五、COULTER EPICS XL型流式细胞仪参数设置的标准操作规程
(一)单色荧光分析的参数设置
1.选择参数:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS、SS、FL1或FS、SS、FL2等。
2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL1 LOG改为FITC,FL2 LOG改为PE等。
3.利用参数构建直方图:用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。
4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。
5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。
6.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式
5.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。
(二)双色荧光分析的参数设置
1.选择参数:在Acquisition状态栏下选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS,SS,FL1,FL2。
2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL1 LOG改为FITC或FL2 LOG改为PE等。
3.利用参数构建直方图:用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。
4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION , 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。
5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。
6.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式
7.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。
(三)多色荧光分析的参数设置
1.选择参数:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS、SS、FL1、FL2、FL3等。
2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL1 LOG改为FITC,FL2 LOG改为PE等。
3.利用参数构建直方图:用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。
4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。
5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。
6.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式
7.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。
(四)细胞DNA周期及倍体分析参数设置
1.选择参数:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS、SS、FL3、AUX(FL3 Peak)、RATIO、TIME等。
1.1选择AUX参数时,需先将SIG点亮,并选择对数FL3 Peak。
1.2选择RATIO对数时,需行将MUN、DEN点亮,并选择参数AUX、FL3,然后再点亮RATIO参数。
2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL3 LOG改为PI。
3.如图示构建直方图,用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。将所需要的分析直方图中NO SAVE改为SAVE。
4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。
5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。
6.在直方图的上方点击一下,将出现一个对话框Enter Histgram Title,将所需要的标题写进即可。
7.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式
8.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。
五)细胞免疫表型绝对计数参数设置
1.CD34+细胞绝对计数的参数设置(ISHAGE方案)
1. 1根据上面同样方法设门( ISHAGE方案)
1.2在Set up Screen栏中选择Statics,将随FLOW-COUNT提供的微球应用浓度输入校准因子区域。
1.3 标记3管全血标本:Tube1(trol/45/34)加10ml CD45-FITC、10ml CD34-PE; Tube2(45/34)加10ml CD45-FITC、10ml CD34-PE; Tube3(trol/45/G1)加10ml CD45-FITC、10ml IgG1-PE;三管都加50全血标本,然后在 Tube1、 Tube2中加入100 ml StemTrol。混匀后室温避光15min,Q-Prep溶血。
1.4振荡混匀Flowcount,加100ml Flowcount到三反应管,注意不要带入气泡,并混匀,上机前必须重复振荡混匀一次。
1.5上FCM分析,并计算各类CD34+细胞,包括内参照及全血标本。标本上机后,当CAL区域计数FLOWCOUNT达应用浓度以上,各区域统计数据中的COUNT将自动转换为各分析区域绝对计数,单位为细胞数/ ml 。StemTrol结果经标准化因子(100ml /20ml =5)校正,与 StemTrol提供的标准值比较,差异在±15%以内通过。这样 Tube2测得的CD34+细胞数为全血标本的绝对CD34+细胞数
(六)数据分析的标准操作规程
1.DOS状态下SYSTEM 软件数据存储方式有两种:
1.1在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将LIST SAVE OFF 改为 LIST SAVE ON,即这种数据保存方式为 LISTMODE,这种存储方式可重新进行设门分析。
1.2在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,将直方图中NO SAVE改为SAVE, 这种数据保存方式为为HISTGRAM, 这种存储方式为单张直方图存储,不可进行重新分析。
2.EXPO32软件分析
2.1 WINDOWS状态应用 EXPO32分析软件,直接点击 EXPO32分析软件快捷方式,软件即会显示列出所有用户。
2.2选择所需要的路径及密码,然后点击NEXT继续
2.3直接点击Finish图标或从已建立好的方案,开始运行 EXPO32分析软件
|