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梅毒TRUST试剂，作为常规的梅毒初筛实验使用时，很方便。但是在检验操作过程中，经常出现抗原悬液不足的情况，为什么会出现如此的偏差呢？
答 在实际操作过程中，引起抗原悬液不足的因素很多，现讨论如下：
1. 由于抗原本身用量很少，所以在滴加中应要特别注意滴加的角度，一定要90℃垂直，不能偏差。否则角度越大或越小，用量就越大。
2. 抗原瓶打开使用后，应立即盖紧瓶盖，置于2-8℃冰箱保存。
3. 每次检测需作的阴阳性鉴别，使总人份相对减少。
4. 一般厂家在试剂盒内都会提供一个塑料滴管及专用9号金属针头。省略金属针头，直接用塑料滴管滴加，这样的操作也会增加抗原悬液的用量，导致整个用量的不足。
专家建议
正确按厂家提供的说明书操作，另外在滴加抗原时改用微量移液器操作也不失为一个很好的方法，这样就会避免抗原悬液不足的问题。
问 甘油三脂作为一项常规的血脂检测项目，在操作液体双试剂时发现，有时混合后有发红现象，请问这是怎么回事？
答 甘油三酯酶试剂应为微黄色，双试剂混合后，可能出现微红色。如在双试剂混合后，试剂明显增色，表示试剂的组成可能由于变红反应而发生改变，可能影响检测结果。红色只是现象改变，并不等于试剂的质量发生改变，只有当空白吸光度>0.2或检测结果不符合质控要求时，才不能使用。至于变红的主要原因，对于厂方来说，主要是组成原料不纯（包括水质不纯），但经事先质控，产品外流的可能性已经被杜绝，其他也有如分装过程等引起的外来污染。正规的厂家一般都有严格的制度，如要求分装人员必须带手套，分装用具须清洗干净等，基本消除了污染环节；在使用方，主要是污染，特别是许多其他试剂组成成分中含有甘油或活性剂等成分以及清洗剂和清洗水质的污染。其次是保存不当、仪器管道或试剂瓶不洁等各种原因引起的污染。所以，在各厂家的试剂说明书中，一般都强调在操作过程中，应该特别防止器皿、移液器、手对于试剂的污染，避免试剂质量发生改变。
问 在酶免试剂盒操作中，经常出现反应显色淡、灵敏度偏低等问题，请问是什么原因？
答 反应显色淡、灵敏度低有很多因素，下面只介绍几种可能的较常见的原因：
1. 试剂盒在运输途中时间太长，温度太高；要求运输时置于保温箱内运输，并放足够数量的冰块，尽量缩短运输时间。
2. 试剂盒超过有效期；建议不要使用超过效期的试剂盒。
3. 试剂、样品使用前未能平衡；建议使用前于室温平衡30分钟左右。
4. 试剂开启时间过长，长菌；建议试剂开启后应该于半个月内用完。
5. 移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内壁不清洁。建议使用一次性的吸头。
6. 恒温箱温度不足37℃ （或水浴锅温度不足37℃）；建议孵育反应期间应该控制好温度。
7. 孵育反应时间不足；建议应准确记时。
8. 洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加。建议减少洗涤冲击力，按说明书要求的时间，准确记录洗涤时间。
9. 显色剂滴加量不足或顺序颠倒，或混合后加入；建议应该先加显色剂A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入。
10. 显色剂反应时间不足；建议准确记时。
11. 蒸馏水水质有问题；建议检查蒸馏水。
12. 样品用叠氮钠防腐，抑制了酶的反应；建议不能加叠氮钠防腐。
问 目前国内胆红素在临床检验中主要存在哪些问题？
