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ABX Micros CRP血液分析仪CRP测定性能的初步评价
解放军总医院临床检验科 乐家新 王红霞 丛玉隆 兰亚婷（北京100853）
【摘 要】:目的 了解ABX MICROS CRP血液分析仪CRP测定的性能特点。方法 对该检测系统测定CRP的精密度、携带污染率、线性、稳定性和相关性等指标进行测试。结果 ABX MICROS CRP仪器测定CRP的批内、批间及日间精密度良好，携带污染率低，线性范围0.1mg ~7.0mg/ dl，检测低限可达0.1mg/dl。该仪器测试的CRP结果和BN II仪器测试的结果（0~21.9 mg/dl范围）高度相关，相关系数 r2=0.9659(血清)、r2 =0.9594(全血)。室温或4ºC冷藏条件下保存的抗凝血样品48小时内，CRP结果稳定性较好。通过测试高血红蛋白症、高血脂症和个别高免疫球蛋白血症的样品，发现对Micros CRP测试方法均不存在干扰。结论：ABX MICROS CRP仪器测定的CRP结果准确、可靠，可在临床使用。
【关键词】: ABX MICROS CRP；精密度；稳定性；携带污染率；线性
ABX diagnostics 公司新推出的Micros CRP仪器是一台能够进行全血细胞计数、白细胞三分类和全血CRP测定为一体的血液分析仪，该仪器采用电阻抗法进行全血细胞计数和白细胞三分类测定，采用乳胶免疫比浊法测定血液中的CRP浓度。为了评价该仪器测定CRP的技术性能（全血细胞计数和白细胞分类的评价另文介绍），我们对其测定CRP的精密度、携带污染率、线性、稳定性和相关性等指标进行了初步测试，结果报告如下。
1、材料和方法
1.1 Micros CRP血液分析仪，ABX diagnostics 公司生产，实验前用该公司提供的全血细胞和CRP校准物校准仪器。CRP的测定过程是：先用溶血液（CRP-R1）溶解红细胞，加入缓冲液（CRP-R2）屏蔽掉除了CRP以外人抗原，再加入抗-人C反应蛋白单克隆抗体胶乳颗粒（CRP-R3）发生特异性的抗原抗体反应，并产生胶乳颗粒粘合物。在850nm光源检测，应用速率法，测定吸光度的变化速度，并通过标准血清产生的多项校准曲线得出溶血样品中的CRP浓度值。另外，使用同步检测出的血细胞压积值转换为样品血浆中的CRP浓度值，结果显示并打印。
1.2 配套试剂及质控物：全血细胞分析试剂和CRP测定试剂；全血和CRP质控物。
1.3 标本：不抗凝血和EDTA-2K抗凝静脉血。
1.4 统计学分析：实验数据用Microsoft Excel进行统计学处理。
1.5 质量控制：Micros CRP血液分析仪安装、调试完毕，按照仪器操作程序，分别用配套的全血和CRP校准物将全血细胞和CRP参数校准。以后每次实验前，均先测试全血和CRP质控物，结果均在质控物靶值允许的范围内。
2、评价指标及与结果：
2.1 稳定性：取4个抗凝全血（健康人和病人各2个），每个平均分成两份，一份放置室温（22~25℃）下，另一份放置冰箱中（4~8℃）保存。依次在采血后1小时、24h、48h和72h在ABX Micros CRP仪器上测定CRP，每份样品连续测定2次取均值统计，结果显示：48h内，CRP偏差小于8%（见图1）。
2.2 精密度：
2.2.1 批内精密度：分别取抗凝全血和CRP低值和高值质控物在仪器上连续测定11次，统计结果见表1。
表1、CRP批内精密度
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抗凝全血 |
CRP质控物 |
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低值 高值 |
低值 高值 |
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均值 |
0.945 |
5.868 |
0.452 |
5.34 |
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SD |
0.048 |
0.158 |
0.013 |
0.103 |
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CV% |
5.09 |
2.69 |
2.72 |
1.91 |
2.2.2批间精密度：随取机CRP值在（0.45~6.19）mg/dl 范围的EDTA-2K抗凝血20个，在ABX Micros CRP仪器上测定CRP，间隔2小时，再测定。统计结果，平均值为2.84±1.68 mg/dl的抗凝血的CV范围是0到12.32%（平均值4.70%±3.81%）。
2.2.3日间精密度：取CRP低值（0.45mg/ dl）和高值（5.31mg/ dl）质控物在ABX Micros CRP仪器上每日测定1次，连续测14日，统计结果见表2。
表2、CRP日间精密度
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低值 |
高值 |
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均值 |
0.449 |
5.27 |
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SD |
0.019 |
0.125 |
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CV% |
4.23 |
2.37 |
2.3 线性范围
