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[转帖]HmX五分类血球仪操作指南

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郑振寰 发表于 2005-6-28 16:37 | 显示全部楼层 |阅读模式

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目 录

-----------------------------------------------------

Ⅰ 打开电源………………………………………………………………………3

Ⅱ 每日开机.…………………………………………………………………….3

Ⅲ 系统设置.…………………………………………………………………….3

1. 菜单选项设置.………………………………………………………… 3

2. 质控设置.……………………………………………………………… 4

3. 标本设置.……………………………………………………………… 5

4. 打印设置…………………………………………………………………7

5. 系统设置…………………………………………………………………7

Ⅳ 每日质控……………………………………………………………………..7

1. 乳胶质控………………………………………………………………….7

2. 5C质控…………………………………………………………………….9

3. 网织红细胞质控..……………………………………………………...11

V 标本测试……………………………………………………………………..14

1. 标本要求…………………………………………………………… .14

2. 条形码的粘贴……………………………………………………………14

3. 标本检测………………………………………………………………..14

VI 关机……………………………………………………………………..15

1. 清洗循环…………………………………………………………….15

2. 关机……………………………………………………………….…15

3. 延迟关机程序……………………………………………………….16

附:VCS白细胞分类技术和应用…………………………………………20

.打开电源

1.将插座插入电源

2.打开主机后主电源

3.如睡眠/测试键处于”O”位置,将其设置到”|”

4.打开DMS 电源键 和显示屏开关

5.打开打印机电源

.开机

1. 检查当前仪器状态

(1) 是否打开电源

(2) 若主机处于睡眠状态,则转换至准备状态

(3)如果DMS屏幕不亮,则按空格键

(4) 若启动结果已通过则直接运行第三步;反之输入操作员编号

-主菜单上按[F5]键。

-输入操作员编号。

-[Esc]键回到主菜单。

2、启动

(1)主菜单上选择Diluter Functions/Start Up

(2) [Enter]键。

3、检查结果

启动完成后浏览屏幕结果,有必要还可浏览系统状态屏,未通过结果将以红色显示。

若本底检测失败,按[F2]后查看系统状态屏,再按[F3]重新本底计数;若其他检测失败,按[F2]查看系统状态屏并运行System Test. 选择Special Functions/ Diagnostics/Operator Options/System Test[Enter]键,然后按[F3]键运行后根据提示进行操作。

若上述操作无效,可参照特殊操作和维护手册 或联系公司工程师。

若启动结果不保存,将自动打印出来。保存启动屏及系统状态屏的打印件以备文案。

系统设置

1. 菜单选项设置

在主菜单选择Special Function/Set Up 进入此菜单,Set Up子菜单包括下列三个选项:

-Control set up 质控设置

-Sample analysis set up 标本分析设置

-System set up 系统设置

2. 质控文件的建立

在住菜单选择Special Function/Set Up/Control set up

可选择20 种质控文件的任一个建立不同的质控文件,文件类型有CBC/DIFF 文件(全血+分类)Latex 文件(乳胶)CBC文件(全血)RETIC 文件(网织红细胞)

可选择自动停止功能,当出现质控错误信息时,仪器将自动停止并发出报警,常见错误有:质控结果超出范围、质控品过期、质控文件已满、文件未找到(只出现在CBC/DIFF)、C驱动盘太满

如将自动停止功能关闭,质控出现错误信息时仪器仍继续分析。

1) 建立乳胶质控文件

主菜单选择Special Functions/Set Up/Control set up/Latex file将光标移到NOT SETUP文件,按[ENTER],手工 输入文件名、操作者编号、批号和有效期,并核对所有信息正确后,按[F10] 存盘退出。

2) 建立CBC/DIFF 质控文件

从主菜单选择Special Function/Set Up/Control set up/CBC/DIFF file将光标移到NOT SETUP 文件,按[ENTER]

