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血液分析仪与临床应用
血液分析仪，又称自液自动分析仪（automated hematology analyzer, AHA）、血细胞自动计数仪(automated blood cell counter, ABCC)。它是现代临床血液一般检验的常用检测仪器，可进行全血细胞的计数及其相关项目的检测。1953年，第一台AHA由Coulter发明问世；60年代，AHA已用于检测红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞平均值、红细胞比容和白细胞计数等项目；70年代，增加了血小板计数的测定；70年代末和80年代初，开发了白细胞的分类计数及红细胞分布宽度、血小板平均体积等新项目；90年代以来，AHA融合了细胞化学染色,激光检测技术,网织红细胞计数等检测项目于一体，基本满足了血液一般检验的需要，成为医学检验领域的重要仪器之一。
AHA可分为两大类：全自动的仪器，可直接使用抗凝血；半自动的仪器须事先稀释血标本。现代AHA有不同的分析方法和不同型号的差异，它们具有以下全部或部分功能特点：
1.多参数分析 大多数分析仪能测定近20个参数，较先进的仪器能检测近40项参数。
2.精确度高 各参数的检测变异系数(coefficient of variation, CV)一般均<%~10%。
3.操作简易速度快 一般每小时测定标本50-100份左右，有的可达135份。
4.标本用血量少 总需血量一般<250ul。
5.自动打印结果简明直观 仪器除能提供各种检测参数的数值外，还提供相应的直方图和(或)散点图。
6.具备质量控制功能 各种血液分析仪均有不同层次的质量控制功能，以保证各参数的测定的可靠性。
7.设置清洗功能 各检测标本的互染率<1%。
8.完善的报警功能 仪器对异常的检测结果能显示相应的报警信号，以提醒检测人员重新分析。
9.有效的筛检正常人群的功能 这是现代AHA最大的长处，同时，还能提示异常人群疾病的诊断线索。

[理论基础]
现代AHA主要应用了两大检测原理。
(一)电阻抗检测原理
1.电阻抗原理 即Coulter原理：血细胞是相对不良导体，当其悬浮于电解质溶液中通过检测微孔时，会改变微孔内外原来恒定的电阻，结果产生电脉冲。脉冲的大小代表了通过微孔血细胞的体积大小，脉冲的数量代表了通过微孔血细胞的数量.
2.直方图 根据电阻抗检测血细胞的原理，AHA在不同的检测通道，按细胞大小或类似颗粒的大小来区别血细胞，以横坐标表示细胞(颗粒)体积大小，纵坐标表示一定体积细胞的相对频率(％)。直方图可显示特定细胞群体中的细胞平均体积、细胞分布情况，是否存在明显的异常细胞群。
(1)红细胞直方图：反映红细胞大小或任何相当于红细胞颗粒大小的分布图，正常情况下图线呈光滑的正态曲线，其峰值即红细胞平均体积(MCV)，细胞大小分布在36-360fl，曲线右侧远端通常因红细胞重叠通过微孔孔时所致。
(2)白细胞直方图：正常情况下图线是有３个峰的光滑线，从左至右分别代表淋巴细胞、单个核细胞和粒细胞的大小或相当大小颗粒的分布图，其相应的分布范围在35-90fl、90-160fl、160-450fl。值得注意的是，传统的比较大的单核细胞在直方图中显示的曲线，其体积却比粒细胞小，这是由于溶血剂的作用，皱缩后的粒细胞所含的细胞核与胞质中的颗粒总体积最大。
(3)血小板直方图：正常情况下图线是一条光滑的、峰偏向左侧的偏态曲线，分布在2-30fl范围内，与血小板相当大小的其他颗粒也可出现在此范围。
每种类型的AHA均有按仪器特性设定的正常的直方图图形，它的作用是：(1)用以监测仪器分析结果的可靠性；(2)反映结果误差的潜在原因；(3)提供推理性的或假设性诊断的图形依据；(4)为检验人员、临床医生提供可供分析的直观信息。
(二)光学检测原理
