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血凝试剂操作

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郑振寰 发表于 2007-1-21 10:38 | 显示全部楼层 |阅读模式

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活化部分凝血活酶时间(APT T) (鞣花酸)

[检测原理]

待测血浆加入部分凝血活酶溶液,存ca+参与下纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需的时间,即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)APTT

测定足内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验,也可作为内源性途径凝血因子的定量试验,可检测除Ⅷ因子外的其他血浆凝血因子,特别是用于因于Ⅷ、Ⅸ、ⅪⅫ和前肽释放酶的测定。同时,APTT测定可用于肝素治疗监控。本试剂盒是用于体外人血浆中活化部分凝血活酶时间测定。

[试剂盒组成及主要成份]

1.APTT(鞣化酸)试剂:10

(内含脑磷脂、鞣花酸、稳定剂、防腐剂)

2 0.025 molI CaCl21

(内含氯化钙、防腐剂)

[规格]1 5m1

[样本采集与保存]

静脉采血,置于含有1/1体积0.109mol/L,枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份个血)的塑料管或硅化玻璃管内,轻轻颠倒混匀,3000rpm(2500g)离心15分钟,收集上层液(血浆,黄色)。样本在不同条件下可保存时间如下:

-80保存,小宜超过30天。-20保存,不宜超过14天。28保存,不宜超过6小时。2224保存,不宜超过2小时测定。

[使用方法]

l、试剂使用前请振摇均匀。

2、半自动血凝仪、于工测定

(1)取待测血浆(正常质控血浆或正常混合血浆)0.1ml,加入37预温APTT试剂01ml37孵育5min

(2)加入37预温0.025 molCaCL2溶液0 .1mL,记录凝固时问。

3、全自动血凝仪测定

请按仪器提供的参数操作。

[适用仪器] 血凝仪

[正常值] 2238

[主要技术指标]重复性:CV5

[注意事项]

1、采血必须使用 次性塑料沣射器或硅化玻璃注射器,贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管。不宜使用普通玻璃器,避免凝血因子活化。

2、采血时止血带不口束缚过紧,并不应赳过5分钟,否则导致凝血及纤溶冈子活化。

3、样本内若有残留细胞,经冻融细胞膜可破坏而影响结果。

4、样本暴露于空气中可使PH值升高,因此若不能立即测定,应将样本加塞保存。

5-80-20保存样本,测定时37迅速融化,不可反复冻融。

6、实验材料不能有去污剂存在。

7、样本采集避免浒血及组织液污染。

8、血液应立即加抗凝剂,血浆制备必须及时,血浆分离应尽量去除血小板。血浆分离后应尽快测定。

9 APTT(鞣花酸)试剂预温不可超过15分钟。半自动血凝仪测定时,预温试剂应按每天实际使用量量取预热,末用完的预热试剂应弃用。

10、用浊度法测定终点的自动化凝血仪,溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果,此时宜用手工法或电了机械式凝血仪测定。

11、红细胞比容超过55%或小于20%时,应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积(ml)=0.001 85×血液体积(m1)×(100一比容)

12、建议各实验审建立自己的参考值范围。

13.待测血浆不宜使用EDTA·Na2、肝素、草酸盐抗凝,应使用0.109molL,枸橼酸钠抗凝。

14、口服避孕药、雌激素、妊娠、香豆索类药物、肝素、天冬酰胺酶、纳络酮可影响APTT

15.APTT(鞣花酸)试剂与血浆温育时间不宜少于5min

16、手T操作时,光线要充足,活化部分凝血活酶时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准。

17、测定温度3653 85,过低或过高温度均使APTT延长

18 APTT(鞣花酸)试剂应于28保存,清勿冻结。

19APTT(鞣花酸)试剂长期保存后可能会形成黄色沉淀,用前请振摇均匀。

[贮存方法] 28保存,有效期十五个月

[临床意义]

