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抽提全血中白细胞的步骤
1取静脉全血2~3ml，1500转，离心10分钟，取出血浆备其他所用。
2剩余血细胞中加入溶血试剂（配置方法见下），溶血试剂的量约是剩余血细胞的2~3倍。
3使用一次性塑料吸管混匀，放于室温下约20到30分钟（时间据具体情况而定），直到试管透亮为止（因红细胞被溶解掉，所以试管透亮），若是试管30分钟后仍不透亮，则增加溶血试剂的量。
4待试管透亮后，1500转，离心5分钟，此时可见试管底部有白细胞沉淀。
5直接倒掉试管中的上清液（当然是红色的），保留白细胞沉淀（注意倒掉时，不要甩试管，否则白细胞流失）。
6再次使用一次性塑料吸管取溶血试剂约1ml，放入白细胞沉淀中，充分混匀后，把白细胞沉淀转入1.5ml的eppendorf管（离心管）中。
7离心12000转，30秒，可见管底有白细胞沉淀，使用负压吸引器抽掉上清，把剩余白细胞沉淀放入-70度冰箱，备用。（可存放5~6个月） 溶血试剂配置：三蒸水500ml中加入 NH4CL 3.5g,， NH4HCO3 35mg
模板DNA提取
①经典法，取全血100μl，蛋白酶K消化，按标准酚、氯仿、异戊醇法提取DNA；②碘化钠法，参照Loparev等法加以改良，取全血100μl加无菌双蒸水100μl混匀，加6mol/l NaⅠ200μl涡旋震荡30秒，加等体积氯仿/异戊醇（24：1），涡旋震荡30秒，离心后取上清加0.6体积异丙醇混匀，室温（或4℃）静置15min，离心后沉淀以37%异丙醇洗1次，晾干后溶于TE中。以上两法提取DNA经紫外分光光度计定量后，置-20℃保存备用；③微量血斑水煮法，取50μl全血点至无菌滤纸上，自然干燥后用甲醇固定，室温贮存。临用时，剪成一直径5mm的圆形血斑纸块，将其混至100μl无菌双蒸水中，100℃煮沸30min以裂解细胞。取混合物15μl作膜板用。
[此贴子已经被作者于2006-5-6 10:50:20编辑过]
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