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自1935年Quick创建凝血酶原时间（prothrombin time,PT）测定方法以来，迄今仍然 是检查外源凝血系统诸因子及相关抑制物的重要筛选试验，PT也是目前口服抗凝剂治疗的主要手段。但是，PT测定受多种因素影响， 必须对它进行标准化和质量控制，以提高PT检测的精密度、准确度和可靠性。
（一）凝血酶原时间（PT）的标准化问题
1、组织凝血活酶标准化：应用的国际参考品（international reference preparation IRP），有下列几种：
（1）单一组织凝血活酶国际参考品：是一种组织提取物的生理盐水悬液制剂。WHO在英国使用的统一标准的"英国比较凝血活酶"（ British comparative thromboplastin,BCT）为基础，制备WHO的原级凝血活酶参考品（primary reference preparation），如人脑组织凝血活酶，编号67/40。同时又以BCT67/40为基础标化了次级参考品（secon dary reference preparation）。如牛脑组织凝血活酶，编号为68/434；兔脑为70/178。后来WHO还公布了一些次级组织凝血 活酶参考品，如人脑或胎盘制剂，如BCT/253；兔或兔、猴组织混合制剂，如RBT/79等。
（2）复合组织凝血活酶国际参考品：它是组织提取物的生理盐水悬液中加入适量的纤维蛋白原、因子V 和氯化钙组成的制剂，如牛组织凝血活酶OBT/79等。
目前世界各国都广泛应用WHO的这些参考品来校正本国或本地区制备或生产的组织凝血活酶参考物。这样使世界范围内有了多种组 织凝血活酶参考品。
2、组织凝血活酶工作制剂（working preparation,WP）的国际敏感度指数（international sensitivity index,ISI）
由于不同组织凝血活酶对凝血因子的敏感性不同。为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一 个共同的敏感性指标。这就需要通过自制的试剂与国际参考品（IRP）进行比较，然后得出一个校正值。具体的方法如下：
（1）用国际参考品（IRP）标定国家、地区或本实验室的参考制剂（reference preparation,RP）。
（2）用实验室参考制剂（RP）标定工作制剂（WP）。
1）标本：2份正常人血浆和6份口服抗凝剂达6周的患者血浆，连收10天，共60份标本。
2）测定：按一定顺序进行测定，每份标本重复测定2次。将PT测定的结果（秒）点在双 对数坐标纸上，横坐标代表WP的PT测定结果，纵坐标代表RP的PT测定结果，画出最佳的各点拟合直线，得出定标曲线，通过WP /RP比值，或回归方程求出斜率b。
3）计算WP的ISI值：ISI值愈接近于1.0，表明组织凝血活酶试剂愈敏感，因此，生产和出售组织凝血活酶试剂的厂商，必须 在产品上标有ISI。
3、PT测定结果的报告方式：理论上，无论何种组织凝血活酶，只要标有ISI，就可与国际参考制品进行对比校正，并可用同一种计 量单位报告。1985年ICSH和ICTH推荐以PT监测口服抗凝剂的报告方式是国际正常化比率（international normalizde ratio,INR）。
INR的计算公式如下： 在用INR后，各种敏感性不同的组织凝血活酶均可得到相同的INR值。
4、仪器特有有ISI：上述PT根据报告方式适用于手工法（试管倾斜法）测定PT。但是手工法与仪器法以及仪器法与仪器法测定P T的INR之间，仍有差异。研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三台自动化仪器上，使用同一种ISI为1.12的Thromborel S试剂，测定PT的均值分别为10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值计算INR，得出的数值也存在着不同程度 的差异。为此，专家们提出建议：同一组织凝血活酶试剂用于不同仪器时，可用所谓的"仪器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或称区域性ISI（Local ISI）来计算INR。每台仪器所使用的凝血活酶试剂都应该有特定的ISI值，重新标定ISI值的做法是购买标有INR的冻干血 浆，然后在自己的仪器上再标定所使用凝血活酶试剂的ISI值，这样才可使病人的INR具有可比性。
（二）凝血酶原时间（PT）的推荐方法
[原理]
将组织凝血活酶（主要含组织因子和脂质）和钙离子，加到枸橼酸抗凝血浆中，在37℃保温，测定血浆凝固时间，即为PT。PT 主要用于筛选检测外源凝血系统的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相关因子的抑制物的试验。
