[求助]两点终点法 2Point End

我们上全自动生化时测定方法中有两点终点法（2Point End）,测光点A1应设在加R2稍前（也是说反应曲线没上升稍前）吧?测光点A2应设在反应的终点后（也是说反应曲线上升至平稳时）吧??
记得我们科有的项目（2Point End法），测光点A1有的设在加R2稍前，有的设在加R2稍后（从反应吸光度监测图查到）。到底应加在哪合适呢？多谢指点！

本站有很多厂家的试剂参数下载，你可以搜索看一下，很多都是关于日本系列生化的，不同的试剂不同的方法这些测光点都是不同的，一般根据曲线调整，不是一概而论的，你先看看再说。

知道了，多谢yeec老师，我都下载了，就只想弄明白原理“测光点A1设在加R2稍前，还是设在加R2稍后”。想更深些了解而已。把原理清了，其它问题就好解决了，是吗？

yeec老师博才多学，希望继续发杨光大，给论坛的兄弟朋友们指点迷经。您幸苦了！！

主要是方法问题，有些方法和试剂在没有加R2之前没有反应或者反应不到位，你加测光点没有意义，不能一概而论。

以下是引用yeec在2007-1-22 22:31:00的发言：

主要是方法问题，有些方法和试剂在没有加R2之前没有反应或者反应不到位，你加测光点没有意义，不能一概而论。

多谢yeec老师,那2Point End法测光点A1应设在你所说的哪一个“已到位”的反应？是前半部份的“血清＋R1”反应没到位？还是后半部份的“血清＋R1＋R2”的反应没到位？

深一层说的是：测光点A1应设在反应曲线没上升稍前吧（即：设在加R2稍后，此时反应曲线还没明显变化。加R2后反应曲线才开始上升直达底物尽至曲线平稳）？个人所见，请指正！

生化反应结果体现在曲线上，方法不同在曲线中的取值也不同，有取水平段的，也就是终点，有取空白和上升段的，有取上升的两段，有取上上和水平的，。。。等等，方法和曲线配合协调也就是加入试剂的时间和测光点的设定基础。生化的难度在于应用，每一个生化室的老师都是应用高手，虽然由于种种原因不会详细告诉你为什么这么做，但他们的做法没有问题，理论上的东西你要自己依据所学进行分析归纳整理，不是这么简单的几句话就可以概括的。在没有确切明白你想要知道什么之前，没有人会给你确切的答案，你的毛病在于给别人一个不确切的问题逼别人给你一个宽泛的准确的答案，这无疑是强人所难，也是不可能的。

多谢了

两点终点法的原理是：此种方法一般为双试剂的终点法（如液双的Glu,LDL-C等）样品和第一试剂反应经过一段时间加入第二试剂，再加入R2前纪录吸光度值A1，加入R2后达到稳定期后，记录吸光度值A2。最后用A2-A1通过Lamber-Beer定律求浓度。那么为啥在加入第二试剂前记录一个测光点？因为如果第一试剂是无色的，而第二试剂一般都是启动液，所测定的A1就是样本的吸光度值，所以前面所说的A1=样本本底，那么此种方法就可以扣除样本的血清信息（溶血、酯血、黄疸）提高结果的准确性。而一点终点法无此项功能，所以尽可能把第一测光点选择在加R2前。

以下是引用东北二愣子在2007-1-30 11:06:00的发言：

两点终点法的原理是：此种方法一般为双试剂的终点法（如液双的Glu,LDL-C等）样品和第一试剂反应经过一段时间加入第二试剂，再加入R2前纪录吸光度值A1，加入R2后达到稳定期后，记录吸光度值A2。最后用A2-A1通过Lamber-Beer定律求浓度。那么为啥在加入第二试剂前记录一个测光点？因为如果第一试剂是无色的，而第二试剂一般都是启动液，所测定的A1就是样本的吸光度值，所以前面所说的A1=样本本底，那么此种方法就可以扣除样本的血清信息（溶血、酯血、黄疸）提高结果的准确性。而一点终点法无此项功能，所以尽可能把第一测光点选择在加R2前。

DING

既然宽泛地提理论问题，那我做一些宽泛的理论方面的回答，在R2加入之前读点的主要是：A、扣除样本空白（一般的2点终点法项目，测定目标为反应产物）B、测定目标是样本中的特定物质的消耗或改变，一般是降反应（如钒酸法胆红素）；需要在R2后读第一点的主要是：A、R2试剂本底吸光度很高，读在R2加入之前无法消除本底空白（如h－CRP）B、测定目标就是R2中的特定物质的消耗或改变，一般也是降反应（如胶乳法胱抑素）

qianxg 的两次回答将此问题解答的100％彻底，语言简洁， 想来是位高手！

9楼的说法是非常对的

支持！

哈哈，终于看到你啦，不要小看这个二愣子，他可是目前日本维修站的元老级工程师，不过岁数可不大，得管我叫哥，呵呵

多看多学，增长专业知识

潜心学习中

 

一针见血！强。

11楼说得真好，长见识。

所谓的两点还是一点方法学主要的是要不要去除水空白吸光度值，一点不去除，而两点去除，这样R2的加入就很好理解了吧，因为最终的结果是前后吸光度值的变化，没有三种变化，只有前后变化

楼上用词不当，去除水空白不是两点与一点的区别所在。去除杂反应的干扰是正题。杂反应包括样品本身的黄疸、乳糜、溶血的干扰，以及内源性或外源性物质对该实验特异性反应的干扰。其实所有的方法学的发展都是在寻求反应高特异性、杂反应干扰越少越好。为什么很多日本的试剂都是单试剂、一点法测定，但是其结果很准确、也很稳定。这不是他用了一点或两点的简单区别所致，在于其试剂的方法学好。我一个师妹研究生时是搞尿酸（UA)试剂的，他们老板搞了个290nm下酶法测定UA，其所用工具酶是自己培养提纯的，紫外测定很厉害，特异性好、干扰少，这就是好东西。