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定量检验病人结果可报告范围评价实验

一．病人结果可报告范围(以下简称可报告范围)是检验方法的重要分析性能

病人标本未经任何预处理，由检验方法得到可靠结果范围为病人结果可报告范围。也即在此范围内不同病人标本报告结果值间的比值反映各标本内含有的分析物确实有这样的比例关系。在以手工方法为主的实验阶段时，实验室必须配制系列浓度的标准液，最后以实验方法呈现的显色或荧光强度、或浊度大小在比色计等仪器上进行检测，得到标准浓度和仪器响应的吸光度等关系，绘制标准曲线。由标准曲线表现确定检验时处理结果的做法。大多检验方法习惯以单一标准来校准结果，原则上应在标准曲线呈通过原点的直线才可作这样的处理。呈不通过原点的直线关系时，至少应使用两点定标；呈抛物曲线状时，应使用多点定标，在绘制的标准曲线上查阅结果。为了评价反应响应结果是否具线性表现，有多种意见和建议。

近年来，具计算机的自动分析仪已经普及。仪器可对反应响应呈不同表现的结果作适当的处理，直接以最终计量单位方式报告检验结果，符合临床要求。在此情况下，评价病人结果可报告范围时，不必再去评价响应结果的真实曲线状态，只要将样品作不同程度稀释或配制后，将预期值和实际检测值作比较，绘制在座标纸上应呈一条通过原点、斜率为1的直线。直线所达的限值即为该方法的病人结果可报告范围。

二．评价实验要求

1．进行可报告范围实验的样品必须和真实标本尽可能相似，也即要和真实标本具相同的基体状态。

2． 最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，浓度范围遍布整个预期可报告范围。最

高浓度的样品应达到可报告范围的上限。各实验样品内含分析物浓度呈等比例关系，不要呈倍比关系。

3． 若能收集到含低浓度分析物的病人样品(如血清)，将外观澄清的混合样品离心或过

滤后，一分为二。在一份混合样品中加入高浓度分析物贮存液，加入体积不得超过混合样品体积的1/10，但又可使样品中分析物浓度达到高限，充分混匀后为高值(H)样品。在另一份混合样品中加入配制分析物贮存液的溶剂，加入量等于前一份样品中加入的贮存液体积，充分混匀后为低值(L)样品。将H和L样品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H关系各自配制混合，形成系列评价样品。

4． 难以收集到低限样品，可收集高值样品，用生理盐水作系列不同程度稀释，形成系

列评价样品。如进行载脂蛋白A1或B测定的可报告范围评价时，国际上将高值血清用生理盐水稀释成内含载脂蛋白量为原血清中量的30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%。

5． 评价实验时要综合注意检测系统或方法的批间重现性。如：有建议一天内做2次测

定。第一次从低浓度到高浓度，每个实验样品做3次重复测定；第二次从高浓度到低浓度，每个实验样品做3次重复测定。美国临床实验室标准委员会（NCCLS）的文件规定：每个实验样品作4次重复测定等。综合所有结果作数学处理。

三．判断可报告范围的统计处理

1．检测系统或测定方法经校准后，对可报告范围实验的低、高限值样品作多次测定，以均值表示该两个样品测定结果。依照其它可报告范围实验样品配制稀释关系，可以计算出各实验样品内含分析物的浓度，为这些样品的预期值。将这些样品再经检测系统或测定方法检测，得到各检测值。按上实验要求，每个样品作6次重复测定，得6个实测值，它们和预期值形成6对预期值、实测值。

2． 座标纸上，以x表示各样品的预期值，以y表示各样品的实测值，将所有实验结果

点在图上。例如有6个系列样品，每个样品共做6次测定，共有36对预期值、实测值结果，都点在图上。

3． 若所有实验点在坐标纸呈明显直线趋势，用直线回归统计对数据作处理，得直线回

归 。理想状态下，预期值和实测值间呈通过原点、斜率为1的回归线，即斜率b为1，截距a为0。实际统计结果b不会正好等于1，a不会为0。若b很接近1(例如b 在1.00±0.03范围内)，a近于0，则可直接判断该测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。

4． 若b不接近1，a较大； 从经验上，若b<0.97，或b>1.03，已有可能b和1之间有

统计上显著性差异。为作出正确判断，可对所有实验结果作一分析：是高浓度处，还是低浓度处的实测值和预期值间有较大偏倚。试着舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后，回归式有明显改善，b近于1，a趋于0。此时，缩小的分析范围是真实的可报告范围。

