[求助]CRP反应曲线无法得出结果

高渐离 · 发表于 2012-6-27 22:53

上次有位高人让我发定标曲线和反应曲线，这下有了，不知道什么原因，感觉CRP一直做不出结果

高渐离 · 发表于 2012-6-27 22:55

第一幅图是能做出结果的，第二幅图是定标曲线，第三幅图是做不出结果的

郑振寰 · 发表于 2012-6-27 23:17

参数也发出来。看图好像用的速率法，两个点太近，第一图稍微有斜率，第三图干脆就是直线肯定没有结果。应该是方法问题。而且三图的R2加入后有问题，搅拌或者其他方面有问题。

郑振寰 · 发表于 2012-6-27 23:32

如果用的速率法，则是方法和读点错误；如果用的两点法，则读点错误，第一点应该19或18，第二点应该在34-40之间选点。检查一下参数吧。

定标曲线是样条曲线，做的很漂亮，不过没多大用处，方法或者读点就不对也就没有意义了。貌似你选了7个点，难道拜耳的机器定标几个点是不算水点的？

高渐离 · 发表于 2012-6-28 21:27

以下是引用郑振寰在2012-6-27 23:32:00的发言：

如果用的速率法，则是方法和读点错误；如果用的两点法，则读点错误，第一点应该19或18，第二点应该在34-40之间选点。检查一下参数吧。

定标曲线是样条曲线，做的很漂亮，不过没多大用处，方法或者读点就不对也就没有意义了。貌似你选了7个点，难道拜耳的机器定标几个点是不算水点的？

用的是终点法图上最后平衡部分由两个红色的点可能拍的不是很清楚，至于定标的水点第一个点浓度为零的不就是吗，而且当时为了去除基质效应，好像用的是一个浓度为120的病人的血清倍比稀释了做的所以自然没有零点吧因为零点一直做不好，至于您说的读点我会进一步验证的因为读的两个点靠的太近了所以根本就没有太大的吸光度差异，除非标本自身的浓度就很高，所以一些比较低的正常人的值就读不出来了总的来说还是谢谢您前辈！！

郑振寰 · 发表于 2012-6-28 21:42

加上水点就是7个点了，六点定标本身就包括水点。再说CRP有定标液的，用定标液倍比稀释就是，干吗用标本做呢？标本的结果120如何保证其准确呢？一个水点，5个倍比稀释点这叫六点定标。怎么看你的定标曲线都是七个点，而且水点都是负数，不知道怎么做的，水不好还是怎么？不管怎么样，曲线做的不错，也与结果不出来没有关系。

高渐离 · 发表于 2012-6-29 12:48

基质效应啊，我们买过定标液的，定下来不好。再说了，试剂的检测限不是要大于5的吗！我们科室有台HSCRP的仪器，有些标本坐下来都小于1的，所以根本应该也在生化仪上做不出来的。会不会是因为透射比浊法测定CRP的时候生成的免疫复合物的浊度太低啦？以至于吸光度太低，所以取得点不好。

郑振寰 · 发表于 2012-6-29 16:44

什么就基质效应，别找不到原因就往这里靠，测试参数完整的发上来，总能找到原因的。

高渐离 · 发表于 2012-7-1 15:08

参数来了

高渐离 · 发表于 2012-7-1 15:15

我晕，怎么发不了图啊？

郑振寰 · 发表于 2012-7-1 17:33

好了，看明白了。

1、定标是7点定标，样条曲线，没有任何问题，非常漂亮。

2、参数终点法，空白读点是18-19点，测量读点为39-40，双波长测试，这些都没有问题。

3、问题出在验证环节：Limit value是测试值和空白值之间的吸光度差值限制，这个限制直接决定测试结果是否被显示。低于这个限制直接*号屏蔽了。

你的设置是0.03，第一个反应没有问题，空白值小于0.05和测试值超过0.13，差值大于0.08.而第三个曲线你没有拍照完全，但空白和测试值据猜测绝对小于0.03，所以触发限制判断。

现在看来这个限制没有问题，问题出现在第三个曲线中的R2加入后的曲线，出现急剧下降的现象，据此判断是交叉污染或R2搅拌棒污染或停转导致，根据这个思路检查一下设备吧。

高渐离 · 发表于 2012-7-1 18:28

能加个QQ传给你吗？还有几张图怎么上面没有显示？是显示每一个点所读取的吸光度的，而且你说的加入R2之后曲线突然下降这个问题只是针对做不出来的值，有的值还是能做出来，比如高值，如果是搅拌问题，应该统一存在的啊。有很多问题要请教你的。

郑振寰 · 发表于 2012-7-1 18:35

就是我说的原因，去查吧，再讨论下去没意义了。

高渐离 · 发表于 2012-7-3 13:18

郑工，能帮忙解释下图中的S是什么值吗？还有那个E2是怎么计算的来的？ABS_RB和ABS，ABS1，ABS2之间的内在联系。我只知道ABS1是39和40点的平均，ABS2是18和19点的平均，ABS_RB貌似是除却试剂空白之后得到的值。

郑振寰 · 发表于 2012-7-3 18:13

RRVNo：反应杯号。162
Conc.：浓度值。0.00000
Mark：提示标记。这里带有/，表示数值超过限制。
ABS-RB:表示测定值与试剂空白间的差值。0.01116
ABS：主副读点吸光度值。0.01116
E1：如果进行底物过剩DPI判断，则是这个点的值，如果没有选择DPI判断，则是第一个主点的值，也就是39点。0.01665
E2：6、7、8点吸光度的中间值，也就是S+R1的值。0.00664
ABS1：主波长读点的吸光度。0.01671
ABS2：副波长读点的吸光度。0.00662
ABS(ABS_RB)和ABS1的值差小于设定的0.03，自然超过限制，所以给你/屏蔽掉了，浓度值也就为0。
N：用于精确浓度计算的点，你选择了2个点，所以这里也是2个。
S：离散值，表示测量点的精度。
P：前带值。

不管怎么样，这个CRP不出数值的原因很清楚，就是R2加入后出现了不合理的下降，除了前面说过的搅拌及污染外，可以继续引申发挥，那就是开始的样本就不对，R1也可能加入有问题，R2加入量偏少，可以联想到针半堵塞等情况，或者注射器有气泡，针内去离子水有气泡等等。如果这份标本真的浓度就是低的话，你可以考虑修改一下0.03的限制。
我没有随机手册，最好还是看看随机带来的操作手册吧，上面有详细的解释。

最后的数据列表显示出主副波长的吸光度值和差值。是这个项目反应全过程的数值，序号1-42表示读点。

许由 · 发表于 2012-10-29 15:36

很不错的案列

许由 · 发表于 2012-10-29 15:44

看了这个帖子真是学习受教了

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