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各位大虾:请问速率法A与两点法、终点法的原理各是什么?区别在哪里?迷惘中,请指教!
1。速率法,有叫动态法,仪器连续检测生化反应过程中的吸光度变化,目的是得到吸光度变化速率。酶活性的检测大多用此方法。检测底物的是下降反应,又叫负反应,例如:ALT AST 等;检测生成物的是上升反应,又叫正反应,ALP。
2。终点法。仪器检测生化反应某一时间点的吸光度值,目的得到反应溶液的具体吸光度值。常见的有GLU、TP 、ALB 等
3。两点法。仪器检测生化反应两个时间点的吸光度值,第二点减去第一点,得到吸光度的差值,检测底物的差值为负,检测生成物的差值为正,例如,中生试剂的肌酐项目Cr。
生化仪无论半自动或全自动,都有实验参数设置,只要按试剂说明正确设置,再照试剂说明做实验就行了。使用分光光度计另当别论。
两点法:又称为一级动力学法、固定时间法等,指在一定的反应时间内,反应速度与底物浓度的一次方成正比,即v=k[S]。由于底物在不断的消耗,因此整个反应速度在不断的减小,表现为吸光度的变化越来越小。这类反应达到平衡的时间很长,理论上可以在任意时间段进行监测,但由于血清成份复杂,反应刚启动时反应较复杂,杂反应较多,必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。
两点法不是什么终点法中的两点法,准确地说它应该属于动态法范畴,一种带标准的动态法
查了一下,就是上面的,还是不能完全理解,仪器连续检测生化反应过程中的吸光度变化,这个反应过程是检测多少个点?譬如在日本7600上ALT是21点到31点是21、22、23、24..............31这11个点的吸光度变化。TP是15点和34点怎么理解?是34点的吸光度减去15点吗?
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