一组免疫类试剂操作说明

丙型肝炎病毒抗体(Anti—HcV)

诊断试剂盒(酶联免疫法)

使用说明书

本试剂盒采用间接EusA方法检测血清或血浆样品中丙肝病毒{HcV)抗体，在微孔条上

预包被高纯度基因重组HCV结构和非结构区抗原可与样品中抗HCV抗体反应再加八HRP

标记的免抗人IgG抗体与之结台然后用TMB底物作用显色．通过酶标仪检测吸光度(OD值)

从而判断样品中HcV抗体的存在与否。本试剂盒适用于献血员筛选和临床检测。

试剂组成：

1..HCV酶标板 8×12孔 7显色剂A液 6ml×1瓶

2 .HCV阳性对照 200ul×1管 8显色剂B液 6ml×1瓶

3.HCV阴性对照 200ul×1管 9终止液 6ml×1瓶

4 .HCV酶标试剂 12mI×1瓶 10自封袋 1个

5 .HCV样品稀释液 12ml×1瓶 11封板膜 2张

6.浓缩洗涤液 50mI x1瓶 12说明书 1份

操作步骤：

1、配液将50mI浓缩洗涤液(20ml)用蒸馏水或去离子水稀释至1000mI备用。

2、编号将样品对应微孔按序编号每板应设阴性对照3孔阳性对照2孔和空白对照1孔(空

白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步相同)。

3、稀释用加液器每孔加人100ul样品稀释液。

4、加样分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照10ul轻轻振荡混匀。

5、温育用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

6、洗涤小心揭掉封板膜使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤5遍．最后一次尽量

扣干。

7、加酶每孔加入酶标试剂100ul。

8、温育用封板膜封板后置37℃温育20分钟。

9、洗涤：同步骤6。

10、显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul。轻轻振荡混匀，37c避光显色10分钟。

11、测定：每孔加终止液50uI轻轻振荡混匀设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长

检测)用空白孔调零点后测定各孔OD值。

结果判定：

1、阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔0D值≤0. 08(阴性对照孔OD值若大于

0.08应舍弃如果所有阴性对照孔OD值都大于0.08应重复试验。若阴性对照均值小于0.02

则按O.02计算)。

2、阳性对照的正常范围 正常情况下阳性对照孔0D值≥0 50。

3、临界值(CUTOFF)计算临界值=阴性对照孔OD均值+0.12

4、阳性判定样品OD值≥临界值(CuTOFF)者为HcV抗体反应阳性(注意初试OD值≤2倍

临界值的弱阳性标本应进行双孔复试，复试阳性者方为HCV抗体阳性)。

5、阴性判定样品OD值<临界值(cuTOFF)者为HcV抗体反应阴性。

注意事项：

1、试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡15—30分钟后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存温育酶标板的时间和温度必须严格控制。