答 主要有三个方面的问题：
临床检验结果之间的可比性较差：同样一个检测样品，各厂家生产的试剂盒其检验结果往往相差很大，但并不能因此判断出试剂盒的好坏。
正常水平的胆红素含量比较低，使得检测方法的灵敏度和检测仪器的精密度成为影响检测结果的重要因素之一。
氧化法测定胆红素过程中对pH值的要求很严格，外来影响导致pH值的变化对检测结果产生很大的影响。
问 为什么临床检验结果之间的可比性较差？
答 主要存在两方面的问题：
标准品问题：胆红素本身不稳定，不易保存，特别是直接胆红素制备困难；由于国内目前没有统一的标准品供应，造成胆红素标准品的标准化问题得不到解决；目前市场上销售的胆红素标准品多为各种胆红素的混合物（或异构体），不适于作为直接胆红素测定的标准物。
直接胆红素测定方法学上的概念模糊：一方面，近来胆红素测定的方法主要有两类，即重氮法和氧化法。据文献报道，重氮法检测了结合胆红素（Bc）和大部分的δ胆红素，Bc又包括mBc和dBc，而氧化法检测了结合胆红素（Bc），是否包括δ胆红素还是个未知数，尚无相关数据；另一方面，直接胆红素和结合胆红素的概念模糊，导致有人认为直接胆红素就是结合胆红素，也有人认为酶氧化法测定的结果是结合胆红素，而化学氧化法测定的结果是直接胆红素。由于上述的概念模糊，造成临床上对检测结果的解释发生问题。
问 上面讲到了多种胆红素，但胆红素具体是怎样分类的还不是很清楚，能不能做一个简单的介绍？
答 根据最近修正的胆红素定义，总胆红素应包括游离胆红素（Bu）、结合胆红素（Bc）及δ胆红素（Bδ），其中结合胆红素（Bc）又分为mBc和dBc。在重氮反应中，直接胆红素包括结合胆红素Bc（mBc及dBc）和δ胆红素（Bδ），文献报道只有85%左右的Bδ与重氮试剂发生直接反应。
问 在氧化法检测胆红素的过程中，如何减少pH值的影响？
答 加倍注意仪器的清洗，一定要清洗干净对于某些仪器，胆红素的检测要避开强酸、强碱试剂项目，以防污染。
问 如何解释同一标本，直接胆红素的重氮法检测结果通常会高于氧化法的检测结果？
答 因为重氮法检测了结合胆红素（Bc）和大部分的δ胆红素（Bδ），而酶氧化法等只检测了结合胆红素（Bc）。
问 目前尿素氮在临床检验中主要存在哪些问题？
答 主要有四个方面的问题：
试剂稳定性较差。
试剂中酶量不足，特别是NADH的不足。
存在方法学上的缺陷。
一些抗凝剂的不当使用也会导致检测结果的偏差。
问 尿素氮试剂的稳定性为什么较差，针对这个问题如何解决？
答 尿素氮试剂的稳定性差是由于试剂中NADH的不稳定造成的。NADH容易被氧化，造成吸光度下降，并且目前尚无好的方法能够使尿素氮试剂中的NADH保持稳定。这个问题可以用标准加以控制，在检测的过程中经常定标。
问 为什么在临床检验中尿素氮试剂的线性不好，造成BUN高值检测不出？
答 同上面的问题一样，原因都出在NADH的稳定性上。NADH被氧化后含量降低无法完成同BUN的偶联反应。
问 针对NADH含量低的问题，如何解决？
答 根据相关报道，有人建议在试剂中加入正常用量6倍的NADH。
问 BUN检测方法学上存在什么缺陷？
答 目前尿素氮的检测方法主要是脲酶-NADH偶联法，该方法学存在以下2个缺陷：其一，血清中的血氨含量增高的情况下，会同时消耗GLDH和NADH，使得检测结果不准确；其二，内源性的酶与指示酶GLDH竞争氧化NADH，从而降低了酶促偶联系统的准确性。
问 尿素氮检验方法学上的缺陷如何弥补？
答 目前尚无好的解决方法，但可以根据临床诊断结果来纠正参数，例如延长延迟时间等。
问 什么样的抗凝剂会造成检测偏差？
