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随着《医疗机构临床实验室管理办法》三级甲等医院考核检查表的出台以及越来越多的临床实验室申请《医学实验室质量和能力认可准则（ISO 15189：2007）》认可，检验结果的溯源性也越来越被实验室重视。继2009年在定向点金上介绍过Roche诊断非均相免疫测定溯源性的过程后，这次继续和大家分享罗氏诊断公司临床化学和均相免疫检测的标准、标准化和可行性。
几乎所有的分析物，确定溯源性的程序归纳如下：用参考方法、或以参考品为校准品检测人血清。公司一级校准品以具有这些参考方法参考值的人血清标准化。在罗氏诊断分析系统上以公司一级批号校准品校准后确定市售校准品和控制品定值。这样保证了在这些系统上确定患者结果值的溯源性。每个分析仪平台（Modular、cobas）各自对每个方法以相同方式相对于参考实现标准化。
1、参考标准化
标准化的目的是确保患者血清在罗氏诊断分析系统上检测得到的结果和直接用参考方法、或使用参考品为校准品的检测结果一致。标准化的各要素见图1。
图1
患者样品总是使用于参考标准化中。依据方法使用各个供体血清或混合血清。
这些人的样品或者直接用参考方法检测；或者在罗氏诊断分析系统上，经参考品校准后检测得到参考值。以后它们作为参考血清组（相当于应用校准品）用于公司一级校准品校准值的定值。使用时，在需要标准化的分析仪上检测，用具有初步校准品值的通常公司一级校准品批号进行校准。然后，通过方法学比较或使用各个检测值的平均离差等方式，为公司一级校准品设定最终值。
1.1. 相对于参考方法的参考标准化
一定要在认可的参考检测实验室，如ZRI（Reference Institute of Bioanalysis）可使用参考方法，如ID-MS参考方法检测获取参考值。使用这样的参考方法一般检测5~10份患者混合血清，混合血清内不可添加任何处理过的物质，也不可用氯化钠溶液稀释。以确保在参考标准化中使用的样品，和天然的患者血清没有任何差别。
人混合血清分装后冰冻于-70℃，在参考实验室（参考方法）和7个外部实验室（使用罗氏诊断分析仪系统）同时对混合血清平行检测。通过方法学比较（线性回归）对公司一级校准品值标准化。
1.2. 相对于参考物质的参考标准化
若以参考物质进行参考标准化，通常在常规实验室检测各个供体的新鲜血清。一般，在4个实验室总共检测50例患者血清，每个实验室各自作2～5批检测。严格地在分析仪的两个通道上进行检测。一个通道用参考物质校准，另一个用公司一级校准品校准；每批都使用一个批号的试剂。每批中还对一个未知样品和两个校准品进行检测。使用方法学比较（Passing,Bablok回归统计）进行校准值的标准化。
2、常规标准化
由于公司一级校准品具有和常规校准品相同的基质，单独使用公司一级校准品的校准，得到的常规校准品校准值预期不会和使用人血清校准得到的值有差异。
但是，为了确认这个假设和认可常规标准化的程序，由外部实验室用两个组合的系统（分析仪平台/校准品/试剂组成）进行检测。检测时使用相同批号的试剂，一个组合的系统使用公司一级校准品进行校准、另一个组合系统使用需要确认的某批号产品校准品校准后，对一些患者样品（分析物含量分布于相应范围）进行平行检测。为了肯定该批号产品校准品和公司一级校准品在这个程序中的可比性，方法学比较的直线回归的截距必须接近0，斜率和1.00间的差异在规定的限值内。
2.1. 常规标准化的跟踪控制品
公司一级校准品的储存温度为-70℃，可以使用约2～3年。在对一级校准品重新用参考方法标准化予以再次确认对每批产品C.f.a.s.校准品定值的同时，检测两个不同漂移/跟踪控制品组成监视系统。一个控制品是储存于-70℃的产品校准品，以确保在整个储存期间有最好的稳定性。冰冻的（-70℃）天然人血清为第二个跟踪控制品。