方法：取BNⅡ仪器测定的血清CRP结果（10.3mg/dl血清）为100%，将该血清和EDTA-2K抗凝全血分别按80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%和5%稀释后上机测定CRP，结果见图2。该图显示，血清CRP在0.5mg/dl~7.0mg/ dl范围，测定值与理论值一致，7.0mg/ dl到10.3mg/ dl之间的未稀释样品测定结果的出现线性偏差。全血CRP在0.5mg/dl~7.0mg/dl范围，测定值略低于理论值，7.0mg/ dl到10.3mg/ dl之间的未稀释样品测定结果出现较明显线性偏差。另外，将已知浓度（5.31mg/ dl）的CRP质控品4.7µL~47µL依次加入到能被0.5ml整除的正常血样（CRP含量为0）中，增量为0.05mg，使待测血样中CRP含量为0.05mg/dl~0.5mg/dl， 各血样重复测定2次取均值。结果：CRP在0.1mg/dl~0.5mg/dl也显示了良好的线性（y=0.9505x+0.0151，r2=0.9972），其检测低限为0.1mg/dl。
理论值(mg/dl) 理论值(mg/dl)
A.血清 B.抗凝全血
图2、 CRP线性范围 |
Y=1.0877x -0.2473
r2 =0.9855
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Y=1.1819x -0.1323
r2 =0.9886
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2.5 携带污染率：选择抗凝全血和质控物的CRP低值与高值，利用高低值质控进行交叉测定，先测定高值3次（h1、h2、h3），再测定3次低值(l1、l2、l3)。按公式：cv% =[(l1-l3)/ (h3-l3)]×100 计算，结果：CRP质控物携带污染率为0.91%、抗凝全血CRP携带污染率为1.19%。
2.6可比性：
取105个临床患者样品（血清）在BNⅡ特种蛋白分析仪测定CRP浓度，再将该血清和相应的EDTA-2K抗凝全血分别在ABX Micros CRP仪器测定CRP浓度，所有的样品均储存在室温条件下并且在采血后12小时内测定。然后将ABX Micros CRP仪器的结果与BNⅡ仪器得结果进行相关分析，结果见图3。可见抗凝全血的CRP测定结果较血清的结果低大约9%，这一点在仪器校准时完全可以纠正。
图3、MICROS CRP仪器与BN II仪器CRP测定结果的比较
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Y=0.9967x -0.0398
r2 =0.9659
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Y=0.9088x 0.0138
r2 =0.9594 |
2.6.干扰因素的观察
2.6.1 溶血（高血红蛋白血症）样品：随取机CRP值在（0 ~4.8）mg/dl 范围的EDTA-2K抗凝血20个，先在ABX Micros CRP仪器上测定CRP。将标本震荡溶血后（血浆血红蛋白：8~69g/L），再上机测定CRP，结果显示，CRP测定不受高血红蛋白血症影响。
2.6.2高血脂症样品：随取机CRP值在（0 ~5.3）mg/dl 范围的EDTA-2K抗凝血20个，先在ABX Micros CRP仪器上测定CRP。然后将每个标本按一定比例加入医用脂肪乳（浓度1%~12%），再上机测定CRP，结果显示，CRP测定不受高血脂影响。
2.6.3 高免疫球蛋白样品：仅收集到一例类风湿性关节炎样品，其免疫球蛋白增高（2.6g/dl），EDTA-2K抗凝血在ABX Micros CRP仪器上测定CRP，结果为0.25mg/dl，在CRP正常值范围之内。能否提示高免疫球蛋白血症的存在对ABX Micros CRP仪器的CRP结果没有直接影响，有待进一步观察。
3、讨论
CRP 是由5 个完全相同的单体组成，各个单体呈球体，相互间以非共价形式对称呈一平面的环状五球体,相对分子质量为(11. 5～14) ×103，主要在IL26 介导下由肝脏产生。CRP 在正常人血清中含量甚微(0. 0068～0.82mg/dl )，但在感染、炎性疾病、组织损伤、恶性肿瘤、手术创伤及组织坏死等情况下，几小时内迅速升高，并继续急剧上升，在24～72h 可达高峰，超过正常水平的10 倍到百倍，甚至千倍。病变消退后，CRP 可迅速下降至正常。CRP 上升速度、幅度及持续时间与病情及组织损伤的严重程度密切相关，且不受放疗、化疗、皮质激素等治疗手段的影响。因此，与传统检查项目和其他急性时相蛋白相比,CRP 更为灵敏可靠。
本次实验所得到的数据显示：ABX Micros CRP仪器测定CRP的批内、批间和日间精密度都在临床可接受范围内；对于未稀释的抗凝血，这台CRP仪器的线性可达到CRP值0.1mg ~7.0mg/ dl，7.0到10.0mg/ dl之间出现一定的线性偏差。因此，对于CRP浓度大于7.0mg/ dl的样品在Micros CRP仪器测定时，样品应按该仪器操作手册要求稀释后，再进行CRP测试以保证获得精确的结果。按照这个原则，ABX Micros CRP仪器测试的结果和我科所用的BN II仪器测试的结果（0~21.9 mg/dl范围）高度相关，相关系数 r2=0.9659(血清)、r2 =0.9594(全血)。检测低限可达0.1mg/dl。携带污染率低，室温或4ºC冷藏条件下保存的抗凝血样品48小时内，CRP结果稳定性较好。通过测试高血红蛋白症、高血脂症和个别高免疫球蛋白血症的样品，发现对Micros CRP测试方法均不存在干扰。
Micros CRP血液分析仪作为一台小型全血CRP测定仪，操作简单、样品需求量少（仅需18微升全血），无需对样品(静脉/末梢血)作预处理。两种测试模式(CBC或CBC+CRP)可随意切换，5分钟内可报告CBC（全血细胞计数）和CRP结果，特别是ＷBC和CRP同时报告是其特点，这种仪器适合在门诊、急诊或床旁诊断使用。由于这类仪器刚进入临床，如何做好其质量控制，以保证获得稳定、准确的结果，值得今后进一步探讨。
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