[转帖]抗核抗体实验室检测的质量保证

——杨雪、王治国

[摘要] 目的 讨论抗核抗体实验室检测的质量保证。
方法 针对目前常规实验室中抗核抗体检测两种主要方法，间接荧光显微镜检查和微量滴定酶免疫分析方法在质量保证上存在的问题，查阅相关文献，参考美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）I/LA2-A2文件相关内容，结合临床应用实际情况进行总结归纳。
结果 总结了抗核抗体实验室检测常用方法间接荧光显微镜检查以及微量滴定酶免疫分析方法质量保证中应该注意的问题以及保证质量的过程，同时讨论了抗体的量，参考区间以及报告检测结果，实验室内质量控制以及参考制备物等内容。
结论 帮助实验室及进行抗核抗体检测中提高检验的质量，为临床和患者服务提供更好的品质。

[关键词] 抗核抗体参考制备物；抗核抗体；自身抗体；酶免疫分析；间接免疫荧光；核抗原；质量保证。

抗核抗体的检测试验有助于几种系统性风湿性疾病的评估，比如系统性红斑狼疮（SLE），盘状红斑狼疮，混合性结缔组织病（MCTD），系统性硬化症，干燥综合症，多发性肌炎，皮肌炎以及类风湿关节炎。已经证实了自身抗体的识别可用到这些疾病的诊断、管理以及治疗中。针对目前临床实验室常规检测抗核抗体的方法（间接免疫荧光试验（IF）和酶免疫测定试验（ELISA））的质量保证过程，进行了以下总结。

一、抗核抗体检测间接免疫荧光试验（IF-ANA）
1. 介绍
IF-ANA为抗核抗体（ANA）检测的常用技术。IF-ANA试验可用于检测广泛的自身抗体，并且通常用作为ANA重要的筛查试验。

可使用的底物种类很多，比如有小鼠肝脏或肾脏的冰冻组织，以及最近的培养细胞。当前，培养的HEp-2上皮细胞（人喉癌，美国菌种保存中心（ATCC?a CCL23））是使用最广泛的细胞。EHp-2细胞的核和核仁都很大，核和核仁的染色类型可以很好的辨认出。

HEp-2细胞分裂得很快，可以在底物准备的时候见到其分裂相。这样可以通过自身抗体唯一针对分裂细胞的结构将其检测出。HEp-2细胞（ATCC?a CCL23）可以在实验室内生长，具有HEp-2细胞的显微镜载玻片可以从供应商处获得。大多数HEp-2试剂在IF-ANA筛查试验中有着可靠的结果。一些ANA有着较宽范围的灵敏度，这是由于使用的固定程序的变异所致。所有商品化的试剂盒在说明书中应该要提供一些与其灵敏度有关的数据。

IF-ANA试验适当的标准化以及质量保证依赖于校正的参考标准。参考血清可以从世界卫生组织和CDC处获得。

1.1 IF-ANA试验原理
Coons和Kaplan首次描述了IF-ANA试验使用间接荧光抗体技术。
（1）将4微米的组织部分（冰冻切片组织比如小鼠肾脏）或是HEp-2组织培养细胞固定于显微镜玻片上用作为核抗原的来源。

（2）将分析量定量的血清（如10或20μL）添加到单个的组织底物中，实验室温度下放置30分钟。将已知ANA-阳性和ANA-阴性的质控血清添加到玻片上与之不同的底物槽内。

（3）冲洗载玻片，添加荧光结合物，孵育30分钟。

（4）冲掉多余的荧光结合物，在玻片上添加上封闭剂，盖玻片仔细地盖紧。

（5）使用免疫荧光显微镜检查玻片。

1.2 病人标本及采集程序
血清是推荐的IF-ANA试验标本。如果需要延长储存时间，推荐使用如叠氮化钠等防腐剂。血清可以在4℃下储存2-3天。假如需要延长储存时间，可以将其储存在-70℃下。