5C质控盘插入计算机软驱,按F5加载靶值,按功能键选择所要的质控水平,输入相应信息,核对所有信息正确后,按F10 存盘退出

如果需要,建立另一种水平的质控文件,将光标移NOT SETUP 文件,按回车,重复第2到第6

所有设置完成后,取出磁盘

3) 建立网织红细胞质控文件

从主菜单选择Special Functions/Set Up/Control set up/Retic file将光标移到NOT SETUP文件,按[ENTER]

从预期结果对照表输入批号、有效期、班次和操作员标号,以及红细胞靶值和网织红细胞百分比

核对所有输入信息正确后,按[F10] 存盘退出

3.标本分析设置

从主菜单选择Special Functions/Set Up/Sample analysis set up

(1)XB 范围设置

设置靶值和范围,用户可自己定义

(2)确定旗标范围

产生的文字报警信息由用户定义的范围决定

(3)旗标的上限和下限

旗标上下限根据用户定义的界限值产生

(4)实验室正常参考范围设置

HmX血液分析仪有默认的正常参考范围,实验室的自定义参考范围也在此输入

4.打印选项

(1) 自动打印格式

选择标签或图谱打印格式

(2) 标签打印选项

选择适当的标签格式,这些选项包括单位(%103/uL)、参考范围、参数标识以及怀疑性旗标和可定 义性旗标是否打印

(3) 图谱打印选项

选择适当的图谱打印格式,这些选项包括页面设置(宽度/字体),何种散点图,统计量,怀疑性旗标和可定义旗标,单位,正常范围以及三维分类图

Ⅳ.每日质控

.乳胶质控

乳胶质控品是用于监控VCS通道对白细胞分类和网织红细胞的检测质量。该质控品可保存冰箱中或室温下,若为冰箱保存,测试前必须放至室温。

乳胶质控包含两种试剂:

A.准备液

含有一种表面活性剂,能清除气泡、清洗管路及整个标本通道。

B.质控液

包含特定大小的乳胶颗粒,能监控流式通道对体积、传导性及激光散射性的测定,用于流式通道的校准、调整增益和变异系数(CV%)

由于乳胶颗粒易沉淀到瓶底,使用时应轻微的翻转混匀,但过度的振荡会影响测试结果。质控品应避免阳光直射或放于30摄氏度以上的环境中,远离窗户和热源。

3)乳胶质控操作

a.操作状态

*确定启动已通过

*准备液和质控液必须放至室温

b.运行准备液

DMS

*从主菜单选择Control/Control Run

*若文件未显示按[F2 ]选择所要的文件

*[F4]充注准备液

在稀释器

*手动吸样准备液

-将吸样针完全浸入准备液

-不要使吸样针碰到瓶壁

-按吸样开关

-当听到“哔噗”声或显示屏出现Diluting 移开小瓶

DMS上查看准备液结果

*当分析完成后检查DIFFRETIC计数

*如果结果都小于或等于500,

-按ESC键,回到运行窗口

-转到第3步,运行乳胶质控液

*如果其中一个或都大于或等于500

-重复运行准备液

*如果仍有问题,重新开启一瓶或请工程师帮忙

c.运行质控液

DMS

*如果需要 可按ESC关闭准备液窗口

*[F3] 运行质控液

在稀释器

*轻轻的颠倒混匀质控液5-8

*手动吸样质控液(方法同上)

DMS屏查看质控结果

*检查质控结果

*如果结果出控,重复整个运行程序(包括准备液)

*如果两次结果都有问题

-根据实验室规定或

-参考操作指南中 乳胶出控的处理 或请工程师帮忙

*选择Controls/Graphs,查看Levey-Jennings曲线

2. 5C质控

1) 几点说明:

*用于CBCDIFF 的质控品

*5C质控只能使用自动进样方式

*三种不同水平的质控品:NormalAbnormalⅠ和 Abnormal

储存

*2-8摄氏度(35-46华氏度)保存

*质控品不可颠倒存放

注意事项:

