[原创] 贝克曼原厂试剂反应曲线1

郑振寰发表于 2014-11-8 20:55

根据贝克曼原厂资料整理。
分为五个部分，DXC的CC部分，DXC的MC杯模块部分，DXC的ISE部分，AU系列，和AU系列漫盘指示曲线。
DXC-CC
DXC机型是双样品针和双试剂针，MC和ISE单独有自己的MC样品针，CC有单独的CC样品针。CC的试剂针分为A、B针，试剂筒为三腔结构。可以进行三次或三次以内的试剂加注。
第一加注在-180秒之前，样品在0秒加注，可以加注三腔试剂中全部或其中一、两个。样本加入后最长可以反应738秒。
第二加注在-180秒，或第9-738秒之间，可以加注三腔试剂中的一个。
第三加注在-172秒，或第9-738秒之间，可以加注三腔试剂中的一个。
DXC的试剂筒并非常见的双试剂R1R2的概念，常见的R1是消除干扰物，R2是启动反应物。而DXC的三腔试剂可能都是启动反应物，或者其中的两种是消除干扰物，一种启动反应物。消除干扰物提前在第一或第一、二加注是注入反应杯混合，加入样本后等待第三加注启动反应物，或者直接反应，也就是常规理解的单试剂。只不过DXC的单试剂是多腔试剂提前混合。
在DXC的反应方法中，只有End和Rate两种方法，每种方法又有五个选择，End1-5，End1-5，分别是选择是否扣除空白和扣除那一段儿的空白。
观看后面的反应曲线图之前，有必要复习一下这张图：

DXC参数有关基础，请查看https://www.yeec.com/forum.php?mod=viewthread&tid=42339

常规Alkaline Phosphatase ALP 碱性磷酸酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)（(increasing表示上升反应, non-triggered表示无触发，加入样品后直接启动反应，也就是常规的单试剂用法）
Primary wavelength: 410 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL （ORDAC表示自动重测）

曲线上用到了两种试剂，A腔和C腔，A腔228ul和C腔22ul提前混合后加入反应杯，大概在-280秒左右的时间加入，样品5ul在0秒加入，然后立即开始反应。空白读点，也就是试剂空白黄色线条区域在0秒之前，初始读点在0秒之后的2-5点，也就是16秒-40秒之间，绿色线条区域。速率主读点窗口在100秒之后，300秒之前，红色线条区域。

很明显可以看到A和C混合加入后有个很长时间的反应过程，说明这两种试剂混合后还会有反应，等待稳定后再加入样品。这就是贝克曼试剂的不同常规双试剂之处。

DXC系列无法看到校准曲线，所以只能打印出来校准报告。

在终点法和一级速率法中，可以使用单点或双点校准，所有的校准都重复四次，去掉最大最小值，取中间的两个值进行斜率和截距的计算。这个很好理解，y=AX+B，二元一次方程，需要两个已知值解方程。
在其它方法中，所有校准只重复两次，并不抛弃任何一点，全部用于斜率和截距的计算。而在六点校准中，只做一次。
这个ALP的校准报告就是后者，采用两点校准，两个浓度值的校准品。Cuve表示校准时使用的反应杯号码，SETPts表示校准品靶值，Blank表示空白值，也就四空白读点区的吸光度值；Reaction是反应读点区的吸光度值，Recovery是计算后的浓度。
很明显的看到两个点的校准品各做了2次，前后两次的浓度和吸光度值进行重复性验证，超过范围就会报错，也就是常见的Back –to-back 背靠背错误。转换出来的浓度值不能超过最大最小的限制，否则会报Rangs范围错误，如果选择的校准曲线公式与测定出来的数值不拟合，会报计算错误。
这个ALP的图是两点线性校准，重复两次的结果都在范围内，所以计算出Cal Factor斜率和OFFSET截距。校准是成功的。

Alanine Aminotransferase ALT 丙氨酸氨基转移酶

Rate 1 (decreasing, non- triggered) （decreasing表示下降反应）
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