答 带氨的抗凝剂会消耗GLDH和NADH，造成检测结果的正偏差；而含有抑制脲酶活性成分的抗凝剂会造成检测结果的负偏差。
问 李主任，我一直在请教您关于高密度脂蛋白的问题，我不知道您对于荣盛公司低密度脂蛋白的检测有何理解？
答 高、低密度脂蛋白检测一直是临床血脂检测的重头戏，我们公司的低密度脂蛋白方法最初研制的时候就是采用的消除法，所以，方法学的到位，让我们确实体会到高品质带来的精神的愉悦。
问 您这样说，我就知道了，一直听到客户朋友对于公司低密度脂蛋白的称赞，但是，也有一个问题想请教您，据市场反馈的信息，为什么临床上许多医院不检测低密度脂蛋白？
答 是的，你这个问题提得好。确实，这是部分医院的情况，当然原因是多方面的。不过，还是受"历史遗留问题"的影响比较多。
问 什么叫"历史遗留问题"？
答 主要是在当时特定的历史条件下，没有简便的方法来检测LDL-C，包括沉淀法，所以就用公式来计算。
问 那是什么样的公式？
答 原公式按旧单位（mg/dl）计算，假设血清中VLDL-C为血清TG量的1/5（按重量计），则 LDL-C = TC - HDL-C - TG/5。按法定计量单位计，则应为LDL-C = TC- HDL-C - TG/2.2。
问 这样看起来公式计算不是挺好的吗？有什么问题呢？
答 这个公式中检测TC、HDL-C和TG时，首先必须标准化（方法学和参考品以及检测结果必须达到规定的准确度和要求）。而且对于病理标本下的检测公式计算法准确度不能使用。
问 病理条件？什么样的病理条件呢？
答 有这样的几种情况：血清中存在乳糜微粒血清TG水平 >4.52 mmol/L （400 mg/dl）时血清中存在异常 a 脂蛋白时（III 型高脂蛋白血症）计算出的LDL-C中包括IDL-C及 Lp（a）-C
问 这样看来，公式法还真不能用，否则计算出来的结果对于临床诊断没有太大价值了。
答 是的，临床检测使用公式法，确实是有缺陷的，它在特定的历史时期起了一定的作用。但是随着检验水平的不断提高，新方法的应用还是逐渐被临床检验部门采纳。
问 是呀，检验本来就是为临床诊断提供参考依据，所以，我们应该尽力宣传推广LDL-C的应用。
答 是的，这种宣传是必要的，除了对检验行业的发展有利外，对我们研发的劳动成果能应用于实践也是一种安慰。当然，还有商业的因素。
问 那荣盛公司的低密度脂蛋白消除法检测方法好在哪里呢？
答 如同高密度脂蛋白检测意义一样，具有高特异性,而且可以完全避免计算法造成的错误结果。
问 如果高、低密度脂蛋白能结合检测，对于辅助临床医生诊断治疗应该是很好的。
答 是的，我也期待着我们公司的产品能尽快地推向市场，满足广大医院客户朋友的需求。
问 目前市场上有很多方法的HDL-C试剂，对于这些试剂来说，方法学应用主要有哪几种？
答 主要有沉淀法、匀相法。匀相法又称直接法，主要包括PEG修饰酶法、选择性免疫抑制法（亦称选择性遮蔽法）和消除法。
问 市场上现在有好多公司都在供应HDL-C直接法试剂，但是有的没有注明是哪种直接法，您觉得现在国内外研究HDL-C真正可行的方法学是到了什么地步？
答 确实如你所说，很多。但是，据我了解，真正可行的方法学是最新一代的消除法试剂。现在国外的厂家有日本第一化学和英国朗道公司等厂家，国内公司也有生产的。
问 刚才您提到国内厂家也有生产的，是哪家呢？
答 根据最近修正的胆红素定义，总胆红素应包括游离胆红素（Bu）、结合胆红素（Bc）及δ胆红素（Bδ），（笑）你这样问，我就要说了，我们荣盛公司有了，当然其他公司也会有的。
问 您刚才提到荣盛公司有了最新一代的消除法试剂，那么，荣盛公司以前HDL-C测定是什么方法？
