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维蛋白原含量测定试剂盒(FIB)
一、适用范围:定量测定人血浆中纤维蛋白源,常用于辅助诊断先天性和后天性纤维蛋白原缺乏(DIC、肝病等)以及监测溶拴治疗。
二、原理: 定量测定纤维蛋白原是普遍使用的经典方法,这种方法是在加入凝血酶后测定稀释血浆的凝集时间。在对数坐标图上,当存在高浓度的凝血酶和低浓度纤维蛋白原时,纤维蛋白原含量和凝血酶的凝固时间直接相对应。
三、操作步骤:
A.样品及试剂的准备
1. 制备待测血浆样品:静脉采血,109mmol/L枸橼酸钠与全血按1:9比例混合均匀。以2500´g离心15分钟,用塑料移液管取出血浆,血浆样品必须在4小时内进行测试。
2. FIB试剂: 每瓶凝血酶精确加入2.0ml 蒸馏水,轻轻混匀,放置10分钟平衡至室温后备用。
3. 正常参考血浆:每瓶正常参考血浆精确加入1.0ml蒸馏水,轻轻混匀,放置10分钟平衡至室温后备用。
B.纤维蛋白原参考曲线制定(以PABER-FIB定标为例)
1. 进入FIB定标界面,用咪唑缓冲液制备不同稀释度的正常参考血浆,例如正常参考血浆值为2.86g/L,输入FIB浓度值,如下表所示:
|
1:5 |
1:10 |
1:20 |
1:30 |
咪唑缓冲液(ul) |
200 |
450 |
950 |
1450 |
校正血浆(ul) |
50 |
50 |
50 |
50 |
FIB浓度(g/L) |
2.86×2 |
2.86 |
2.86×1/2 |
2.86×1/3 |
2. 定标测定
将上述四种稀释样品血浆及测试珠,加入测试杯中 |
100μl |
37℃预温区预温180秒 |
将FIB试剂(室温)加入测试杯中 |
50μl |
立即启动仪器进行自动测试,自动存储曲线及结果 |
C.测病人血样
将1:10稀释病人样品血浆及测试珠,加入测试杯中 |
100μl |
37℃预温区预温180秒 |
将FIB试剂(室温)加入测试杯中 |
50μl |
立即启动仪器进行自动测试并换算FIB含量 |
四、注意事项:
1. 试剂及缓冲液严禁冰冻。
2. 不同批号的试剂盒各组分不能混合使用。
3. 在测定过程中,所有试管、移液管等必须是塑料制品。
4. 如果血球压积<20%或>55%,需按下列公式调整血样与抗凝剂的比例:抗凝剂用量=0.00185×血量(ml)×(100-病人红细胞压积)。
5. 待测血浆不能采用EDTA和肝素抗凝,应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。
6. 如果测试时间不在标准曲线范围内,为减少误差,建议重新稀释血浆;测试时间若长于1:20稀释点,可作1:5稀释后测定,结果乘以0.5;测试时间若短于1:5稀释点,可作1:20稀释后测定,结果乘以2。
7. 每个实验室必须建立自己的质控程序,包括正常和异常质控血浆。如果这些质控的测量值不在它们的参考范围内,病人血浆的值将是无效的,不能出化验结果。
8. 试剂用后应及时置于2℃-6℃中冷藏,以延长其使用期。
五、临床意义:降低:见于先天性纤维蛋白原缺乏症、严重肝病、肝硬变、播散性血管内凝血、原发性纤维蛋白溶解症。
增高:见于肺结核、风湿热、恶性肿瘤、肾炎、脂肪肝等。此外,月经期,妊娠亦可增高。 |