2. 底物和固定剂的变异
推荐使用最广泛的底物是HEp-2细胞。有报告底物的固定可以通过多种方法，比如甲醇-丙酮、丙酮或多聚甲醛。

某些核抗原——如DNA,组蛋白，Sm，核RNP以及SS-B/La——在大多数细胞中含量丰富。因此，不管试验中使用的是何种底物，针对这些抗原的抗体可以被很容易地检测出。与之相对的，另外有一些核抗原——如SS-A/Ro，PCNA,RANA以及Ku抗原——在某些组织中的含量很低。因此，没有单一的底物是最好的可用于检测所有ANA。

2.1 底物组织的固定
IF-ANA试验中使用的底物固定试剂推荐使用丙酮或酒精-丙酮。底物没有固定可能会导致某些核抗原，如SS-A/Ro和nRNP，在冲洗步骤中被洗脱掉，这样本应该是高滴度的ANA被检测为阴性或低滴度。

在核蛋白（NP）固定之前冲洗底物，或单独使用乙醇或甲醇进行底物固定，可能会使SS-A/Ro抗原发生溶解。

2.2 SS-A/Ro 抗原
当在底物中使用小鼠或大鼠组织时，SS-A/Ro抗原的量是无法检测出的。但是，当固定在丙酮中的底物是人上皮样细胞株时，如HEp-2细胞或KB细胞，可以定量检测出SS-A/Ro抗原。

Bylund和NaKamura在完成了抗核抗体筛查时已经显示了检测SS-A/Ro自身抗原的重要性。抗SS-A抗体的检测要求执行及遵从一些推荐的技术和质量保证。最近，使用cDNA编码的60kDa SS-A/Ro蛋白转染的HEp-2细胞株，且在细胞株可过量表达SS-A/Ro，是可以购买到的。此转染的HEp-2细胞巨大地增加了IF-ANA试验的灵敏度，并且可以在SS-A/Ro抗体血清样本阴性或不明的未转染细胞中检测出特异的抗SS-A/Ro抗体。60kDa SS-A/Ro转染的HEp-2细胞的使用对检测SS-A/Ro抗体的灵敏性方法是非常有用的。

这些转染的HEp-2细胞是可以购买的。其它重要的抗原（如PCNA）的抗血清染色类型是没有发生变化的。

3. 荧光色素标记结合物
荧光色素标记的结合物的种类有许多。最常使用的荧光物质是异硫氰酸荧光素（FITC）。通常使用的是结合了FITC的多价羊或兔的抗人类IgG，可以从多种渠道购买。抗γ球蛋白结合物可以检测出IgM和IgA型ANA。但是，抗γ球蛋白结合物的使用常常产生不期望的背景荧光。标记的抗体一般是（FITC）结合物。推荐结合物F/P（荧光素/蛋白质）比率为3.0左右。荧光素如FITC与蛋白质的浓度之比就是F/P比率，见Beutner等文章中的方法。

3.1 工作稀释液
实验室应该评估制造商推荐的荧光素结合物工作稀释液。每个实验室应该使用已知滴度的阳性血清检测结合物，以建立程序中要求的正确的最优工作稀释液。

通常确定最优结合物溶液的方法是免疫荧光棋盘滴定。使用一系列荧光模型和终点确定的已知阳性质控血清的溶液同一系列结合物溶液一起进行检测。同时分析一份阴性血清和缓冲液。

3.2 多价及IgG特异性结合物
IF-ANA试验中同时用到多价的（与IgG、IgM、IgA反应）和IgG特异性结合物。在SLE中，96%的SLE病人产生IgG类抗核抗体。使用抗IgG特异性结合物，与类风湿关节炎、药物以及通常没有诊断意义的年龄相关的IgM类抗核抗体都不会被检测出。但是，4%的患系统性风湿性疾病的病人产生大量的IgM ANA。

3.3 荧光色素标记结合物的参考制备物
国际免疫学会联盟（IUIS）标准化委员会以及世界卫生组织（WHO）已经建立了两种WHO/IUIS国际标准结合物，FITC-标记羊抗人Ig（480010）以及FITC-标记羊抗人IgM(抗多链)可以从WHO免疫学部门（瑞士日内瓦）获得。这些结合物可以用于检测商品化的、或个体制备的结合物的性能和特异性。