[标本来集和处理]
1、标本采集：用硅化或塑料注射器抽取空腹静脉血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸橼酸钠抗凝剂的硅化或塑料试管中 ，轻轻混合均匀。
2、标本处理：以2000～2500g，离心15分钟，分离乏血小板血浆，并在24小时内完成试验。
3、正常对照血浆：选择正常健康男性和女性各lO名以上，年龄在18～45岁。但不能是妊娠、月经期、哺乳期和口服避孕药的妇女 ，采取的血浆冰冻干燥保存或-80℃保存。
[试剂]
1、抗凝剂：109mmol/L枸橼酸钠液（相当于含二分子结晶水的枸橼酸钠32g/L）。
2、凝血活酶试剂：市售商品，应标有ISI、批号及有效期。冻干者应按说明书加指定的缓冲稀释剂复溶。
3、氯化钙（CaCl2）溶液：为25mmol/L。（目前有些商品试剂已将凝血活酶液与氯化钙液混合好，可不必另配CaCl2 液）。
4、质控物：正常及异常对照血浆
5、配制试剂用水必须符合1级纯水的标准。
[仪器]
1、手工法：秒表，保持37℃±1℃的恒温水浴箱或电热块。水深能浸试管3cm以上，表面无划痕的10×mm拭管。经标准的0. 1mL移液管。经校正的秒表。
2、仪器法：各种自动或半自动血凝仪，严格按说明书操作。
[操作步骤]
1、手工法
（1）测定温度36.5～38.5℃，上述各试剂及被测血浆，均应预温至此一温度，但凝血活酶试剂预温不可超过30分钟，血浆预 温一般不宜超过10分钟。
（2）所用试管及加样器等接触血浆的器具均为塑料或硅化玻璃管。
（3）吸取枸橼酸抗凝血浆0.1mL，加入一小试管中：加入凝血活酶试剂0.1mL混匀后置37℃水浴中。再加入25mmol/ L CaCl2液0.1mL，（也可先将凝血活酶试剂与CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混匀并开动秒表：试管仍浸于 水浴中，至约10秒钟时，自水浴中取出，在纱布上迅速擦去试管外水滴，在明亮处不断倾斜试管，在流动状态下观察有无纤维蛋白形成 。一旦见到纤维蛋白（同时将出现液体流动减慢），立即停表，记录时间。每次测定二管，按平均数报告。本试验的最后混合液其pH应 为7.2～7.3，大部分商品凝血活酶试剂均用含缓冲液的溶液配制。
（4）每批均同时做正常和异常对照，方法应与测定标本完全相同。
[报告方式]
1、以PT的秒（S）数报告（最接近的0.5秒）
2、以患者血浆（S）/正常对照PT（S）的比率（PRT）报告。
3、在口服华法令类抗凝药物治疗监控时，应报告国际正常化比率（INR）。大部分自动化仪器可根据所测的PTR和凝血活酶试剂的 ISI，自动算出INR。手工法可根据下列公式，用一计算器直接计算：
INR计算公式为：INR=PTRISI 或INR=antilog（ISI×lgPTR）
PTR为所测PT的比值，ISI为其幂指数，即PTR的ISI次方所得数值为INR。
Poller设计了一个简便的列线图，在取得PTR和ISI值后，即可从图上直接查找出INR值，十分便利，国内已有介绍。
ICSH规定，不再用稀释曲线或百分比（活动度）报告。
[参考值]
因仪器/试剂不同，会得出不同结果，故很难统一规定参考值。各实验室应根据自己的仪器、试剂等条件，自行测定一批健康人，建 立参考值。此后至少每年或当条件有变化时，根据新的条件，重新建立。参考值PT测定的一切条件均应与患者血浆PT测定相同（包括 采血、容器、抗凝剂等）。健康供血者应选至少20个18～55岁的男性和非妊娠、月经期女性，不可服药，在平静休息状态采血、以 减少个体差异（有条件时，可测一批老年人和小儿，分开统计）。同时应分开几天采血和测定，以减少天间差异。测定结果经统计学处理 ，计算标准差：以两个标准差（2SD）或95%可信限作为参考范围。对于三个标准差是正常还是异常，需结合具体情况进行评估。从 统计学上讲，其中有些人是正常的。用以上标准，病人（PT异常）则很少会遗漏。
【临床意义】
凝血酶原时间延长见于：凝血酶原、V、Ⅶ、X因子缺陷，纤维蛋白原明显减低，抗凝血酶物质增加，严重肝功能损坏，新生儿出血症，胃肠道紊乱致使维生素K吸收不良，阻塞性黄疸。
WHO规定用Warfarin（法华林）时INR值允许范围为：
手术前处理：（非髋离手术1.5～2.5，髋部外科手术2.0～3.0）；预防静脉血栓；2.0～3.0；活动性静脉血栓；（反复发生的静脉血栓，肺栓塞及其预防2.0～4.0）；预防动脉血栓和栓塞包括心脏瓣膜（机械瓣）的手术：3～4.5。
临床上用注射维生素K前后测定凝血酶原时间用来做肝源性黄疸和阻塞性黄疸的鉴别。
来源医学检验信息网
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