2、加液时必须用移液器加并经常校对移液器的准确性。

3、洗涤时各孔均需加满洗液防止孔口内有游离酶不能洗净。使用洗板机洗涤应设定30~60秒浸泡时间。

4 、HCV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准建议用双波长450/630nm检测。

5、所有样品和废弃物都应按传染源处理终止液为2M的硫酸使用时必须注意安全。

6、操作应按说明书严格进行不同批发试剂不得混用封板膜为一次性用品不能重复使用。

7、操作过程中禁止酶标板及其它试剂、次氯酸类消毒剂接触。

甲胎蛋白诊断试剂盒酶联免疫法说明书

一步法

用于检测人血清或血浆中甲胎蛋白(AFP)的含量，可用于原发性肝细胞癌及胎儿发育畸形的早期辅助诊断。

【试剂盒组成】

1、AFP包被条： 12孔×4条 2、AFP酶结合物： 1瓶

3、洗 涤 液： 1瓶 4、显 色 剂A： 1瓶

5、显 色剂B： 1瓶 6、终 止 液： 1瓶

7、AFP标准品： 20ng／ml、400ng／mI各1瓶 8、说 明 书： 1份

【原理】

本试剂采用ELlSA双抗体夹心法定性(或半定量)检测人血清或血浆中AFP的含量。

【操作步骤】

1、将包被孔编号．每孔加入标准品或待测样品50 ul，随即每孔加入酶结合物50 uI，混合均匀．置37℃温浴20分钟。

2、每孔加入洗涤液2滴，轻轻震荡，甩去各孔内液体，之后仅用蒸馏水或自来水洗涤6次，每次应甩净孔内液体，最后在吸水纸上拍干。

3、每孔加显色剂A、B液各1滴，37℃反应5分钟，然后加终止液1滴终止反应，观察结果或比色。

【结果判定】

1、正常人含量参考值：正常人≤20ng／ml

2、目测：被测孔显色浅于或等于20ng／ml对照孔，可判为阴性；

被测孔显色深干或等于400ng／ml对照孔，可判为阳性；

被测孔显色介于20ng／ml与400ng／ml对照孔之间．可判为弱阳性。

3、比色：在波长450nm下，用空白孔调零．测各孔光密度(OD)值，并与对照孔比较。

【注意事项】

1、应严格按说明书操作。从冷藏环境中取出的试剂盒应置37℃平衡30分钟后方可使用。

2、防止试剂交叉污染。

3、本试剂不同批号不能混用。

4、血清样品应新鲜，避免反复冻融。

5、对AFP弱阳性者建议动态观察。

6、若需半定量可将400ng／mI标准品或血清样品倍比稀释。

7、AFP检测只能作为辅助诊断指标，阳性检出者应根据病史，临床症状和体征等综合判断。

【试剂贮存】2—8℃保存

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:15:06编辑过]

抗O胶乳凝集试剂说明书

一、 用途：血清中ASO的测定，用于链球菌感染的诊断

二、 原理：本试剂是由溶血素0包被胶乳并且校正至ASO滴度为200IU,超过上述滴度即出现肉眼可见的凝集颗粒，使用本试剂血清标本不需稀释即可直接测定。

三、试 剂

①抗0胶乳试剂(含0.1％NaN3)(白色瓶盖)

②阳性对照>200国际单位(Iu)／mlASO(红色瓶盖)

③阴性对照<200国际单位(Iu)／mlASO(蓝色瓶盖)

四、标本采集：经离心获得新鲜血清标本，贮于2~8"C48小时内使用，时间过长必须冰冻贮存．溶血、脂血及污染血清标本不可使用。

五、方法、定性试验：

①试剂使用前，预置达室温。

②轻轻混匀胶乳试剂

③核对阴性和阳性对照

④在反应板孔中加一滴未稀释血清(50u1)

⑤然后加一滴胶乳试剂在血清中

⑥轻轻摇动使其充分混匀，二分钟观察结果。阴性和阳性对照同上法操作。

六、结果观察：凝集出现ASO>200IU／ml阳性

无凝集出现AsO<200Iu，ml阴性

半定量实验血清以生理盐水倍比稀释后按下法操作即可

稀释倍 l／2 1／4 1／8 血 清 l00ul 生理盐水 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul

标本量 50ul 50ul 50ul

IU／ml 400 800 1600

七、正常值 成人<200IU／ml

八、注意事项

①使用前摇匀试剂，无肉眼可见的絮状出现，方可使用。

②加试剂和阴性、阳性对照。保证液滴大小一致。

③试剂盒贮存于2-8℃切勿冰冻。

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:15:35编辑过]

类风湿因子(RF)试剂盒

一 、用途：血清中RF的测定，用于类风湿因子相关疾病的诊断。 ，

二、原理：本试剂是由纯化的人IgG和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。RF胶乳灵敏度调整到20IU／ml，超过上述滴度即出现肉眼可见的凝集颗粒，使用本试剂血清标本不需稀释即可直接测定

三、试剂

1、RF胶乳试剂(含01％NaN3)