1. 光学原理 单个血细胞随着流体动力聚集形成的鞘流液在通过激光(由氦、氖等惰性物质经激发产生的单色光)照射的检测区时，使光束发生折射、衍射、散射，散射光光检测器接受后产生脉冲，脉冲的大小与被照细胞的大小成正比，脉冲的数量代表了被照细胞的数量。
与电阻抗检测相比，光学检测具有以下两大优势：(1)利用流式细胞术，使细胞(或其他颗粒)一个个通过激光检测区，避免了细胞重叠通过的可能性；(2)利用高角前向散射光测得细胞内部颗粒等结构，低角前向散射光测得细胞大小的原理，结合细胞化学染色、荧光染色等技术，可得到各种细胞更准确、更有效、更具特征性的信息，以此可靠地鉴别不同的血细胞。
2.散点图 主要用以反映各种类型白细胞。该图横坐标表示散射光测得的特征性信息，纵坐标表示细胞体积的大小。在散点图上，根据各种正常细胞占据不同的图形范围，从而区别各种血细胞。
检验项目
（一）检测参数
现代AHA的检测参数主要包括血液细胞的三大系列：红细胞系列参数、白细胞系列参数和血小板系列参数。少数新研制的分析仪还兼能检测网织红细胞的有关
项目。
（二）血液自动分析仪白细胞分类功能
现代AHA对白细胞的分类功能，大体分为三分类和五分类两种。三分类AHA将白细胞粗略地分为小(淋巴细胞)、中(单个核细胞包括单核细胞)、大(粒细胞：包括中性、嗜碱、嗜酸粒细胞)三类，早期的AHA均属于这一类仪器。三分类仪的优点是以较低廉的成本筛检正常人群的白细胞，缺点是不能准确提供异常白细胞分类结果，特别对来自血液疾病和肿瘤性疾病的标本检测难以令人满意。五分类AHA由于综合应用了电阻抗、光学、细胞化学、荧光分析等技术，能准确地把白细胞分为嗜中性、嗜酸、嗜碱粒细胞及淋巴细胞和单核细胞。有的还能分出第六类细胞即未染色大细胞。
血液自动分析仪的检测项目
检测项目(英文全称和缩写) 意义及结果来源 单位 参考值
红细胞计数(RBC) 直接测量单位体积全血细胞数 1012/L 男:4.3~5.8
女:3.8~5.3
血红蛋白测定(HGB) 直接测量单位体积全血血红蛋白浓度 g/L 男:126~174
女:117~161
红细胞比容(HCT) 全血红细胞相对容积比,HCT=(RBC×MCV)/RBC L/L 男:0.37~0.51
女:0.35~0.47
红细胞平均体积(MCV) 全血每个红细胞平均体积,由RBC直方图导出 Fl 80~100
红细胞平均血红蛋白量(MCH) 全血每个红平均血红蛋白含量,MCH=(HGB×100)/RBC pg 27~35
红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC) 单位体积红细胞平均血红蛋白含量,MCHC=(HGB×100)/HCT g/L 310~370
红细胞分布宽度)RDW) 红细胞群大小分布范围,由RBC直方图导出,以CV或标准差(standard deviation,SD)表示 %
(CV)
fl(SD) 11.6~14.0
39.0~46.0
红细胞血红蛋白浓度均值(cellular hemoglobin concentration mean, CHCM) (为仪器质控设置) g/L
红细胞血红蛋白分布宽度 红细胞内血红蛋白浓度范围,用SD表示
白细胞计数 直接测量单位体积全血白细胞数 109/L 4.5~11.0
中性粒细胞百分率(neutrophil,NE) 中性粒细胞百分率,由直方图导出 % 45~62
中性粒细胞绝对值(neutrophil,NE#) 中性粒细胞绝对值,NE#=NE%×WBC 109/L 2~7
淋巴细胞百分率(lymphocyte,LY) 淋巴细胞百分率,由直方图导出 % 20~40
淋巴细胞绝对值(lymphocyte,LY#) 淋巴细胞绝对值,LY#=LY%×WBC 109/L 1.5~4.0
单核百分率(monocyte,MO) 单核细胞百分率,由直方图导出 % 4~10
单核细胞绝对值(monocyte,MO#) 单核细胞绝对值,MO#=MO%×WBC 109/L 0.2~0.8
嗜酸粒细胞百分率(eosinophil,EO) 嗜酸粒细胞百分率 % 1~3
