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活化部分凝血活酶时间测定试剂盒(APTT)
一、适用范围:筛选内源性凝血因子的缺乏
监测肝素治疗及发现狼疮抗凝物质
二、原理:在37℃下,以活化剂激活因子Ⅻ和Ⅺ,以脑磷脂代替血小板提供凝血的催化表面,在钙离子参与下,观察贫血小板血浆凝固所需时间,即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)。如果内源性途径有缺陷,凝固时间即延长,并与单因子缺乏的程度成正比。
三、操作步骤:
A.样品及试剂的准备
1、 制备待测血浆样品:静脉采血,109mmol/L枸橼酸钠与全血按1:9比例混合均匀。以2500×g离心15分钟,用塑料移液管取出血浆,血浆样品必须在4小时内进行测试。
2、 试剂:1)APTT试剂用前须从冰箱中取出摇匀并平衡至室温。2)CaCl2试剂使用前必须放入37℃预温区,预温时间必须大于20分钟。
3、 需配制正常参考血浆(或正常质控血浆、异常质控血浆),请按各自的相关说明书配制。
B.测定
LG-PABER型凝血因子分析仪,操作步骤如下表
将待测血浆样品(或正常参考血浆、正常质控血浆、异常质控血浆)及测试珠加入测试杯中 |
50μl |
将APTT试剂加入上述样品测试杯中 |
50μl |
以上混合物摇匀后在37℃预温区中,准确预温180秒 |
加入37℃ CaCl2溶液于上述样品测试杯中 |
50μl |
立即启动仪器进行自动测试并记录结果 |
C.其它自动化仪器测定
参照相应的仪器操作手册。
四、注意事项:
1.APTT、CaCl2溶液严禁冰冻。
2.不同批号的试剂盒各组分不能混合使用。
3.在测定过程中,所有试管、移液管、注射器必须是塑料的。
4.待测血浆不能采用肝素、EDTA抗凝,应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。
5.为防止在测定过程中V、Ⅷ因子的损失,预温时间要准确为180秒,预温温度应保持在36.5℃-37.5℃。
6. 如果血球压积<20%或>55%,需按下列公式调整血样与抗凝剂的比例:抗凝剂用量=0.00185×血量(ml)×(100-病人红细胞压积)。
7. CaCl2溶液在37℃预温区,极易蒸发导致其浓度变化而使测试不准,故在预温及使用后应及时加盖防止蒸发。
8.当CaCl2溶液变混浊时提示该试剂已经变质。
9.溶血标本不得使用,必须重新采样。
10.试剂用后应及时置于2℃-6℃保存,以延长试剂的寿命。
11.每个实验室必须有一套质量控制程序,这包括采用正常和异常对照来评估仪器、试剂及技术操作,以确定每日血浆的平均值及标准差。如果对照血浆所得数据不在参照范围内,提示试剂可能变质,那么病
人的测定结果无效。
五、临床意义:延长::见于先天性凝血因子异常,如甲、乙型血友病,接触因子(因子Ⅻ、Ⅺ)缺乏,血管性血友病等;后天性凝血因子缺乏,如严重肝病,维生素K缺乏,播散性血管内凝血后期,纤溶亢进等;循环抗凝血素增加,如系统性红斑狼疮。
缩短:见于血栓性疾病,妊娠高血压综合症以及播散性血管内凝血早期
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