此标准的结合物可以代替商品化制备的结合物，用于阴性质控、阳性质控以及病人样本的工作稀释液。此标准的结合物同商品化制备的结合物进行比对，后者用于其它系列的阴性质控、阳性质控以及病人血清。

4. 显微镜光学器件
由于有许多可选择的光源和过滤器，因此对荧光显微镜的选择尤为重要。每个实验室都应该建立属于其自己显微镜和光学设置的ANA参考区间。荧光梯度是据光学系统标准化了的，有此梯度的标准的光学玻片目前可在市面上获得。推荐使用标准的光学玻片，这是由于其有助于实验室内和实验室间的显微镜标准化。有着梯度强度荧光珠的显微镜玻片可以用于标准化显微镜的荧光强度。使用规定的参考玻片，荧光强度类型可以直接与其它实验室获得的结果进行比较。

二、酶免疫测定试验（ELISA-ANA）
ELISA-ANA是一种检测抗核抗体的半定量的免疫测定方法。方法步骤如下：
（1）待检测含自身抗体的血清与固相接触进行孵育，此固相上有吸附的、纯化的、重组的或是天然的核抗原。

（2）未结合的血清组分被洗去，结合的ANA在检测的第二阶段通过添加酶-结合的、同型特异（或多克隆的）试剂抗体被检测出。

（3）结合的酶-结合抗体通过添加底物溶液，用适当的读数器测量产物的吸光度来进行检测。

（4）结果与同时检测的校准物进行比较得出。

1. 分析要求
ELISA-ANA含了几种关键的试剂，包括吸附有抗原的固相（如微孔板）、酶标记的（第二阶段）检测抗体（结合的）、校准物溶液、洗液、底物和终止液以及阴性和（可选择）阳性质控物。下面给出了每种试剂的要求。

1.1 吸附有核抗原的固相
ELIS-ANA试验检测盒可以从许多商业制造商处购买，制造商使用不同的抗原制备物来制备固相。此抗原制备物可以是粗提取物，如HEp-2核消化物；由纯化或重组抗原补足的粗提取物；或是纯化的或重组的核抗原混合物。固相应该能将背景（非特异的）结合降到最低。制造商应该提供抗原吸附到固相的描述，以及描述吸附的抗原与标准物和已知自身抗体特异性的血清反应的数据。固相必须能结合与结缔组织患者体内常见的核抗原相作用的抗体，这些抗原含：dsDNA、U1-snRNP、Sm、SSA/Ro、SSB/La，Scl 70、CENP及Jo1。
　

表1最常见临床相关的自身抗体及其在疾病中的流行情况

制造商应该说明固相试剂使用的抗原。假如与固相试剂结合的是有限制的自身抗体，如抗可提取核抗原的自身抗体，那么此商业检测名称必须反映出分析的不是普遍的ANA这个事实。

1.2 免疫标记（第二阶段）检测抗体（结合物）
大多数的商品化的ELISA-ANA试验都针对的是IgG型自身抗体，以及使用抗IgG的抗体作为酶标抗体。应该给出下述特定的结合物信息：
·使用的抗体种类，比如多克隆、重链；
· 抗体来源，比如兔、羊；
·使用的酶种类，比如过氧化酶、碱性磷酸酶、半乳糖苷酶。

1.3 标准品、校准物以及控制物
商品化的ELISA-ANA试验包括了校准物和阴性质控物，以及（可选择的）阳性质控物。校准物可用于定义阳性和阴性反应的临界值。制造商必须定义和解释校准的方法。结果的评分，比如阴性、可疑的以及阳性，必须参考所选择的校准物来识别阴性和可疑或阳性临界值进行解释。制造商应该解释如何确定介于阴性和可疑或阳性之间的临界值。制造商还应该要给出分析阳性质控的可接受性能（绝对响应和重复测量的精密度）的建议。

1.4 洗液及其它试剂
商品化的ELISA-ANA试验试剂盒也包括了洗液、底物溶液以及终止液。制造商应该给出这些试剂的描述，以及在使用时任何必要的注意事项。比如，必须将洗液从固相中快速地移去，以避免降低吸光度。