*不要在质控管条形码和瓶盖知之间的空白处填写开瓶日期和其他签字

-将导致不能正确的识别条形码

-如果条形码不被识别,质控将会作为标本储存在标本的数据库

*混匀前室温放置10-15 分钟

*按8*8*8方式轻轻混匀两次

-两次混匀后,检查质控管壁和底部确认完全混匀

-过度混匀可导致溶血

*不要使用自动混匀器或其他混匀装置

*30分钟内放回冰箱

注:对条形码标签损坏或无条形码标签的质控品

我们建议参照操作指南第2节 无条形码标签的质控品操作 运行质控

5C质控运行介绍

各质控管可同标本一块随意放置

*在 Sample Analysis菜单下自动吸样

-标本测试屏将不显示质控结果

-继续显示最后一个标本过程

-条形码标签自动将质控结果存入质控文件

*如果使用手动进样方式运行5C质控,实验室必须重新制定每个参数的均值和期望范围,并根据这些值建立质控文件

2) 5C 质控操作

a. 根据包装说明准备质控

*将质控品室温放置10-15 分钟

*能够质控品按8×8×8式混两次

-不要使用混匀器

-不要在条形码和瓶盖的空白处填写开瓶日期和任何签字

b.按检测标本的方式运行质控

*将质控品装入标本架

-可同标本混合放置

-确认条形码朝上放置

*将标本架放入装载槽

*在主屏幕选Sample Analysis/Run Sample

d.查看质控结果

*确认质控结果是否储存在质控文件,选Controls/Review or Report

*如果条形码没有正确放置或条形码损坏而没有被识别,则质控结果将被储存在患者数据库

-如果条形码没有朝上放置,放正位置,重新测试

-如果条形码损坏,参照操作指南启动和质控章节 无条形码质控品的操作

e.质控品的稳定性

开瓶稳定性

*开瓶稳定性为13天或13次测试

*每次测试,操作员必须按照下列顺序

-从冰箱拿出质控品

-室温放置10-15 分钟

-按8×8×8方式轻轻混匀两次

-吸样

-30 分钟内放回冰箱

*MCV和/或RDW可能表现一定的趋向性,这是质控品本身成分决定的,不能认为已不稳定或已变质

不稳定的指征

*上清液为轻微的粉红色为正常

*在已知仪器正常的情况下不能获得正常的质控结果或已溶血(上清液为黑色)表明质控品已变质

3.RETIC-C 质控

*三种水平:Level,Ⅱ和

*在使用COULTER ReticPrep试剂制备的样品完成后才可进行网织红细胞质控分析

*用于监控流式通道分析网织红细胞的质量

*不能用于控制手工方法

1)储存

*2-8摄氏度保存

*已开瓶质控品应垂直存放,不可颠倒

-若颠倒可能需要特殊的混合方式才能完全混匀

2)按包装说明准备质控品

*从冰箱拿出质控品

*混匀前室温放置10-15 分钟

*按8×8×8方式轻轻混匀一次

-混匀后,检查质控管壁和底部确认完全混匀

-过度混匀可导致溶血

*不要使用自动混匀器或其他混匀装置

*30分钟内放回冰箱

3)稳定性

打开稳定性

*开瓶稳定性为30天或30次测试

*每次测试,操作员必须按照下列顺序

-从冰箱拿出质控品

-室温放置15 分钟

-按8×8×8方式轻轻混匀一次

-从质控瓶中吸取质控标本

-30 分钟内放回冰箱

注:*粉红到微红色上清液为正常

*适度的溶血可能是过度震荡导致,而不是质控品变质

4)运行RETIC-C 质控

*使用Control Run 选项运行质控

*分析前,用ReticPrep试剂盒准备稀释溶液

*使用手动进样模式

RETIC 质控分析的专用试剂

试剂

成分

作用

CBC

DIFF

RETIC

开瓶稳定性

网织红细胞A

新亚甲蓝染色剂

· 使红细胞内的网状组织着色

60

网织红细胞B

漂洗剂(很稀的硫酸)