2．阳性对照>20国际单位(Iu)/mlRF

3．阴性对照<20国际单位(Iu)/mlRF

(用于对照的人血清HlV及HbsAg为阴性，但仍须如病人样品一样小心处理)

四、标本采集：

经离心获得新鲜血清标本，贮存于2—8℃，48小时内使用，时间过长须冰冻贮存，血浆不得使用。

五、方法、定性实验：

1.试剂使用前，预置达窒温

2.轻轻混眼匀乳胶试剂

3.核对阴性和阳性对照

4.在反应板扎中加一滴未稀释血清(20u1)

5.然后加一滴胶乳试剂在血清中

6.轻轻摇动使其充分混匀，二分钟观察结果。阴性和阳性对照同上法操作。

六、结果观察：

凝集出现RF>20IU／ml 阳性

无凝集出现RF<20IU／ml 阴性

七、正常参考值：

成人<20Iu／ml 各实验室应建立自己正常参考值范围。

八、注意事项：

l.、使用前摇匀试剂，无内眼可见的絮状出现，方可使用。

2、加试剂和阴性、阳性对照，保证液滴大小—致。

3、试剂盒贮存于2～10℃，切勿冰冻。

九、储藏条件及靠效期：

贮藏温度2～10℃。有效期为一年。

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:16:07编辑过]

梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)

诊断试剂盒(双抗原夹心酶联免疫法)

使用说明书

本试剂盒为双抗原夹心EuSA方法用于检测血清或血浆样本中的梅毒螺旋体抗体。试剂

盒中所用包被抗原和酶标记抗原均为精制的基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原，显色剂为TMB。本试剂盒适用于献血员筛选婚检和临床诊断梅毒螺旋体感染．

试剂组成：

1 .TP酶标板 8×12孔 7.显色剂B液 6ml×1瓶

2.TP阳性对照 500 ul×1管 8.终止液 6ml×1瓶

3.TP阴性对照 500 ul×1管 9.自封袋 1个

4.TP酶标试剂 12ml×1瓶 10.封板膜 2张

5.浓缩洗涤液 50ml×1瓶 11.说明书 1份

6.显色剂A液 6ml×1瓶

操作步骤：

1配液将50ml浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml后备用。

2.编号．将酶标板条固定于板架上按顺序编号每板设阴性对照3孔阳性对照2孔

空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步相同)。

3.加酶：每孔加100ul酶标试剂。

4.加样：分别在相应孔中加入待检测样品、或阴阳对照20ul振荡混均。

5.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟

6.洗涤：小心将封板膜揭掉使用洗板机吸干孔内液体用洗涤液充分洗涤6遍，最后一次

尽量扣干。

7显色每孔加显色剂A、B各50uI，轻拍混均用封板膜封板后置37_c避光显色15分钟。

8测定每孔加终止液50ul轻拍混均设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长检测)

用空白孔调零点后测定各孔0D值。

1临界值(cutoff)计算．临界值=阴性对照孔OD均值0.18。

2．阴性对照的正常范围．正常情况下，阴性对照孔OD值≤0.10。

3阳性对照的正常范围．正常情况下阳性对照孔oD值≥0.80。

4阳性判定．样品OD值≥临界值fcuTOFF)者为梅毒螺旋体抗体阳性

5阴性判定：样品oD值<临界值(cutoff)者为梅毒螺旋体抗体阴性

注意事项：

1.检测必须符台实验室管理规范和生物安全守则的规定。操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

2.梅毒螺旋体抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。建议用双波长450，630nm检测。

3.试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡15-30分钟方可使用．未用完的微孔条用自封袋密封保存。

4.洗涤液可用燕馏水或去离子水配制。洗涤时各孔均需加满洗液防止呐有游离酶不能洗净。

使用洗板机洗涤时应设定30一60秒的漫泡时间。

5.操作应按说明书严格进行不同批次试剂不得混用 封板膜为一次性用品．不能重复使用。

6.终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

7.储存条件2—8 有效期12个月

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:16:47编辑过]

