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王厚照 马 莉 王 强 周友泉 (厦门第一七四医院 361003)
摘要 目的 在使用贝克曼ＣＸ５ＣＥ全自动生化分析 仪和贝克曼ＡＬＰ试剂测定ＡＬＰ时，经常遇到的仪器报告 “BL ABS HI (空白吸光度过高)”而不出结果的情况。由于 进口试剂价格昂贵，而实际上试剂还在有效期内，大批试剂 丢弃造成严重浪费。为避免浪费，研究其产生的原因，探讨 继续使用这些试剂的可能性及其对结果的影响，提出解决办 法。 方法 对试剂和仪器原理进行分析，进行精美度、准 确度、线性试验和对比试验。
结果 空白吸光度过高的原因 是Ｂ孔中的无色的磷酸对硝基苯酚分解产生黄色的对硝基苯 酚所致，提出在适当范围内可以用蒸馏水稀释Ｂ孔试剂，从 而避免因空白吸光度过高仪器不出结果的情况，并提出最佳 稀释比例。
结论 经最佳比例稀释后的试剂精密度、线性 良好，与符合要求的新试剂结果一致，可以应用于临床标本 检测。
关键词 自动分析 碱性磷酸酶 试剂 我们在使用贝克曼ＣＸ５ＣＥ全自动生化分析仪和贝克 曼ＡＬＰ试剂测定ＡＬＰ时，经常遇到仪器报告“BL ABS HI (空白吸光度过高)”而不出结果的情况。由于进口试剂 价格昂贵，而实际上试剂还在有效期内，大批试剂丢弃造成 严重浪费。为此，我们对试剂和仪器进行了分析，找到了原 因并对Ｂ孔试剂进行最佳比例稀释，使这些试剂能够正常使 用。经精美度、准确度和线性试验，证明经最佳比例稀释后 的试剂精密度、线性良好，与符合要求的新试剂结果一致， 完全可以应用于临床标本检测。
仪器与试剂
１、仪器：BECKMAN CX5CE 型全自动生化分析仪。
２、试剂：美国BECKMAN 公司ALP 试剂盒， 批号：M510029 。
方 法
１、观察试剂颜色：将ＣＸ５ＣＥ报告“空白吸光度过 高”的试剂从仪器试剂架上取下，观察Ａ、Ｂ两孔试剂的颜 色（Ｃ孔无试剂），并与符合要求的新试剂比较。
２、仪器能接受的Ｂ孔试剂颜色深度：向Ｂ孔试剂中加 入蒸馏水作不同比例稀释，蒸馏水加入量分别为0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5 、3.0 ml，再分别上机试验，以分析仪 刚好不提示空白吸光度过高的稀释度作为最佳稀释比例。取 最佳稀释比例的试剂，再用蒸馏水作２０倍稀释，然后在Ｂ Ｔ－２２４生化分析仪上，以蒸馏水为零点，波长405 nm， 光径１cm，测得吸光度Ａ值。
３、准确度试验：取符合要求的新试剂和已作最佳比例 稀释的试剂，平行测定30份临床标本（内含有高中低不同AL P 活性的标本）和BECKMAN 随机质控液。
４、高活性标本对比试验：将三份高活性的ALP 血清标 本，分别用正常试剂和经最佳比例稀释后的试剂上机测定， 每份标本各测三次。
５、精密度试验：批内变异取ALP 活性分别为730 IU/L 和80IU/L的标本各一份，用最佳比例稀释试剂同时测定20次 。批间变异取ALP 活性分别为510 IU/L和70IU/L的混合血清 分装冰冻保存，每天取出一支用最佳比例稀释试剂测定ALP 活性，连续10天。
结 果
１、ＣＸ５ＣＥ报告“空白吸光度过高”的试剂与符合 要求的新试剂比较，Ａ孔试剂无色透明，与新试剂一致，Ｂ 孔试剂的黄色明显深于新试剂。仪器报告空白吸光度过高就 是由于Ｂ孔的黄色过深所致。
２、最佳稀释比例在蒸馏水加入量为1.5 ～2.0 之间， Ｂ孔的原始试剂体积为６ml，则蒸馏水：试剂的稀释比例为 １：３～１：４。经最佳比例稀释的试剂再经20倍稀释后， 在ＢＴ－２２４分析仪上测得Ａ值为0.24～0.31之间，而未 经最佳比例稀释的空白吸光度过高的试剂，再经20倍稀释后 测得Ａ值在0.32～0.41之间。初步认为如果Ｂ孔的黄色深度 控制在本实验条件下Ａ值最高不超过0.31，则仪器接受并可 得出实验结果，如Ａ值超过0.30仪器就可能报告空白吸光度 过高，试剂无法使用。
３、准确度：30份临床标本用两种试剂测得结果一致， 经ｔ检验，P>0.2 。贝克曼随机质控液测定结果，两种试剂 都在允许误差范围之内。
４、高活性标本对比试验：正常试剂测得的结果为725 IU/L，最佳比例稀释试剂为731 IU/L，结果一致。
５、批内变异高低活性标本CV分别为1.68％和2.23％， 批间变异CV分别为2.76 ％和4.01 ％。
讨 论
BECKMAN ALP 试剂采用磷酸对硝基苯酚法。
反应原理是 ：无色的磷酸对硝基苯酚＋水在37℃pH10.3有镁离子存在的 条件下，经ALP 作用产生黄色的对硝基苯酚＋磷酸，根据对 硝基苯酚的产生速率可计算出ALP 的活性。Ａ孔中为含有缓 冲盐、二乙醇胺和氯化镁的无色混和液，Ｂ孔为磷酸对硝基 苯酚底物。磷酸对硝基苯酚性质不稳定，随着贮存时间的延 长颜色逐渐加深（产生黄色的对硝基苯酚），致使因空白吸 光度过高，分析仪不出结果。 BECKMAN 仪器为保证分析结果的可靠性，每次定标时先 检测空白吸光度是否在规定范围之内，如超过即报警。但由 于进口试剂在运输途中多次装卸，有时冷藏效果不好，Ｂ孔 颜色颜色加深增快，因而试剂有效时间未到，但与不能使用 。
根据以上原理，我们认为在实际工作中如果Ｂ液颜色不是 太深，可以考虑将Ｂ孔用蒸馏水作适当稀释，便可做出完全 符合临床要求的结果。 我们对Ｂ孔加水量的多少进行了试验，根据以上实验结 果可以认为，在上述实验条件下，Ｂ孔吸光度在0.41以下时 ，可以进行加水稀释，结果与正常试剂一致；加水量可以控 制在使Ｂ孔试剂吸光度在0.29～0.31之间较为合适。 运用此种措施节省了大量试剂，但亦为权宜之计。临床 工作中应密切注意质控情况，以确保结果的可靠性。 | 