· 冲去红细胞的血红蛋白,保留着色的RNA复合物

· 保持细胞膜的完整性

60

a.制备网织红标本

*每分质控品准备两个12×75mm试管,分别标记“A”和“B

*A管加入4滴试剂A

*再加入50uL混匀质控品

*轻轻混匀

-室温放置5-60分钟

b.DMS准备

*主菜单选Controls/Control Run

*[F2] 选择所要的文件

*[F3] 手动运行质控

c. 按标本方式运行质控

*轻轻混匀A

*A管取出2uL质控液/混合染色液放入B管底部

*B管成一定的角度放到B试剂下

*B管加入2ml B试剂

*不要混合

*等待30秒后手动进样分析

d.查看结果

* 如果结果出控

-按照实验室规定或

-参照操作指南 网织红出控的处理方案

*如果需要比较以前的质控结果

-Controls/Review or Report屏分析储存的结果

-Controls/Graphs,分析Levey-Jennings曲线的变化和走势

质控样品表

推荐的质控品

作用

CBC

DIFF

RETIC

开瓶稳定性

LATRON Primer

(乳胶准备液)

质控液测试前路径的清洁和冲洗

30

LATRON Control

(乳胶质控液)

监控流式通道的检测质量

30

5C 细胞质控

监控CBCDIFF 的检测质量

13/

网织红细胞质控

监控RETIC检测质量

30/

S-CAL®校正品

调整CBC参数的准度

1小时

LIN-C®质控品

监控CBC参数的线性

7

IQAP(实验室间的质量保证体系)

库尔特IQAP 为所有使用4C 4C PLUS 5CRETIC质控品以及LIN-C线形质控的用户提供免费服务(详见IQAP操作指南)

V标本检测

1.标本要求

1)HmX可进行以下操作

*自动进样

*手动进样

*预稀释标本测试

2)标本要求EDTA-K2抗凝,先配成15%EDTA-K2溶液,一般10uL可抗凝

0.5-1.0ml全血(1.50±0.25mg/ml).

3)样本管要求清洁,光滑,带盖的试管

4)全血标本,室温加盖保存,要求24小时内检测

5)预稀释标本,室温保存,5分钟~5小时内检测

6) RETIC标本,室温保存,8小时内检测,28℃储存,24小时内检测

2. 条形码的粘贴

1)条形码必须与瓶塞平行,倾斜超过5,将不能阅读

2)标签不能覆盖试管底部

3.标本检测

1) 自动进样

a在主屏幕选择Sample Analysis /Run Sample

bSAMPLE MODE选择[F2] Start Primary

c. 将标本插入进样架

d.[F3] Run

2) 手动进样

.a在主屏幕选择Sample Analysis/Run Sample

bSAMPLE MODE 选择[F3] Secondary

c.[F3] Run

d.将标本管拿到条形码阅读器前进行识别

e.或手工输入1-16位标本编号

f.标本充分混匀,手动吸样

3) 预稀释标本

当标本量不足125uL,可使用预稀释模式,将标本进行1:3稀释,手动进样分析,仪器将自动计算最后结果. 预稀释模式只能检测CBC结果

a.准确加入一份全血标本,两份稀释液,轻轻混匀

b.在主菜单选Sample Analysis/Run Sample

cSAMPLE MODE [F4] Predilute

d.[F3] RUN

e.手工输入1-16位标本编号

c手动吸样检测

每次检测结束后,均要进行核对,对可疑或有旗标的结果进行选择性手工复查.