乙型肝炎病毒E抗体-酶联免疫法

[试剂盒组成]

1.测抗HBe包被条 12孔×8条 2．测抗HBe酶结合物 5.5m1×1瓶

3.抗HBe阳性照 0.5ml×1瓶 4．抗HBe阴性对照 0.5m1×1瓶

5.洗涤液 20ml×1瓶 6．底物液 5.5ml× l瓶

7.显色剂 5.5ml×l瓶 8．终止液 5.5 ml×1瓶

9中和抗原 5．5m1×l瓶

[原理]本试剂盒采用ELA竞争法。

[适应症]用于人血清(浆)中的抗-HBe检测。 ‘

[操作方法]

1、加样：加待测血清50ul／孔，设阴阳性对照各2孔(1滴／孔或50ul／L)，空白对照一孔。

2、加中和抗原：加中和抗原l滴／孔或50ul／L(空白对照不加)。

3、加酶：加测抗HBe酶结合物，1滴／孔或50ul／孔(空白对照不加)。

4、温育：37℃30分钟。

5、洗板：甩去各孔内液体，拍干；用蒸馏水将洗涤液(20ml)作1：20倍稀释后；注满各孔，停留l 5秒钟后弃去，如此反复洗涤6次，每次均拍干。

6、显色：加底物液1滴／孔或50u1／孔，随即加显色剂l滴／孔或50u1／孔，37℃显色10分钟。

[结果判定]

比色法：显色以后加终止液l滴／孔或50u1／孔，选波长450nm，空白孔校零。对每孔进行比色，并记录其OD值；当有异常值出现时，应采用双波长测定，参考波长为650nm。

阴性对照OD值+阳性对照值

COV= —————————————

2

样品OD值≥COV为阴性，样品OD值<COV为阳性。

目测：有颜色为阴性，无颜色为阳性。

[注意事项]

1、不同批号的试剂不能混用。

2、使用前试剂盒内各种试剂及待测标本应平衡至室温。使用时各种试剂应摇匀，并弃去l一2滴后，垂直滴加，启用后应尽快用完。

3、试剂盒应按含有传染性材料对待。

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:17:54编辑过]

乙型肝炎病毒E抗原-酶联免疫法

[试剂盒组成]

1.测HBeAg包被条 12孔×8条 2.测HBeAg酶结合物 5．5ml×1瓶

3.HBeAg阳性对照 0.5ml×1瓶 4.HBeAg阴性对照 0.5 ml× 1瓶

5．洗涤液 20ml×1瓶 6．底物液 5 5ml× 1瓶

7．显色剂 5.5ml×l瓶 8．终止液 5 .5ml×l瓶

[原理] 本试剂盒采用ELA夹心法。

[适应症] 用于人血清(浆)中的HBeAg检测。

[操作方法]

1．加样本及酶标：

每孔加待测血清50ul，设阴阳性对照各2孔(1滴／孔或50ul/孔)，空白对照一孔，然后加测HBeAg酶结合物，1滴／孔或50ul／孔(空白对照不加)。

2．温育：37℃30分钟。

3洗板：甩去各孔内液体，拍干；用蒸馏水将洗涤液(20ml)作1：20倍稀释后；注满各孔，停留15秒钟后弃去，如此反复洗涤6次，每次均拍干。

4．显色：加底物液1滴／孔或50ul/孔，随即加显色剂1滴／孔或50ul/孔，37℃显色10分钟。

[结果判定]

比色法：显色以后加终止液1滴／孔或50ul/孔，选波长450nm，空白孔校零。对每孔进行比色，并记录其OD值；当有异常值出现时，应采用双波长测定，参考波长为650nm。

样品OD值

——————— ≥2 1为阳性，反之为阴性。

阴性对照OD值

备注：阴性对照OD值低于0．03作0．03计算，高于O．03按实际OD值计算。

目测： 有颜色为阳性，无颜色为阴性

[注意事项]