Alanine Aminotransferase ALT-IFCC丙氨酸氨基转移酶

Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL (IFCC 表示国际临床化学和实验室医学联盟推荐方法)

这就是一级速率法的两点校准报告，两点全部重复四次，每点去掉最大最小值，取中间两个值计算，选中的两个值有Recov值显示，去掉的这一项就是空白。

Aspartate Aminotransferase AST天门冬氨酸氨基转移酶

Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

A/C 242ul+B8ul+S23ul，这是一个三腔单试剂的组合。

Aspartate Aminotransferase AST-IFCC天门冬氨酸氨基转移酶

Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

Creatine Kinase CK肌酸激酶

Rate 1 (increasing, non- triggered)
mary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

Creatine Kinase CK-IFcc肌酸激酶

Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

Gamma-Glutamyl Transferase GGT谷氨酰转肽酶

Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 410 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

Lactate Dehydrogenase LD乳酸脱氢酶

Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

LD-P-IFcc

Rate1 (decreasing, non- triggered) Primary wavelength: 340 nm ORDAC Sample Volume:3 uL

这是两种不同方法的LD曲线，造成反应方向不同，而且提前混入的两种试剂的反应时间和幅度也不同。

Lipase LIPA 脂肪酶
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

这是常规双试剂的用法，B200ul提前加入，样品S 4ul在0秒加入，混合孵育200秒后加入C70ul，启动反应。
reagent triggered 表示用试剂触发反应，也就是样品加入后并不是反应的开始，需要再加一种试剂启动，这就是常说的双试剂R2加入后的启动反应。
这样空白读点区就应该是试剂和样品空白，也就是常见的R1+S的空白，所以在R2加入之前的区域，这里是200秒之前的黄色区域。初始反应区域是R2加入之后的1-5点之内绿色区域，红色区域才是反应读点。

Lipase- Random Access LIP
Rate 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

这个LIP有个特殊性，就是先用A腔的330ul清洗反应杯，提前加入，冲洗过后，再加入B和C的试剂混合孵育长达300秒后再加入样品。可以看出试剂加入后也是呈速率上升反应趋势，所以采用的是速率2法，反应速率减去空白速率，也就是红色区域减去黄色区域。

Cholesterol CHOL胆固醇
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

胆固醇也是个特例，虽然用终点法2，但反应并没有达到终点。

Direct HDL Cholesterol HDLD 高密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm

高密也是个特例，选择的是终点法2，也就是终点反应减去空白反应。由于DXC没有固定点法和两点法选择，所以只能用终点法来替代固定点或两点法。
A先加入，0秒加入样品，200秒之前加入B，初始读点在B加入之后，空白读点并不是在B加入之前，而是在B加入之后的200秒以后，主读点在反应最后的终点区。这就是常说的两点终点法都在R2之后。这也是无奈之举，首先DXC除了终点和速率法没有其它方法，其次是B加入后明显的下降弯钩，将空白取在弯钩底部比取在B之前，更能准确的反应出反应变化的程度。

Direct LDL Cholesterol LDLD 低密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm

典型的双试剂两点终点法

Total Triglyceride TG 甘油三酯
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm

Total Triglyceride Blanked TG-B 甘油三酯去甘油空白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 520 nm

Albumin ALB白蛋白
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 600 nm

Blood Urea Nitrogen BUN /UREA血尿素氮
Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Urine Sample Type:
On-board dilution 20 uL Sample + 180 uL DIL1 (3 uL diluted sample to reaction cuvette)

Creatinine CR-S 肌酐
Rate 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm

Lipase  LIPA 脂肪酶
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

这是常规双试剂的用法，B200ul提前加入，样品S 4ul在0秒加入，混合孵育200秒后加入C70ul，启动反应。
reagent triggered 表示用试剂触发反应，也就是样品加入后并不是反应的开始，需要再加一种试剂启动，这就是常说的双试剂R2加入后的启动反应。
这样空白读点区就应该是试剂和样品空白，也就是常见的R1+S的空白，所以在R2加入之前的区域，这里是200秒之前的黄色区域。初始反应区域是R2加入之后的1-5点之内绿色区域，红色区域才是反应读点。