2. 分析确认
制造商和用户对分析确认的不同方面有责任。

2.1 制造商观点的分析确认
分析确认要与监管机构如美国食品和药品监督管理局（FDA）或其它的国际性组织规定的要求相关联。通常要求包括：
有关程序局限性的数据/说明——干扰物影响结果的信息
·预期值
- 预期值的范围，由大量人群研究获得
- 如何建立范围的说明
- 建立范围人群的信息
- 献血者研究
具体的性能
- 准确度
- 精密度
- 分析特异性，包括干扰
- 诊断特异性
- 诊断灵敏度
- 测量（报告）范围
·稳定性和存储信息（在每个试剂上以有效日期形式打印出）
· 评估每个批次有效性的质量控制程序
这些都应该与普遍接受的方法相关，其使用的生物标本来源于正常和不正常人群。

2.2 用户观点的分析确认
每个实验室引入一种未修改的、FDA-批准的检测系统时，都必须验证在用户实验室能达到制造商描述的性能规范（见上）。尽可能的，确认应该包括确定试验的准确性、再现性、报告范围/线性、检测限、分析特异性（干扰物质）、临床灵敏度、特异性及参考值。使用参考血清对于确定某特定的分析能够检测有临床意义的自身抗体以及线性反应的范围是非常有用的（见表1和表2）。可接受的批间再现性的准则是由用户规定，但通常对于阳性质控血清的重复测量CVs应该小于20%。参考值的建立在下述单元12进行讨论。假如使用的是自动化系统进行检测，那么用户应该确认检测平台不会产生任何加工品，例如，若洗液在添加底物溶液前被吸出或留在微孔板的孔上，这样可能会得出不同的结果。

3. ELISA 酶标记结合物
结合的底物和酶标记的结合物是一套固定的试剂。抗体结合到结合物上的酶，反应产生颜色。制造商应该说明结合抗体的酶、底物以及可能的干扰物。

4. ELISA 检测方法
通过在特定的波长下（此处有色反应产物吸收最强）检测光吸收率从而进行检测。此波长取决于吸光分子，制造商必须给出此波长。检测光吸收率必需使用适当标准化的设备。为了消除偏差，应该使用一种参考波长（制造商也应该给出，测量波长的结果减去这些结果）。另外，执行测量空白值等同于标准检测程序，但检测不含待检抗体（病人血清）。得到的值应该从测量值中被减去，以降低测量的背景和非特异性。
用户负责设备有效的和充分的使用及维护。

5. 技术考虑
抗原包被的浓度和选择的缓冲液、活化程序（若使用）以及阻断剂的使用取决于检测系统的结构以及使用的其它试剂【比如，结合物浓度以及结合/标记效率，检测方法和试剂（浓度）的灵敏度，固相等】。因此，对于规定的含量或浓度没有一般的建议或限制。这些组分中的每一种（固相、活化、抗原、封闭试剂、结合物）都是很重要的，并且必须要保证其一致性使得检测具有可复现性，有效的性能。

可靠性、可复现性和试剂联合的性能以及它们在分析中的使用都必须在生产过程确认和分析性能确认中得到证实。

6. 替代，新兴的固相技术
近年来，发展起了一些基于固相的技术。这些是基于与微孔板检测相同的原理：
·将抗原包被在固相上；
·特定的抗体结合抗原；
· 结合的抗体结合特定抗体；
· 反应的检测。
在结合物的类型、检测方法以及自动化的程度上都发生了变化。能连接到常用的软件报告设备上的全自动系统是可以实现的。

固相检测已经发展到在其表面固定上蛋白，固相包括有玻璃、膜、微孔、质谱板及珠子或其它颗粒。分析都是高度并行的（多重化的）并且通常是微型化的（微阵列、蛋白质芯片）。共有的特征是能够从单一的实验中产生大量的数据。生物信息学的支持很重要；数据处理要求尖端的软件和数据比较分析。这些方法能同时提供检测大量的特异性抗体的机会。一个“筛查”结果可以通过将个体检测结果增加到一个人工筛查结果中进行适当地计算来得出。

