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XXX医院检验科免疫室 |
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（双抗原夹心酶联免疫法）检测标准操作规程 |
文件编号:
生效日期: 年 月 日
版本:第1版
第 页，共 页 |
乙型肝炎病毒 表面抗原 定性 检测标准操作规程
1．实验原理：
本实验采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
2．实验设备组成
试剂盒：
试剂名称：酶免疫法测定乙肝表面抗原试剂盒（立可读）
生产单位：上海实业科华生物技术有限公司
试剂规格：96人份；48人份
批准文号：国药准字S1090113；国药准字S1090114
质控品：
加液器：型号
离心机：
温箱（或水浴箱）：型号
洗板机：型号
酶标仪：型号
其它实验仪器：
3．试剂盒组成：
（1）包被反应板 （2） HBsAg阴性对照血清
（3）HBsAg阳性对照血清 （4） 酶结合物
（5）显色剂A （6）显色剂 B
（7）终止液 （8）洗涤液 （ 蒸馏水1：25稀释）
等（其它组成物详见试剂盒说明书）。
4．标本要求：
标本种类： 血清（非抗凝血，自然凝固1～2小时，3000rpm离心15分钟制备）。
血浆（抗凝血采集后，应立即颠倒混合5～10次并放置一段时间，3000rpm离心15分钟制备）。
拒收条件： 蛋白变性标本；标本中含有颗粒物质；严重溶血、脂血标本。待检标本不可用叠氮钠防腐。
标本保存： 标本若当天检测，可在室温下保存；标本若五天内检测，应在2～8℃冰箱内保存；标本若长期保存，应在-20℃中密封保存（应为血清或血浆）。
标本用量： 血清（或血浆） 微升或全血（抗凝血） 毫升。
5．试剂要求：
试剂盒应该置2～8℃，避光保存。
从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于2～8℃冰箱中以备今后使用。
6．操作程序：
（1） 洗涤液配制： 将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。
（2） 加样： 空白孔不加样本及酶结合物只加显色剂A液、B液和终止液，标本孔加入待测标本每孔50μl，阳性对照孔和阴性对照孔各加对照液1滴（或50μl），然后加入酶结合物每孔一滴（或50μl），充分混匀后，封板，于37℃水浴箱（或温箱）孵育30分钟。
（3） 洗板
手工洗板：弃去酶标孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。
洗板机洗板：采用XXX洗板机洗板，选择洗涤5次程序，每孔使用300μl洗涤液洗板，然后拍干。
（4） 显色：
每孔加显色剂A液、B液各1滴（或50μl），充分混匀后封板，置37℃孵育15分钟。
（5） 终止：
每孔加终止液1滴（或50μl），混匀。
（6） 比色：
使用XXX酶标仪，以空白孔校零，在 450 / 630nm波长处，读取各反应孔OD值，比色须在10分钟内完成。
6．结果判断及参考范围：
（1） Cutoff值计算：COV=阴性对照OD值 × 2.1；
（阴性对照OD值小于0.05按0.05计算，高于0.05按实际值计算。）
（2）
标本OD值≥COV 为阳性；
标本OD 值< COV 为阴性。
（3） 参考范围：阴性。
7．质量控制：
室内质控应与标本检测同时进行。
8．方法学特性及注意事项：
（1） 不同批号试剂盒不可混用。
（2） 标本如需要稀释，请用小牛血清稀释。
（3） 试剂盒内试剂使用前应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加，注意用力均匀。（4） 检测结果为阳性可疑时，应进行复测或使用其它方法测试。
（5） 洗板所用吸水纸勿反复使用。
（6） 结果判断须在10分钟内完成。
（7） 若浓缩洗涤液出现结晶时，放置37℃至溶解。
（8） 本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
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