Lipase- Random Access  LIP
Rate 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

这个LIP有个特殊性，就是先用A腔的330ul清洗反应杯，提前加入，冲洗过后，再加入B和C的试剂混合孵育长达300秒后再加入样品。可以看出试剂加入后也是呈速率上升反应趋势，所以采用的是速率2法，反应速率减去空白速率，也就是红色区域减去黄色区域。

Cholesterol  CHOL胆固醇
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

胆固醇也是个特例，虽然用终点法2，但反应并没有达到终点。

Direct HDL Cholesterol HDLD 高密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm

高密也是个特例，选择的是终点法2，也就是终点反应减去空白反应。由于DXC没有固定点法和两点法选择，所以只能用终点法来替代固定点或两点法。
A先加入，0秒加入样品，200秒之前加入B，初始读点在B加入之后，空白读点并不是在B加入之前，而是在B加入之后的200秒以后，主读点在反应最后的终点区。这就是常说的两点终点法都在R2之后。这也是无奈之举，首先DXC除了终点和速率法没有其它方法，其次是B加入后明显的下降弯钩，将空白取在弯钩底部比取在B之前，更能准确的反应出反应变化的程度。

Direct LDL Cholesterol  LDLD 低密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm

典型的双试剂两点终点法

Total Triglyceride  TG 甘油三酯
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm

Total Triglyceride Blanked  TG-B 甘油三酯去甘油空白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 520 nm

Albumin  ALB白蛋白
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 600 nm

Blood Urea Nitrogen BUN /UREA血尿素氮
Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Urine Sample Type:
On-board dilution 20 uL Sample + 180 uL DIL1 (3 uL diluted sample to reaction cuvette)

Creatinine  CR-S 肌酐
Rate 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm

Tobramycin  TOB 托霉素
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm



Valproic Acid  VPA丙戊酸
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 600 nm

Vancomycin  VANC 万古霉素
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

特定蛋白
Complement 3 (C3)补体C3
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Lot-specific Parameter Card

Complement 4 (C4) 补体C4
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340  nm
Lot-specific Parameter Card

Haptoglobin (HPT) 结合珠蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Lot-specific Parameter Card

Immunoglobulin A Ig-A免疫球蛋白Ａ
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 10 uL for reaction
On-board dilution (ORDAC Range): 3 uL Sample + 297 uL DIL1; 4 uL for reaction
(URDAC Range): 5 uL undiluted sample for reaction

Immunoglobulin G　Ig-G免疫球蛋白Ｇ
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 4 uL for reaction
On-board dilution (ORDAC Range): 3 uL Sample + 297 uL DIL1; 4 uL for reaction

Immunoglobulin M　Ig-M免疫球蛋白Ｍ
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 2 rxn. cuvettes used:
24 uL for reaction and 3 uL for Antigen Excess reaction
On-board dilution (ORDAC Range): 3 uL Sample + 297 uL DIL1; 1 rxn. cuvette used:
3 uL for reaction

Transferrin　TRFN转铁球蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 6 uL for reaction

Apolipoprotein A　APOA载脂蛋白A
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 6 uL for reaction

Apolipoprotein B APOB载脂蛋白B
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 20 uL for reaction

Anti-Streptolysin O ( ASO-)抗链球菌霉素O
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

C-Reactive Protein CRP C反应蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 4 uL

常规双试剂的CRP反应，但并非我们常用的样条校准，而是线性校准。

C-RP
Rate 1 (increasing)
Primary wavelength: 600 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL

Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 380 nm
ORDAC Sample Volume: 4 uL

特殊项目
Ammonia AMM阿摩尼亚
Endpoint 2 (decreasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm

Cholinesterase CHE 胆碱酯酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 410 nm