三、抗体的定量，参考区间及试验结果报告及实验室内质量控制

1. 抗体的定量
得出数值型结果（如，滴度或任意单位）的分析被认作为半定量的。阳性的结果是以与吸光度临界值（ELISA-ANA 试验）有关的滴度（IF-ANA 试验）或任何单位的形式表达的。在每种情况中，结果都是半定量的。尽管用这两种方法区分高水平的抗体反应与低水平的抗体反应是可能，但是要辨识检测标本的抗体浓度小的差异是不可能的。IF-ANA方法检测出的差异典型为±2连续双倍稀释，而ELISA-ANA方法为±2SD（批间CV为15%-20%，约±30%～40%）。此差异当在研究试验结果解释的参考区间时可能具有临床意义。

2. 参考区间及结果报告
建立参考区间的过程应该要包括对临床诊断应用的考虑。对于IF-ANA试验，使用HEp-2底物典型的参考区间临界值为40或80滴度。高滴度可以用于指示结果，其具有系统性风湿性疾病的高可能性，或是在后续的试验中具有抗dsDNA抗体或可提取核抗原的自身抗体抗体结果阳性的高可能性。当阳性结果被定义为40或80滴度时，可预见在少数健康成人的结果会有阳性结果。然而，将临界值的设置在一个较高的滴度（如160）可能在某些临床情况下会降低试验的灵敏度。设置IF-ANA试验的临界值在某一滴度应该要基于对所检测病人人群的考虑。比如，在一般的临床群体中临界值为较低的滴度，可能会导致大量的临床“假阳性”，而较高的滴度可能会导致在有较高系统性风湿性疾病危险的病人中出现不可接受的低灵敏度。同样的考虑也适合于ELISA-ANA参考区间的建立。如上所述（见单元11），ELISA-ANA试验获得结果是通过与标准曲线或单一的校准点比较得到的，结果表达形式通常为随意单位。阴性与阳性之间的临界值的建立通常是制造商检测一群健康个体并计算出此健康人群平均水平吸光度的标准差而得出的。边界和阳性结果的临界值是由对平均吸光度水平增加一些吸光度的SD得出的。对于参考区间额外的细微改动必须由实验室基于其常规检测病人群体情况得出。例如，定义和确定不同水平的阳性结果是很有用的，这些阳性结果是与后续试验检测特定自身抗体可能性的增加相关的。检测报告可以将这些水平定义为像“强阳性”，或结果可能给临床医生警示，出现了大量的不正常结果。假如用户想要这么做，那么将临床医生纳入到定义这些额外的参考范围的过程中是很重要的。

3. 实验室内质量控制
接下来的推荐同时适用于IF-ANA和ELISA-ANA试验。个体实验室应该对每个分析都进行室内阴性和阳性质控检测。阳性质控物的选择水平应该具有临床决策的重要性（见上）。也推荐实验室保存大量的已检测为阴性或阳性的血清，目的在于对检测试剂进行试剂批次间的比较。这些血清结果的数据库应该包括实验室定义的可接受变异的定义。此定义应该就同之前结果的整体（定性的）一致性/不一致性而言，或可以包含有其它的定量标准，如至少85%的结果给出两个批次数值等价的结果。实验室也可能发现其对于监测检测结果的频率是很有用的，这些结果处于不同的参考范围分类中，比如，阴性、边界（中间）或阳性。此技术对于检测试验中的变化是很有用的，其随着检测试剂批次连续性的变化而发生。

4. ANA检测参考制备物
世界上许多组织已经加入到了ANA检测使用的标准和参考制备物中。在美国包括有美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS，目前叫做临床和实验室标准化研究院[CLSI]），关节炎基金会（AF），疾病控制与预防中心（CDC），美国病理学家学会（CAP）以及医学实验室免疫学家协会（AMLI）。关于ANA检测参考制备物的国际组织有世界卫生组织（WHO）、英国国家生物标准与控制研究所（NIBSC）、国际免疫学会联盟（IUIS）以及荷兰生物学标准国际实验室。

4.1 定义及术语
WHO国际标准：对于生物学物质这些标准的每个都指定有一个国际单位。成员已同意让这些物质服从国际质量控制测量以及将物质的效能以国际单位或其等价物形式表达。