APTT延长:见于凝血因子IIV、Ⅷ、IXXI、Ⅻ减低,纤维蛋门原缺乏症,纤溶活力增强,抗凝物质存在(如血内肝索含星增加及口服抗凝剂),是监控肝素

治疗的重要指标。

APTT缩短:见于高凝状态,血栓性疾病,如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症等

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 楼主| 郑振寰 发表于 2007-1-21 10:38 | 显示全部楼层
凝血酶原时间(P T)测定试剂盒

[检测原理]

待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶,重新钙化的血浆在组织网子存在时激活因子X成为Xa,后者使凝血酶原转变为凝血酶,凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需的时间,即为待测血浆凝血酶原时间(PT)PT测定是外源性凝向系统较理想和常

用的筛选试验。也可作为外源性途径及共同途径凝血网子的定量试验,同时,也可用于口服抗凝剂治疗的监控。本试剂盒足用于体外人血浆中凝血酶原叫问测定。

[试剂盒组成及主要成份]

1PT试剂:10

(内含脑粉提取物、缓冲液、稳定剂、防腐剂)

本批试剂国际敏感指数ISI值:见瓶标

2PT缓冲液:1

(内含缓冲液、稳定剂、防腐剂)

[规格]2 0 ml

[样本采集与保存]

静脉采血,置于含有110体积O.09molL枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份伞血)的塑料管或硅化玻璃管中,轻轻颠倒混匀,3000rpm(2500g)离心1 5分钟,收集上层液(血浆,黄色)。样本在不同条件下可保存时间如下:一80保存,不宜超过30天。一20保存,不宜超过14天。28℃保存,不宜超过6小时。2224℃保存,不宜超过2小时测定。

[使用方法]

1.试剂重建与保存

每瓶PT试剂加入2 Oml缓冲液轻摇溶解。

注意:试剂溶解后28可保存7灭,室温(1525)可保存24小时,勿冻结。

2半自动血凝仪、手工测定取待测血浆(正常质控血浆或正常混合血浆)O.1m137孵育3分钟,加入37预温PT试剂0.2ml,记录凝固时间,即为PT值。

3全自动血凝仪测定

请按仪器提供的参数操作。

[适用仪器] 血凝仪

[数据处理]

凝血酶原时间比值(PTR) = 待测血浆PT / 正常质控(混合)血浆PT

国际标准化比值(INR)=PTRISI

[正常值]

1.以时间表示:l014

2PTR表示:0.951.24

3INR表示:0.94~1.30

[主要技术指标]

1.重复性:CV5

2.瓶间差:≤7.5

[注意事项]

1、采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管。不宜使用普通玻璃器,避免凝血因了活化。

2、采血时止血带不可束缚过紧,并不应超过5分钟,否则导致凝血及纤溶因子活化。

3、血液应立即加抗凝剂,血浆制备必须及时,血浆分离应尽量去除血小板。血浆分离后应尽快测定。

4、血浆预温不宜超过5分钟。

5 PT试剂预温不可超过15分钟。

6、用浊度法测定终点的自动化凝血仪,溶血和较日明显的黄疸及脂血会影响测定结果,此时宜用手工法或电子机械式凝血仪测定。

7、红细胞比容超过55%或小于20%,时,应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积(m1)=O.00185×血液体积(m1)×(1 00一比容)

8、不宜使用EDTA·Na2、肝素、草酸盐抗凝,应使用0.109rmolL枸橼酸钠抗凝。

9-80及一20保存样木,测定时37迅速融化,不可反复冻融。

10、样本采集避免溶血及组织液污染。

11建议各实验室建立自己的参考值范围。

12、于工操作时,光线要充足,凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准。

13、测定温度.365385,过1氐或过高温度均使PT延长

[贮存方法]28保存,有效期十八个月。

[临床意义]

PT延长:见于先天性凝血因子IIV、Ⅶ、X缺乏症,低()纤维蛋白原血症,DIC,原发性纤溶症,vitK缺乏,肝病,口服抗凝剂、肝素和FDP等。

PT缩短:见于先天性凝血因子V增多,口服避孕药高凝状态,血栓性疾病等。

[此贴子已经被作者于2007-1-21 11:10:40编辑过]
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