答 我们公司以前的也是直接法，但不是消除法，是选择性抑制法。
问 那您说，同样是直接法，那为什么要选择抑制法呢？
答 你这问题问得好。确实，刚开始时，选择性抑制直接法，取代沉淀法是一种进步，这种方法样品用量少（3ul），精密度高（批内批间CV< 3%），与PTA-Mg2+相关性好，r= 0.987，线性范围可达1500 mg/L，回收率微90-110%，Hb和VitC等无干扰。但是它暴露出来的缺点是自身方法学?瘠污杩?没有办法解决的。
问 什么叫自身方法学没有办法解决的缺陷？
答 你知道，选择性抑制法，又叫选择性掩蔽法。既然掩蔽，那就有掩蔽尺度问题。掩蔽得多了，HDL-C释放不出，难以正确测定；掩蔽少了，干扰大。所以，自身没有办法解决这个矛盾。但国内外文献报导，至今仍没有否定本选择性掩蔽法，它的弊端在测定时加以技术处理，基本可以解决问题。
问 你这样解释，我知道了。因为在接受用户反馈时，有时反映，荣盛公司的HDL-C产品某些样品过一段时间会出现偏高值的现象，是不是跟方法学有关系呢？
答 是的，我们生化室刚开始在接受市场反馈后，首先检查的是质量控制环节上的问题，对于很多指标重新测定，没有问题。确实，是这个方法学上的弊端反映在这方面。刚才跟你说了，掩蔽的不足对某些高LDL-C/VLDL-C的样品出现干扰，导致测定结果假性增高，具体地说，也就是个别样品中的非HDL-C部分地被测出。
问 那就是说，没有办法知道哪个样品的结果什么时候偏高？
答 （喝了一口茶，笑）那倒不是。对于检验科来说，偶尔碰到一个非HDL-C很高的，那么就有可能出现假性增高。Huang等研究指出，本法对校正系统重新标准化，可以提高其特异性。对于大量诊断样品来说，LDL-C的值一般是正常的，或增高在一定限度内，对HDL-C的测定并无影响。
问 我知道了，方法学带来的问题是与大批样品的检测质量没有关系的，但是对某些检测结果，用户确实会感到与试剂质量有关。因为它确实影响到了检验医师对于报告结果的判断。
答 是的，所以，我们在了解国外的最新方法学后，就一直在致力研究这个消除法。不是我老头跟你抱怨，这个消除法还真是折腾人，我是将近二十个月才把它降伏。
问 李主任，你真有意思。那您能告诉我，它是怎么个难法？
答 掩蔽法有个尺度问题。消除法同样。你知道，消除掉的是非HDL-C的影响，这就存在怎么样来消除的问题，这个寻找过程是比较难的。得反复实验，反复验证。不过，还好，出来了，很快就可以供应市场了。
问 我知道了，那既然这种方法好，好在哪里呢？
答 是有很多优点的，最大的优点是准确性高，特异性好。
问 为什么这样说呢？
答 同样还是方法学带来的巨大变革导致的。因为它通过具有选择性的缓冲液和活性剂的作用将非HDL-C消除掉，也就是没有非HDL-C的干扰。所以，单独检测HDL-C，当然准确可靠。
问 那消除法能给检验科带来什么样的便利呢？
答 任何一种变革都是有它的好处的，对于这个方法也不例外。有这样三点：
1. 与选择性抑制法一样，直接测定，标本不用作特殊处理2. 液体双试剂，开瓶可用，另外备有各种机型包装问：是的，有这么多的便利条件，对于检验医师来讲，确实是个好消息。投入市场一定会给检验行业带来福音。
确实，我们在查阅大量临床化学文献和学习国外先进方法的基础上，开发出这样的新一代试剂，如果能给检验界带来便捷，是我们最大的欣慰。我以前也在医院工作，我能体会到方法学对临床检验工作者的意义。
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