WHO国际参考试剂：用在定性识别的高特异性的试剂。
国家标准物质：这些标准物质已经指定了以WHO国际标准或国际参考制备物形式的校准单位量。
国际标准化组织有如下的定义：
标准物质（RM）—— 一种良好建立的方法或物质，用于测量方法的校准或验证。
有证标准物质—— 采用计量学上有效程序测定的一种或多种规定特性的标准物质/标准样品，并附有证书提供规定特性值及其不确定度和计量溯源性的陈述。
测量单位—— 国际单位（IU）的指定是完全随机的，长度和质量单位之间没有关系。

4.2 WHO/IUIS 参考制备物

4.2.1 WHO ANA参考制备物（同质的 WHO 66/233）
在1971年，Anderson等人报告了一篇抗核因子66/33（同质的）的协作性国际标准研究。此物质被WHO和IUIS采纳作为了一种国际参考制备物。每一安瓿被定义为含100IU（国际单位）。内容物在1mL的液体中稀释后，就获得了100IU/mL的浓度。表2指出了获得此及其它的标准和参考物质的来源。

Feltkamp等人使用WHO66/33做了一次协作性实验室研究。研究表明当使用此参考制备物时，对同质的荧光类型的实验室间可比性得到提高。

WHO/IUIS 66/33（同质的）可能不适合于评估斑点型或其它类型的IF-ANA。此制备物主要含有IgG-ANA，最好用于比较含有IgG类ANA活性的血清。

4.2.2 WHO/IUIS IgM 类 ANA
IUIS免疫荧光委员会，成立于1971年，对发展含IgM类ANA（HL,含重链和轻链）参考血清具有很大的贡献。一批冻干的阳性血清来自于6名患SLE的病人混合血清。一安瓿含有100任意单位的ANA活性，作为冻干血清。终点为显示核染色与阴性反应能进行最小区别的最高稀释。

4.2.3 WHO/IUIS 480010
IUIS委员会也帮助研发了两种WHO/IUIS国际异硫氰酸荧光素（FITC）结合抗体制备物，其用于IF-ANA检测中。英国医学研究委员会委派了一个工作团队来定义此制备物、结合以及荧光结合物特征的规范。其后，IUIS标准化委员会鼓励发展羊抗人Ig结合物480010，以及帮助指导与WHO参考标准66/33的国际协作性研究。

480010结合物被指定给WHO生物标准化专家咨询小组作为一项国际标准，并且其是得到了WHO和IUIS接受的。每0.5mL安瓿的480010被定义含有100IU/500μL（或200IU/mL）。FITC结合抗IgM和抗IgG的标准制备物同样已经由WHO/IUIS制备和接受了。两种标准物都包含了100IU/安瓿。Beutner等人的方法评估以及滴定了使用于IF-ANA中的FITC结合物。

4.2.4 WHO对抗双链DNA抗体的标准物
在1988年，Feltkamp及其同事研发了第一个双链DNA（dsDNA）抗体自身抗体的国际标准物，编码为Wo/80。此Wo/80血清是在患SLE病人血浆再钙化后得到的。小瓶内有500μL的血清并且冻干保存。此标本可测量血清中不含有其它自身抗体。

Wo/80血清小瓶被8家实验室用Crithidia lucidiae免疫荧光技术检测。滴度范围介于1:20到1:640之间（平均1:160）。在7家实验室中，DNA抗体法尔分析也使用了商业试剂对Wo/80标本进行了检测。在稀释度为1:40时，观测到了大约50%的平均结合百分数。用500μL的蒸馏水重组后，小瓶被贴标签为含100IU/500μL或200IU/mL。

4.3 AF/CDC 对核自身抗体及细胞间抗原自身抗体的参考血清
于1980年，AF与CDC协作建立了抗核抗体血清学委员会。此委员会致力于建立ANA参考血清库，以便美国及其他国家的研究者或临床实验室能获得。此ANA参考试剂是作为定义ANA特性的一级标准，并且临床实验室使用其来定义他们自己的二级参考试剂。

1982年，AF/CDC委员会使用表3中列出的方法制备以及分析了参考制备物。5种参考血清提供ANAs参考试剂规定如下术语：
· 三种类型的荧光抗核抗体：同质的/边缘类型以及两种不同的斑点核浆类型。