这个控制用的混合血清来源和罗氏诊断生产过程使用的混合血清无关。
两个跟踪控制品至少可以使用2年以上。如果要变换这些控制品，应将近期的和新控制品作平行检测。依据不确定度的计算，确定允许的可接受范围。
若有一个跟踪控制品超出了允许范围，应开始重新标准化。若重新标准化的C.f.a.s.值超出了预定限值，公司一级校准品的定值应以此调整。这些预定限值和分析物有关，当所有在有效期内使用的产品批号校准品和控制品定值出现显著差异时，必须进行靶值的重新设定
2.2. 对参与标准化和靶值设定的实验室质量要求
罗氏诊断公司提供的校准品和控制品定值，都以临床实验室对患者临床化学项目的检测值进行校正确定的。所以，参与确定控制品和校准品定值的实验室质量极其重要。
参与标准化的实验室通常是独立的外部实验室，也检测患者样品，接受国家机构的质量控制。例如在德国，质量控制包括内部质量控制、定期参加循环检测、和参加德国医学委员会导则要求的室间质量评估。参与定值的实验室分布于欧洲和美国，都接受相似的质量控制。实验室定期接受审核。
确定靶值的质量要求需要符合GMP导则，公司和靶值设定实验室间按照标准要求签订合作协议。参与的实验室被要求检查设备、人员、检测性能、保存记录等是否符合文件要求。各实验室获得的原始数据，须进行抽样检查，然后必须将数据送给罗氏诊断公司确认。进行每个靶值设定时，实验室将收到详细说明，要求按此实施，例如：关于样品稳定性（通常较正式说明书考虑的要短）和各个项目检测的特点。
2.3. 在标准化程序中使用的分析仪
对于靶值设定和常规标准化中使用的分析仪类型、校准品和试剂等，程序如下。
所有实验室应使用相同批号的公司一级校准品（master calibrator），但是试剂批号和分析仪型号可以不同。这意味着，在罗氏分析仪平台（如：Modular 血清工作站、cobas 系统）上分别具有校准品、试剂和定值的确认组合。但是，若已知分析仪不同，应确定各自的靶值，并专用于这些分析仪系列。这确保了人样品在所有的分析仪上得到相同的结果。校准品与控制品间的基质差异、和天然人样品与这些加工过的校准品和控制品间的基质差异，会导致结果的差异。所以，在一个检测系统中，如：罗氏Modular系统和cobas系统，方法相同，不同系统的校准品定值不同，确保了患者结果具有一样的回收。
3、离子选择性电极（ISE）
罗氏系统上的ISE补偿（Na、K、Cl）的参考标准化是特殊的。使用两个水标准液（类似一级标准）进行校准。虽然，ISE电极的分析物回收对于含有蛋白的样品和水样品有差异。所以，用水溶液建立的校准曲线必须用表现上和人血清相同的物质作补偿（校准曲线的平行位移）。
为了使人为的补偿向参考系统靠拢（火焰光度法或电量滴定法），每次在7个实验室，分别使用参考方法和在罗氏分析仪上，检测10个人混合血清进行比较。在罗氏分析仪上检测时，使用公司一级校准品（master calibrator）、ISE标准、和补偿物作校准，补偿值为临时的。检测时使用任何批号的试剂。
将每个样品在罗氏分析仪上检测的中位数，和参考方法中位数作比较。由于电解质浓度的生理分布很小，10个样品的所有各个离差的平均值，用作补偿校准值的校正因子。
4、溯源性和不确定度
标准化和值设定的方法完全遵守法规要求，特别是IVD导则“体外诊断医学产品－检测生物样品中的量值－对校准品和控制品值设定的计量溯源性”〔ISO 17511〕。图1显示从参考系统下到客户系统的流程。
我们依据检测不确定度的导则，计算校准品定值不确定度。这和客户在样品检测时的最终不确定度不矛盾。后者还要另外涉及校准品和样品检测的方差。但是，校准品不确定度在最后样品的不确定度中肯定是重要的组分。
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