Zenyth 1100/ Zenyth 3100多功能酶标仪的应用
1．细胞生物学
1.1 监测微生物的生长－光吸收
为了监测细菌或酵母菌的生长，我们需要控制好温度，比如大肠杆菌（实验室菌株DH5α或XL1 blue）在大约37℃时生长最好。Zenyth 3100的标准配置可以控制温度在4℃到45℃之间，因此适用于该项测定。其他的微生物比如酿酒酵母在28℃到30℃之间生长最佳。为了完成生长试验，盛有150微升培养液的微孔板在要求温度温育，每过5分钟在600nm处测定吸光值。每次测量之前振荡微孔板30秒。
细菌或酵母的光密度是是一个至关重要的指标，尤其在培养液用于质粒/DNA转染时。
注释：该应用不需要任何特殊工具盒或试剂。唯一的要求是配备一个600nm的滤光片。
1.2 细菌分类－顶部、底部荧光强度
当葛兰氏阴性菌和葛兰氏阳性菌同时污染membrane-permeant SYTO 9染料、hexidium碘化物、葛兰氏阴性菌荧光绿和葛兰氏阳性菌荧光红的时候，该方法可以用于监测细菌培养液中的污染情况而且可以作为传统的葛兰氏污染程序的一个替代方案。该方法还可以用于确定混合培养液中葛兰氏阴性细胞和葛兰氏阳性细胞的比例。
程序回顾：
1. 在孔中培养细菌至对数期
2. 洗细菌
3. 加入试剂
4. 温育
5. 读取荧光数值。激发波长：485nm，发射波长：530nm (葛兰氏阴性菌); 600nm (葛兰氏阳性菌)
注释：需要分子探针公司的LIVE BacLight Bacterial Gram Stain 试剂盒以完成该项测定。
1.3 运用四唑盐XTT进行细胞增殖与存活分析－光吸收
线粒体的完整性反映了细胞的存活情况。活细胞能将MTS试剂(一种四唑盐)转化为一种有色复合物(formazan)，下图是四唑XTT和其还原衍生物formazan的结构图。四唑XTT和formazan都是水溶性的，因而运用分光光度法可以十分方便检测反应孔中的有色产物。橙红色的formazan在475nm处有最大吸收值，但是可以在450nm-500nm之间读取其吸光值，变化不大。
由于细胞种类的不同以及培养条件的不同导致颜色显色时间不同，因此推荐做一条标准曲线以便估计与某一特定实验最合适的细胞数和显色时间。
注释：可以运用普洛麦格的CellTiter 96® Aqueous试剂盒测定细胞增殖/存活。
1.4 细胞凋亡过程中监测半胱氨酸蛋白酶活性－顶部荧光强度
细胞凋亡，或者说程序死亡是多细胞生物生长和健康的正常组成部分。细胞受到一些刺激而死亡，这种凋亡是一种有控制，有调节的方式完成的。这是凋亡与另一种死亡方式—坏死—
的区别。在细胞坏死过程中，失控的细胞死亡导致细胞解体，炎症反应，甚至导致严重的健康问题。相反，细胞凋亡是一个主动的过程。一旦接到指示细胞凋亡的信号，细胞内就会发生很多特定的生化和形态的变化。在凋亡的早期阶段，半胱氨酸蛋白酶家族被激活。这些蛋白酶能降解或切割一些主要的细胞底物，比如细胞骨架中的结构蛋白和核蛋白（比如DNA修复酶），而这些细胞底物对于正常的细胞功能是必不可少的。这些半胱氨酸蛋白酶还能够激活其他降解酶，比如Dnase，Dnase能够在核中切割DNA。这些生化变化体现在细胞的形态变化中。
Caspase-3 是细胞凋亡途径中的一个关键因子，它放大了来自初始半胱氨酸蛋白酶的信号。Capase-3这种蛋白降解酶对于DEVD氨基酸序列具有特异性。对于几乎所有的半胱氨酸蛋白酶都有很多的荧光底物。
注释：可以应用分子探针公司的Enzcheck Capase-3 分析试剂盒来测定Capase-3的活性。
1.5 微孔板中GFP质粒转染效率的荧光监测－顶部、底部荧光强度
由于绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因在转基因研究中的优势，人们设计了很多基于GFP的质粒。BD生物科学在GFP质粒的研究和营销方面处于领导地位。对于转染效率和外源基因表达的检测而言，酶标仪荧光检测GFP转染的细胞是非常方便而且精确的方法。
BD生物科学克隆技术公司已经开发出EGFP(增强型绿色荧光蛋白)和EsRed载体。我们可提供增强的蓝色、蓝绿色、绿色、黄色和红色荧光蛋白。EGFP变体在哺乳生物中的表达比原来的GFP更为有效，而且表现出更强的荧光强度。DsRed是目前用于表达研究的唯一商业化的红色荧光蛋白。