VI关机

*确保仪器使用24小时要运行一次清洗循环或关机

*清洗液浸泡不少于30分钟,以清除仪器内部的蛋白沉积。

1 清洗循环

1 执行清洗循环

从进入屏按F3 再按回车即可

2 )保持仪器的以下状态

*清洗剂浸泡仪器

*使仪器保持供电状态

*清洗剂浸泡30分钟后,仪器将自动启动

3)检查结果

*启动完成后浏览屏幕结果。(有必要还可浏览系统状态屏)

-若本底检测失败,按[F2]后查看系统状态屏,再按[F3]重新本底计数。

-若其他检测失败,按[F2]查看系统状态屏并运行System Test.

Special Functions/Diagnostics/Operator Options/System Test

[Enter]键,然后按[F3]键运行后根据提示进行操作。

*若启动结果不保存,将自动打印出来。

*保存启动屏及系统状态屏的打印件以备文案

2.关机说明

1)运行关机操作

*确认状态行显示选择功能

*从主菜单选择Diluter Functions/Shut Down

*按回车

2)使仪器保持以下状态

*清洗剂浸泡至少30 分钟

*电源保持接通,仪器将在24小时后自动冲洗

3.延迟关机程序

如果仪器准备停机48小时以上,请执行以下操作

-主屏幕选择 Shut Down,让清洁剂浸泡至少30分钟

-主屏幕选择Start Up,让稀试剂浸泡管道

-保持电源或关闭电源

-使用时按开机操作即可

VCS的应用问题

影响VCS分类质量的因素有以下几个问题:

u 标本本身的干扰因素。

u 静脉采血、试管、抗凝比例。

u 标本的运输温度。

u 标本的静置时间。

u 仪器本身的因素。

1. 抗凝剂(EDTA-K2EDTA-K3)过浓(应以1.5g/L为宜)

血细胞遇抗凝剂先有一个短暂的收缩过程(1-2分钟)。因为K+离子加入血浆后,改变了渗透压,,细胞内的水份将渗出。

随后,K+离子将逐渐透过细胞膜,进入细胞内,细胞又恢复原态。绝大部分人这个过程只需几分钟,但也有人需要20-30分钟。

抗凝剂过浓会延长这个平衡时间。如果在收缩状态下检测,V减少,S减少。LY BANE的区分受到影响。

2.标本静立3~4小时以上

标本静立将导致细胞份层,RBCWBCPLT(WBC+PLT=buffy coat)由上而下排列。分层的细胞代谢,产生不同的代谢物,造成层微环境。WBC与它的层微环境(WBC代谢产物+扩散过去的其他物质)相适应。

重新混合后细胞需要重新建立平衡。最初的1~2min内收缩,达到平衡需要30min

血脂高的标本变化犹为明显,VS减少幅度大,达到平衡的时间更长。

纠正的方法:对静置的标本进行间隔性混匀,或在放置后混匀,等30分钟再测。

(有直方图和点分布图可显示)

3. 能量白细胞(衰老、温度影响、获生理异常)

这类细胞与scatterpak双试剂反应后,不能很快从肿胀状态恢复到原态,比起新鲜标本,其V变大S减少。

标本冰箱储存

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 楼主| 郑振寰 发表于 2005-6-28 16:37 | 显示全部楼层

冰箱储存过的细胞收缩并抑制细胞膜的离子泵,导致VS减少,细胞不易分开,回温并等待一段平衡时间,可纠正。

*有的用户根据经验,把低能量标本(肿胀)放到冰箱一段时间再测,会得到一张正常的分布图。

3. 温度的影响(对溶血素对红细胞溶解影响最大)

温度过低时(如冬天早上刚开机),溶血素与红细胞反应不充分,导致红细胞溶解不完全,出现PC2报警;

温度过高时(如夏天),溶血素与细胞反应过快,导致部分白细胞也被溶解,只剩细胞核;

最适温度为2125摄氏度

4. 标本化学成分的影响

VCS白细胞五项分类原理、技术特点和应用问题

VCS原理和技术特点

在一个流式通道内,对单个白细胞进行直接、同时、三重测量,然后再进行三维分析。

1. Scatterpak试剂保证接近原态分析,避免化学方法对细胞特性的破坏

Scatterpak(Erythrolyse—低渗、低pH、具表面活化性)