1．不同批号的试剂不能混用。

2．使用前试剂盒内各种试剂及待测标本应平衡至室温。使用时各种试剂应摇匀，并弃去1 2滴后，垂直滴加，启用后应尽快用完。

3．试剂盒应按含有传染性材料对待。

4．阳性对照OD值应大于O 8，阴性对照OD值应小于O.1，实验结果有效，否则需重试。

[试剂贮存]2—8℃避光保存

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:18:26编辑过]

乙型肝炎病毒表面抗体-酶联免疫法

[试剂盒组成]

1．测抗HBs包被条 12孔×8条 2.测抗HBs酶结合物 5.5 mI×l瓶

3．抗HBs阳性对照 0.5ml×1瓶 4.抗HBs阴性对照 0.5ml×1瓶

5．洗涤液 20ml×1瓶 6．底物液 5.5ml×1瓶

7．显色剂 5.5ml×1瓶 8．终止液 5 .5ml×l瓶

[原理] 本试剂盒采用ELA夹心法。

[适应症] 用于人血清(浆)中的抗-HBS检测。

[操作方法]

1、加样本及酶标：

每孔加待测血清50ul，设阴阳性对照各2孔(1滴／孔或50ul／孔)，空白对照一孔，然后加测抗-HBS酶结合物，l滴／孔或50ul／孔(空白对照不加)。

2、温育：37℃30分钟。

3、洗板：甩去各孔内液体，拍干；用蒸馏水将洗涤液(20m1)作l：20倍稀释后；注满各孔，停留15秒钟后弃去，如此反复洗涤6次，每次均拍干。

4、显色：加底物液1滴／孔或50uI／孔，随即加显色剂1滴／孔或50ul／孔，37℃显色10分钟。

[结果判定]

比色法：显色以后加终止液1滴／孔或50ul／孔，选波长450nm空白孔L校零。对每孔

进行比色，并记录其OD值；当有异常值出现时，应采用双波长测定，参考波长为650nm。

样品OD值

——————— ≥2．1为阳性。反之为阴性。

阴性对照OD值

备注：阴性对照OD值低于0.03作0.03计算，高于0.03按实际OD值计算。

目测：有颜色为阳性，无颜色为阴性

[注意事项]

1、不同批号的试剂不能混用。

2、使用前试剂盒内各种试剂及待测标本应平衡至室温。使用时各种试剂应摇匀，并弃去l~2滴后，垂直滴加，启用后应尽快用完。

3、试剂盒应按含有传染性材料对待。

4、阳性对照OD值应大于0.8，阴性对照OD值应小于0.1实验结果有效，否则需重试。

[试剂贮存]2—8℃避光保存

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:18:59编辑过]

乙型肝炎病毒表面抗原-酶联免疫法

[试剂盒组成]

1．测HBSAg包被条 12孔×8条 2．测IHBSAg酶结合物 5.5m1×1瓶

3．HBsAg阳性对照 0.5ml×1瓶 4．HBsAg阴性对照 0.5ml×1瓶

5．底物液 5．5ml×1瓶 6．显色剂 5.5 ml×1瓶

7．洗涤液 20ml×1瓶 8．终止液 5.5ml×1瓶

[原理]

本试剂采用双抗体夹心法，将纯化抗HBs吸附于固相载体表面，加人待检血清(或血浆)，如其中含有HBsAg，则与载体上的抗HBSBs结合，继而加入辣根过氧化物酶标记的抗HBs结合物，又与结合的HBsAg反应，最后用比色法测定结合于载体上酶标抗体的酶活力，据此反应血清或血浆中HBSAg含量。

[适应症] 检测血清或血浆中HBsAg，用于临床肝炎诊断、分类及献血员的筛选。

[操作步骤]