1.6 细胞内钙变换的测定－底部荧光强度
Ca2＋荧光指示剂，比如Fluo-3、Fluo-4和Fura-2给活细胞内钙水平的测量带来了革命性的变化。总体而言，胞外钙离子来源于如下两个途径：
－在电压门控钙离子通道进入胞外母体
－钙离子渗透Kainate/AMPA或NMDA型glutamatergic受体
胞内钙离子在G蛋白偶联受体的调节下可以释放进入细胞质。
钙离子是中央第二信使，它调节不同的细胞活动，比如细胞生长、细胞死亡、分化和授精。为消除培养液上清的自荧光现象，胞内钙离子的变化通过底部荧光强度来测定。钙离子通量的动力学是非常快的，有时候只能通过分液器才能完成测量。
注释：钙敏感探针可由分子探针公司购得。
1.7 细胞存活分析－化学发光
基于细胞的化学发光分析比标准的比色法和荧光分析更加灵敏，这就减少了每次分析要求的细胞用量。对96孔板最低可以检测到50个细胞。最近普洛美格发布了其CellTiterGlow分析。这一均相分析导致细胞破碎而且产生的化学发光信号与细胞内的ATP量成比例。加入试剂10分钟后收集数据。借助于上述试剂盒，可以监测如下细胞活动：
－细胞增殖
－细胞毒性
－细胞存活
2. 生物化学
2.1 溶菌酶活性检测－顶部荧光强度
溶菌酶存在于人体血清，眼泪和其他体液中，它是抵抗微生物感染的第一道屏障。血清或尿样中溶菌酶活性的升高标志着人体疾病或感染。溶菌酶能够水解很多微生物的细胞壁组成成分中的特定化学键。
分子探针公司的EnzCheck溶菌酶分析试剂盒对于检测溶液中的溶菌酶活性既简单又灵敏。绿色荧光信号的增强意味着酶活性(ABS/EM 最大值 ~494/518nm)
2.2 蛋白酶活性检测－顶部荧光强度
分子探针公司的EnzCheck蛋白酶分析试剂盒用于检测蛋白酶活性既简单又快速。样品在37度温育一小时后测量荧光信号(激发波长590nm，发射波长645nm)
分子探针公司提供如下荧光底物：
l 丝氨酸蛋白酶
l 酸性蛋白酶
l 半胱氨酸蛋白酶
l 金属蛋白酶
3. 一般方法
3.1 核酸和蛋白定量----顶部荧光强度/光吸收
Zenyth 1100能够实现荧光强度法定量核酸浓度。分子探针公司提供一系列的染料用于定量不同种类的核酸和蛋白质。
Pico Green：用于定量dsDNA
OliGreen：用于定量ssDNA
RiboGreen：用于定量RNA
NanoOrange：用于定量蛋白质
CBQCA试剂：用于定量脂蛋白
除了利用荧光进行核酸定量之外，Zenyth 3100还能直接在260nm处实现光吸收核酸定量。蛋白质定量在280nm处。
3.2 酶联免疫吸附分析FIA、LIA—顶部荧光强度/光吸收/化学发光
可以采用不同的检测技术实现免疫分析。Zenyth 1100可以提供3种主要的检测技术实现荧光，化学发光和光吸收免疫分析。另外，Zenyth 1100 配备了与ELISA所有重要底物对应的滤光片。
ELISA的一些实际注意事项：
在ELISA中，一种酶可以将数百甚至数千种底物复合物转变成生色结构。这种转变将酶的作用提高了几个数量级。检测荧光基团的灵敏性高于发色基团导致很多人误解ELISA分析中如果用荧光基团替代酶标记将会优化ELISA分析效率。但是大部分酶标记都是可替代的。的确也有一些酶荧光基团表现出类似的酶强化效果，比如4-甲基-7-羟基香豆素(MUB)和AttoPhos TM。
4. 药理学
4.1 磷酸化多肽的检测-----时间分辨荧光
铕标记的抗体与Cy5标记的多肽用于检测磷酸化的发生。
分析试剂可由安玛西亚生物科技公司购得。
5. 代谢物和分析物
5.1 胆固醇定量-----荧光强度
分子探针公司提供的Amplex RED胆固醇分析试剂盒对于检测混合物中的胆固醇和胆甾醇酯十分灵敏。样品在37℃温育30分钟之后荧光定量（激发波长560nm，发射波长590nm）。
6. 等位基因的鉴定
6.1 终点法测量Taqman®探针和分子信标----荧光强度
荧光强度终点测量法可以鉴定不同的等位基因。在PCR中，如果样品中没有PCR抑制剂，我们强烈推荐使用该方法。
Zenyth 3100 可以读标准的96孔PCR板.
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