嗜酸粒细胞绝对值(eosinophil,EO#) 嗜酸粒细胞绝对值,EO#=EO%×WBC 109/L 0~0.45
嗜碱粒细胞百分率(basophil,BA) 嗜碱粒细胞百分率 % 0~1
嗜碱粒细胞绝对值(basophil,BA#) 嗜碱粒细胞绝对值,BA#=BA%×WBC 109/L 0~0.2
血小板计数（PLT） 直接测量全血血小板数目 109/L 100~300
血小板平均体积（MPV） 全血血小板本积,由PLT直方图导出 Fl 6.5~12
血小板分布宽度(platelet distribution width,PDW) 血小板群大小分布范围,由PLT直方图导出 %
(CV) 16.3~19.3
血小板比容(plateletcrit,PCT) 血小板相比容积,PCT=(PLT×MPV)/10 L/L 0.145~0.209
大血小板比率(platelet large cell ratio,PLCR) 体积≥12fl的血小板比率 % 13~43

血液自动分析仪其他检测项目
项目 英文全称和缩写
网织红细胞百分率 Reticulocyte, RET
网织红细胞绝对值 Reticulocyte, RET#
网织红细胞平均体积 Mean reticulocyte volume, MRV或MCVR
网织红细胞成熟指数 Reticulocyte maturation index, RMI
网织红细胞分布宽度 Reticulocyte distribution width, RDWR
网织红细胞血红蛋白浓度 Reticulocyte hemoglobin concentration, HCR
网织红细胞血红蛋白分布宽度 Reticulocyte hemoglobin distribution width, HDWR
网织红细胞分 低荧光率low fluorescent ratio, LFR; 中荧光率middle fluorescent ration, MFR;高荧光率high fluorescent ratio, HFR
平均过氧化物酶活性指数 Mean peroxidase index, MPXI
分叶核指数 Lobularity index, LI

（三）报警信号和干扰血液分析的因素
1. 报警信号 AHA具有对超出仪器设定或人工设定的参数阈值的结果作出报警信号的功能，以提醒对异常检测结果的复查。报警信号的复查标准，应由各实验室自行确定。
研究表明，实验室以及标本湿度越低，仪器假报警率越高，分析原因可能是：(1)湿度低时，溶血剂不能有效地皱缩白细胞，使分类出现异常；(2)部分标本，可因冷球蛋白、冷纤维蛋白、红细胞冷凝集而影响白细胞计数和分类。对于仪器报警，复核血片是一项不可忽略的工作。
2. 干扰因素 AHA所测的细胞大小及数目实际上是以电压脉冲的大小和数目来表示的因此，凡是影响脉冲及数目的因素都会对分析仪的检测产生影响。在全部影响因素中，除了仪器本身和稀释液方面可能的干扰之外，血液标本的有形成分或无形物质的异常可成为常见的原因。
由表可知，每种检测参数可受多种因素的干扰，而一种干扰因素又可影响多种参数的测量， 对分析仪的检测结果应全面考虑，只有排除掉仪器、试剂和标本的可能影响因素，AHA才能地为临床提供疾病诊断的依据。
为了有效地使用AHA，根据中华医学会临床血液学检验专题研究会纪要(1996年)，须注意以下几点：(1)必须使用EDTA –K2抗凝剂；(2)用浮动均值法作为仪器质量控制方法之一；(3)用AHA的配套试剂充分混匀稀释血液标本；(4)充分利用直方图或散点图来判断仪器工作状态和检测结果；(5)出现报警信号，必须用显微人工复查血片；(6)只有在检测参数和直方图正常又无报警的情况下，仪器的检测结果才能作为健康人群的筛检依据，否则应查找原因；(7)在细胞计数参数中，绝对值的临床意义较大；(8)应逐步建立中国的AHA各的正常参考值。无论检验人员还在临床医师，充分了解和认识影响AHA的各种因素和注意事项，对正确发挥仪器检测的功能，具有重要的实验意义。