Creatine Kinase MB Isoenzyme CKMB 肌酸激酶同工酶
Rate 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 12 uL

Hemoglobin A1c (Hb &A1c) A1c2 (Hb2 &A1c2) A1c3 (Hb3 &A1c3)糖化血红蛋白
Hb
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 560 nm

A1c
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm

DXC-MC
MC模块分为杯模块和ISE模块。
杯模块有最多六个，GLU、BUN是电极法，TP、ALB、Phos、CRE是光学法。
在杯模块中，系统检测一个样品的流程是40秒，在样品加入之前读取试剂空白，也就是参比读点，是黄色区域。样品加入之后读取反应读点，也就是红色区域。
样品反应结束之后，排空反应液，然后加入去离子水冲洗或直接接入新的试剂准备下一次检测。
搅拌存在整个过程，除了排空完毕加入去离子水或试剂的几秒钟停止外。
杯模块的校准是重复四次，去掉最大最小值进行计算。终点法的项目不显示Rate值，速率法的项目显示；delta ABS只在终点法的项目中显示；Init Read是初始读点，也就是空白读点。Final Read是最终读点。SET Point是校准靶值；
SET Point unit是校准单位；Replicates Used表示保留下来哪两个重复值作为计算依据。
保留下来的重复值首先验证重复性，也就是背靠背。然后进行范围检查，超出设定的范围都会报告校准失败。

Albumin (ALBm)白蛋白
Endpoint (5 point average)

终点法反应，读点区有五个读点的值平均。校准选择的是1、3两个保留重复值。

Urea Nitrogen (BUNm)尿素氮
Rate (7 point moving medium)

速率法反应，7个点的值平均。

Creatinine (CREm)肌酐
Rate (5 point average)

速率反应，反应液排空后连续两次去离子水冲洗后才灌注试剂。读点开始前搅拌关闭，两次水洗时搅拌开启。
Glucose (GLUCm)葡萄糖

速率反应。

Phosphorus (PHOSm)磷
Rate (5 point moving average)

速率反应，反应读点前搅拌慢速运转，排空和水洗以及灌注试剂时高速运转。

Total Protein (TPm)总蛋白
Rate (least square linear regression)

速率法反应，

DXC-ISE
Sodium (NA)钠
40 mL sample volume

ISE单元除CO2外，K、Na、Cl、Ca都是在17.8-18.7秒间读取样品数据（ADC），每0.1秒读取一个ADC，共读取十个，去掉最后一个ADC值，前面九个平均值就是样品的ADC值。
在34.8-35.7秒之间读取10个参比通道ADC值，去掉最高最低后平均得出参比值。
根据样品值和参比值和校准曲线进行最终样品结果的计算。

Potassium (K)钾
40 mL sample volume

Calcium (CALC)钙
40 mL sample volume

Chloride (CL)氯
40 mL sample volume

Carbon Dioxide (CO2)二氧化碳
40 mL sample volume

CO2采用的是速率法。所以参比读点和样品读点都是很大的范围，这样才能读取速率。

ISE没有内标液，所以校准要采用三个不同浓度的校准液，这是第一浓度校准报告。每个浓度的校准重复四次，去掉最大最小值，选择两个使用计算（Replicates Used），Smpl Reference是样品参比值，与设定的参比ADC值的差值，超过设定范围，会报告范围错误。Sample是样品反应几个读点的平均值；Smpl Deviation是几个读点的最大最小值的差值，这个差值不能超过设定值，否则会认为噪音干扰，但CO2没有此项。Referece是参比读点的ADC均值。Ref Deviation是参比读点的最大最小值差值，超过限制也会报噪音干扰。选择留下来的结果进行重复性比对，超过范围会报告背靠背错误。

这是第二浓度校准品重复四次的报告，只有第二、三浓度校准报告才会有Span跨距，也就是浓度1和浓度2之间的样品参比ADC均值的差，或者浓度2与浓度3之间的样品参比ADC均值的差。

这是第三浓度校准的四次重复性报告。