分光光度技术的定性和定量方法

一、分光光度技术的定性方法
对待测物质进行定性分析的依据是最大吸收波长λmax 和摩尔吸光系数ε。
1．最大吸收波长λm ax 方法
将不同波长的光透过待测物溶液测定其吸光度，用波长和吸光度作图可找出最大吸 收峰，其相应的波长为最大吸收波长λmax ，和标准品的λmax 相比较，可对待测物质进 行定性分析。
2．摩尔消光系数ε方法
准确配制待测物质的溶液，在最大吸收波长处测定其吸光度值，根据Lambert－Beer 定律ε＝A／（L ×C），可计算出待测物的ε，和已知ε的标准液相比较，可对待测物质进 行定性分析。

二、分光光度技术的定量方法
1．标准曲线法
根据Lambert－Beer 定律，液体的浓度在一定范围内与吸光度成正比关系。配制一 系列浓度的标准品溶液 （浓度应包含高、中、低浓度范围），按标本处理方法作相同处 理，在特定波长下测定吸光度，以标准液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，按最小二 乘法的原理，将对应各点连成一条通过原点的直线，这条直线称为标准曲线。待测溶液 测定吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。
制作和应用标准曲线时应注意下面几点：
（1） 测定条件发生变化时 （如更换标准品和试剂等），应重新绘制。
（2） 标准品应有高的纯度，标准液的配制应准确。
（3） 当待测液吸光度超过线性范围时，应将标本稀释后再测定。
（4） 标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致。
2．比较法
已知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，同时测定标准管和标本的 吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计算出标本的浓度，计算公式为：
Cu ＝ （A u ×Cs）／As
其中Cu 和A u 为标本管浓度和吸光度，Cs 和 As 分别为标准管浓度和吸光度。用标 准品法定量时，标准品的浓度应尽量和标本管浓度相近。
3．其它分析方法
包括差示法、多组分混合物分析和利用摩尔吸光系数分析等方法。