5． 在实际应用中，究竟以怎样的斜率和截距来判断系统的可报告范围，应综合其他分

析性能和临床应用要求予以确定。

附录二 方法学比较的较简单方案

一．方法学比较的准备

1．标本的准备

实验室初次进行核实实验评价时，使用患者标本进行方法学比较特别重要。患者标本的方法学比较是确定各方法间关系的基础。这将确保实验室不论用什么方法检测患者标本都能得到相同的结果。

选择20份患者的新鲜标本，它们内含的分析物浓度分布于实验方法的可报告范围。不使用分析物浓度超出可报告范围的样品。标本类型必须适用于比较方法和核实评估的方法二者。要剔除内含干扰物（参见厂商说明）会影响两个方法的的标本。尽可能在收集标本的当天即进行检测，减少条件变异的影响。按照厂商的说明收集和处理患者标本，用于检测系统。若不正常标本不易收集，应注意保存，使实验有足够的标本量。储存标本应按照厂商说明和分析物稳定二者一致的原则，冷藏保存。并应避免冻融过程引入可能的人为问题。冰冻的冷藏标本应在冻融后、使用前充分混匀和认真检查有无不溶物。有不溶物应离心去除，使用上清液。还应注意使实验方法和比较方法同时在1～2小时内开始检测。标本的检测结果应完整地分布于整个可报告范围。若范围局限，则实验结论只说明实验所及的浓度范围。在此情况下，对准确度的确认可以分段实施。

2．作为溯源目标的检测系统的准备

在本实验中，做好溯源目标的检测系统准备很重要。一定要保证溯源目标的检测系统对患者标本检验结果的可靠性。以罗氏系统为例。实验室应购买足够的试剂盒、校准品和罗氏的控制品（包括考虑重做或其它问题出现时，需要实验的用量）。每个产品要求是一个批号的。在实验室进行自建检测系统的可报告范围实验时，也可以用相同的系列标本，对罗氏系统进行可报告范围的实验。既可了解罗氏产品的可报告范围的性能，也是对实验室进行系列实验的操作水平的估计。在任何时候，使用罗氏系统实验时，一定按照罗氏公司的要求，进行校准和校准确认；最好同时检测罗氏的专用控制品，确认控制值在控，才可以认可检测的标本有效。

3．自建检测系统的准备

完全按照自建检测系统的试剂盒说明，对自建系统进行校准或设定因子。注意：从实验开始，一旦设定后，在正式使用患者标本结果调整整个自建系统前，一定不对自建系统的因子作任何修改。和溯源目标的检测系统一样，实验室应购买足够的试剂盒、标准品或校准品、和控制品（包括考虑重做或其它问题出现时，需要实验的用量）。每个产品要求是一个批号的。每次实验一定进行控制品的检测，确认控制值在控，才可以认可检测的标本有效。

二．方法学比较实验安排

两个方法对标本检测应在同1天的4小时内完成。如果实验安排3～5天，每天进行5～7份标本的检测，这样得到的结论是最可靠的。可以将准确度实验和精密度实验结合一起做。在数天内进行实验可以使各种天间变异出现于任一方法中。每次完成实验时必须及时检查结果，若出现某标本结果的两方法间差异明显超过其它标本，应对该标本重新做双份检测。若重做的双份结果差异仍然很大，说明方法间的特异性不一，确实在方法间有明显分析差异。厂商应提供关于方法特异性的其它资料，予以说明；并保留数据备以后分析。若重做结果不证实以前的差异，使用第一对重复值结果作数据分析。

三．必须进行质量控制

每个方法都应有相应的质量控制程序予以控制。出现失控应予纠正，并须重做。

四．实验数据的处理

1．以溯源目标检测系统的实验结果为X，自建检测系统的实验结果为Y。将20对结果绘制于坐标纸上。所有标本方法学间比较结果应呈良好的直线线性关系，才能说明方法学比较实验有效。

2． 使用直线回归处理，得 ；若相关系数大于0.975，说明回归式可以较好

地反映方法间的真实关系。在实验涉及的分析物浓度范围内的任何处，可以估计方法间的偏倚。

3．方法学比较截距很大、斜率偏离1较大，如果在可报告范围实验中，也出现截距明显、斜率不太理想的情况时，可以说明自建系统的分析性能存在问题。应首先解决自建系统的问题。