(Stabilyse—高渗、高pH)

WBC EL 肿胀 ST:恢复等渗、生理pH 接近原态

RBC----------------- 肿胀---------------------------------------去除debris-------流式通道

PLT 肿胀 El的表面活化作用继续发挥 去除debris

(28mL) (300mL×2) (133mL)

2. 流体动力聚焦细胞,令其在流式通道内作最适的单细胞排列

ISOTON III作为鞘流

3.VCS检测-视角与手工相似

VCS技术检测细胞的角度与镜检血片相似,都是从体积、核质比、颗粒特性、膜特性和形态等方面观察。但检测工具的敏感度大大提高,描绘程度上更精细,细胞的状态比染色情况下的更自然。

Volume

u 运用低频电流准确分析细胞体积

体积是区分白细胞亚群一个很重要的参数,它能有效区分LYMO。但仍然存在一定程度的混淆,如:LYBA(f同在9-12mm范围);不成熟LYNE(f同在12-14mm范围)

u 该技术1967年开始使用

u 库尔特专利

Conductivity-Opacity

u 运用高频电磁探针检测细胞内含物(细胞核、颗粒和其他化学组份)的特性。

细胞膜对高频电流具传导性,当电流通过细胞时,细胞核、颗粒和细胞内的化学组份令电流的传导产生变化,其变化量(RF)可以用来反映细胞内含物的信息

u RF=f(细胞体积,细胞内含物传导性)

u Opacity(阻光性)是指将细胞体积对RF的影响去除后的高频传导数据,可以更确切地描述细胞内含物

Opacity@RF/DC

u 该参数可用来进一步区别体积差不多的细胞,如:LYBA(f同在9-12mm范围),由于它们的核质比不同而在C参数上有所区别

u 库尔特先生在60年代着手研究该项技术,1970年获美国专利

Light Scatter-RLS

u 运用一个氦氖激光源发出的单色激光扫描细胞,收集细胞多角度(20-70)的散射光(MALS),提供关于细胞形态,膜结构和颗粒性的信息

u MALS=f(细胞体积、细胞膜结构和颗粒性)

Rotated Light Scatter=Log(LS)/DC,减少细胞体积的影响

u S在根据细胞的颗粒类型和颗粒数量区分细胞时十分有用,VCS最成功之处在于它对EO的识别能力和计数

其它五分类仪器对EO的分辨往往不够成功或精度不高,因为很难将它与其它粒细胞区分完全

u 库尔特先生对流式光感应系统的研究可以追溯到20多年前的Fulwyler前辈时代,同时库尔特公司在流式细胞仪的制作过程中积累了丰富的激光技术经验。

4.三维分析

u 根据每个细胞的VCS检测量,将她们分布到一个三维坐标(256×256×256=16,777,216),用数学公式计算出各白细胞亚群的分布区,其分辨率是至今为止最高的

u 高分辨率不仅令五项分类清晰,还令异常得以敏感特异的显示,原始细胞可以进一步区分是淋巴区、单核区、还是粒细胞区

u 高分辨率提供科研潜力

5.VCS统计量达到8000个细胞,保证一定的精度

6.VCS分类与手工分类的相关系数:LY>0.9; NE>0.9; MO>0.7

7.流式通道有进一步发展的潜力

u MAXMRET%

u STKSRET%CD4CD8

8.清晰的白细胞分布图

u 在仪器屏幕和打印报告上,我们可以看到三维座标有代表性的三个侧面:

DF1-VS座标面,可观察到LYNEEOMO 4个细胞亚群

DF2-VC座标面,可观察到LYMO和颗粒细胞

DF3-VC座标面,DF-2去除NEEO后的画面,可观察到LYMOBA细胞

u 另外还有一个汇总了VCS三种技术的直方图,可协助进行数据判断

u 点分布图上用各种颜色代表不同细胞浓度:

>>绿>

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