· 四种不同抗核抗体由免疫扩散分析确定：天然DNA抗体，SS-B/La，核核糖核蛋白（nRNP）和Sm。

AF/CD实验室的参考试剂库扩张到含不止5种参考ANAs，其同最终的5种试剂处理和分析的方法是相同的。在1988年，这些试剂就是可获得的，并在表4中有进行描述。

这些制备物对于研究者和临床实验室在IF-ANA的标准化中具有重要的价值。将那些定义了dsDNA\SS-B/La，nRNP以及Sm特性的同常用的IF-ANA底物，包括小鼠肾组织和人上皮（HEp-2）组织培养细胞，进行比较。推荐使用这些参考血清进行IF-ANA检测。

1992年10月，AF/CDC委员会进行了重组，现在叫做IUIS-ANA分委会。参与组织包括了CDC、AF、WHO、国际抗风湿病联盟以及欧洲抗风湿病联盟。AF/CDC标准已经用于了评估对具体的ANA的酶免疫分析（EIA）。

4.4 美国病理学家学会抗SS-A/Ro 抗体的参考血清
1991年，美国病理学家学会的标准委员会和免疫学资源委员会制备了一种非特异性的参考血清，仅含有抗SS-A/Ro核抗体。此参考制备物（批号#C103BG）有阳性免疫扩散沉淀抗SS-A/Ro抗体的指定值以及阳性滴度范围为1:4到1:32。此参考血清用于检测IF-ANA底物细胞以发现SS-A/Ro抗原。另外，此单一特异性的抗SS-A/Ro参考血清能用于免疫扩散分析检测未知抗SS-A/Ro。

4.5 医学和实验室免疫学家协会（AMLI）ANA参考制备物
AMLI已经研发了一组抗核及抗细胞浆抗体一致性血清，其可以用于酶免疫（EIA）、双重免疫分析以及免疫荧光分析中。此套血清是由许多临床实验室以及大量的商业实验室评估过的。供应商和临床实验室是可以获得这些血清的，以用于检测SSA、SSB、Sm、UI-RNP、ScL-70、Jo-1、DS-DNA以及抗着丝粒抗体（见www.amli.org/standards.htm）。

表2 获得标准物和参考制备物的机构

表3 AF/CDC建立的ANA参考血清

表4 AF/CDC ANA参考实验室可获得的参考抗核抗体

(来源于Tan EM, et. al. Reference reagents for antinuclear antibodies (Table 1) [letter to the editor]. Arthritis Rheum. 1988;31:1331. Reprinted with permission from John Wiley & Sons, Inc.)

试备注：
缩写：ANA=抗核抗体；U1RNP=富尿苷核糖核蛋白

5. 其它实验室试验用于ANA检测的特殊考虑
细胞内和细胞核抗体临床实验室筛查试验最常用的程序是IF-ANA及酶免疫试验。两者都对基本的抗原抗体试验敏感。

对于ANA特定识别的二级决定性的试验是免疫扩散、免疫沉淀、颗粒凝集、免疫印迹以及放射免疫检测方法。

免疫沉淀和双向免疫扩散方法已用于确定几种ANAs特异性。双向免疫扩散中的分析特异性通常决定于程序使用的控制血清的质量，以及抗原制备物的性质。免疫扩散试验不是非常灵敏的。免疫扩散的阳性试验具有高度的特异性可作为某些风湿性疾病的一种诊断标记物。

商品的免疫扩散试剂盒可用于检测RNP、Sm、SS-A/Ro、SSB/La和ScL-70抗体，以及其他较少见的标记物。

与免疫扩散试验相比，ELISA试验显示出较高的灵敏度，但特异度较低。而且，ELISA检测常常在患风湿性疾病而非SLE的病人血清中于低滴度得出阳性结果。例如，免疫扩散方法检测，出现了抗Sm抗体被认为对SLE具有高特异性。然而，在定性的ELISA检测中，抗Sm抗体在54名RA病人中23%为阳性，24名系统性硬化病病人中25%为阳性，11名多发性肌炎病人中9%为阳性以及59名正常病人中2%为阳性。应该考虑到这个问题：增加灵敏度和降低特异度是否会导致假阳性检测结果。
　

好资料，谢谢分享