用该标准测量封盖式样本，会使结果出现一定的误差，反之亦然。故多角度激光散射法血球分析仪分别以开盖式和封盖式的检测结果作为基础，以实际值作为定标基准，分别对开盖式和封盖式精确定标，使两者结果与实际值均非常符合，自然，两者的相关系数亦相当高，这样可以避免临床上病情的误诊断。如果有些医院对门诊病人用开盖式进样，之后该病人入院后用封盖式进样，该病人的前后检测结果亦同样具有较高的比较价值。 (6) 两种技术报告白细胞数目，双重信心。 当白细胞进入流式细胞仪的样品杯，会被动态监察流速与数目，故同时间仪器能报告白细胞的分类与数目。而电阻法亦会复查白细胞数目。仪器亦备有2 个定标标准值范围在这两个技术上。故每一个样本的白细胞数目是已经被两次检定。给予额外的信心保证。