1、取包被微孔反应条，固定于塑料框架上，加标本50ul孔，阴、阳性对照50ul(或1滴)／孔各2孔，同时留一孔不加作空白对照，随即加入测HBsAg酶结合物50ul(或1滴)／孔，空白对照不加，置37C恒温水温箱，温育30分钟。

2、甩去各孔内液体，拍干；用蒸馏水将洗涤液作1：20倍稀释后，注满各孔，停留30秒后弃去，如此反复洗涤6次，每次均拍干。

3、加底物液50ul(或1滴)／孔，随即加显色剂50ul(或1滴)／孔，371℃显色10分钟。加终止液1滴(或50u1)／孔。

4、用450nm波长空白校零点，分别测定阴、阳性对照及标本的DD值；当有异常值出现。应采用双波长测定，参考波长为650nm。

[结果判定]

1．结果有效性：阳性对照平均OD值应>0.5；

阴性对照平均OD值应<0.1。

2．CUTOFF值计算：

CUTOEF值=阴性对照平均OD值×2.1。(若阴性对照OD值小于或等于0.04，以0.04计算，若阴性对照0D值大于0.04，按实际值计算)。

3．标本0D值≥CUT OFF值为阳性，标本OD值<CUTOFF值为阴性。

4.目测：有颜色为阳性，无颜色为阴性

[注意事项]

1．应严格按照说明书操作。

2．防止试剂交叉污染，万一混浊不能使用。

3．。本试剂批间不能混用。

4．使用前确保血样和试剂是均匀的。

5．试剂盒使用时应恢复至室温。

6．试剂盒应按含有传染性材料对待。

[试剂贮存]2~8℃避光保存

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:19:36编辑过]

乙型肝炎病毒核心抗体-酶联免疫法

[试剂盒组成]

1．测抗HBc包被条 12孔×8条 2．测抗HBc酶结合物5.5ml×1瓶

3．抗HBC阳性对照 0.5ml×1瓶 4．抗HBc阴性对照 0.5ml×1瓶

5．洗涤液 20ml×1瓶 6．底物液 5.5ml×1瓶

7．显色剂 5.5ml×1瓶 8．终止液 5.5ml×1瓶

[原理] 本试剂盒采用ELA竞争法。

[适应症] 用于人血清(浆)中的抗-HBc的检测。

[操作方法]

1.加样本及酶标：

每孔加1：50倍生理盐水稀释后的待测血清(或原倍血清)50ul，设阴阳性对照各2孔(1滴／孔或50ul/孔)，空白对照一孔，然后加测抗HBc酶结合物，1滴／孔或50u1／孔(空白对照不加)。

2．温育：37℃30分钟。

3．洗板：甩去各孔内液体，拍干；用蒸馏水将洗涤液(20ml)作1：20倍稀释后；注满各孔，停留15秒钟后弃去，如此反复洗涤6次，每次均拍干。

4．显色：加底物液1滴／孔或50ul／孔，随即加显色剂1滴／孔或50ul/孔，37℃显色10分钟。

结果判定．

比色法：显色以后加终止液滴／孔或50ul孔，选波长450nm空白孔校零。对每孔进行比色，并记录其OD值；当有异常值出现时，应采用双波长测定，参考波长为650nm。

阴性对照OD值+阳性对照OD值

COV= ———————————————

2

样品OD值≥COV为阴性，样品OD值<COV为阳性。

目测：有颜色为阴性，无颜色为阳性

[注意事项]

1．不同批号的试剂不能混用。

2．使用前试剂盒内各种试剂及待测标本应平衡至室温。使用时各种试剂应摇匀，并弃去1—2滴后，垂直滴加，启用后应尽快用完。

3．阳性对照0D值应小于0．10，阴性对照OD值应大于1．0，实验结果有效，否则需重试。

4．试剂盒应按含有传染性材料对待。

5．待测样本1：50倍稀释为临床诊断依据，原倍样本为流行病学调查意义。

[试剂贮存] 2~8℃避光保存

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:20:41编辑过]