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[转发]COULTER EPICS XL型流式细胞仪标准操作规程

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郑振寰 发表于 2007-1-30 14:58 | 显示全部楼层 |阅读模式

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COULTER EPICS XL型流式细胞仪标准操作规程

一、仪器开机标准操作规程

1.开机之前,分别将鞘液盒及清洁液盒分别加满鞘液和清洁液 ,废液桶倒净。

2.打开稳压电源,如仪器已连接在整体稳压电源上,无需操作此步。

3.开启计算机,仪器自动进入程序,启动流式细胞仪

4.打开电源箱门,检查 WATER TRAP(水陷阱) 、 AIRFILTER(空气过滤器) 、 VACUUM FILTER(真空泵过滤器) ,如有下列情况通知工程师:

4.1 TRAP 超过 1 / 3。

4.2 FILTER 有液体 。

4.3SYSTEM VACUUM 表超过- 17 至- 25 in.Hg 。

4.4SYSTEM PRESURE 表(系统压力表)如超过 8 - 23psi 之间 。

4.5VACUUM TRAP 如有超过 0.5 英寸液体 。

5.预热三十分钟,仪器提示插入标本管 。

6.按Protocol选择需要的 Protocol(程序),进行光路与流路检测。

7.在QC-保养程序中记录。

二、 COULTER EPICS XL型流式细胞仪光路、流路校准

1.将 FLOW- Check液 放在室温下 10 分钟。

2.按Protocol选择需要的 Protocol(程序)。

3.取 0.5ml(15~20滴) FLOW- Check液放在塑料试管内。

4.将试管放在进样台上,仪器自动取数至5000 ( FS )

5.核查 FS 及所有荧光信号( FL1、FL2、FL3、FL4 ) 的 HPCV(半峰宽CV)值,核对是否少于2%,是否与以前的记录相符。

6.如FL1、FL2、FL3、FL4 荧光信号 的 HPCV值超过2%,则应检查:

6.1 观察仪器是否预热≥20min。

6.2 按主机上PRIME键,排除气泡干扰后重测。

6.3在Acquisition状态栏下,选择 PANEL 中的 CLEANING – Panel,清洗机器后重测。

6.4若以上处理后,HPCV均未达标,应进行光路调整,由工程师完成。

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 楼主| 郑振寰 发表于 2007-1-30 14:59 | 显示全部楼层

三、COULTER EPICS XL型流式细胞仪保养标准操作规程

(一)日常清洗标准操作规程

1.准备清洗液:

1.1次氯酸钠:5%次氯酸钠1ml+蒸馏水1ml 等量混匀。

1.2蒸馏水 5ml 。

2.在Acquisition状态栏下,选择 PANEL 中的 CLEANING – Panel。

3.按仪器提示,用次氯酸钠一次,蒸馏水三次依次放入标本台,仪器自动清洗。

(二)真空管清洗标准操作规程

1.按 RUN 键, RUN 键指示闪烁

2.真空清洗器内加入 5ml 双蒸水(黑色管)

3.将清洗器放置于样品台上,水被吸入

4.拿下清洗器,按 CLEANSE 键,当清洗循环结束, RUN 键指示灯亮,仪器显示 Cytometer Ready,RUN灯亮

5.注意事项

5.1出现下述情况后必须立即进行清洗:

5.1.1使用以下染料后如 PI 、 EB 、 AO 、 TO 、 Coriphosphine-0、 FITC`Fura3 、 Fiuorescein Diacetate

5.1.2使用以上染料,进行免疫分型前。

5.1.3如果有碎片或计数有明显增加。

5.2工作 24 小时至少关机一次。

5.3重新启动激光必须在仪器关闭 30 分钟之后。

5.4每2~4周清洗一次空气滤膜。

5.5每月清洗鞘液盒一次。

5.6每 60 天清洗清洁液盒一次。

四、COULTER EPICS XL型流式细胞仪关机标准操作规程

1.完成日常清洗程序。

2.完成真空管清洗。

3.用 70 %酒精清洗标本台。

4.将有双蒸水的试管放在样品台上

5.在 Applications 状态中的,选择 EXIT 退出system软件

6.若在DOS方式下开机,则在C:\XL 状态下键入 XLOFF ;若在WINDOWS方式下开机,则返回 WINDOWS界面,双击“ XLOFF”图标。

7.依次关闭计算机主机、打印机以及电源箱开关。

8.关闭 UPS。

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 楼主| 郑振寰 发表于 2007-1-30 15:03 | 显示全部楼层

五、COULTER EPICS XL型流式细胞仪参数设置的标准操作规程

(一)单色荧光分析的参数设置

1.选择参数:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS、SS、FL1或FS、SS、FL2等。

2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL1 LOG改为FITC,FL2 LOG改为PE等。

3.利用参数构建直方图:用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。

4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。

5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。

6.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

5.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。

(二)双色荧光分析的参数设置

1.选择参数:在Acquisition状态栏下选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS,SS,FL1,FL2。

2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL1 LOG改为FITC或FL2 LOG改为PE等。

3.利用参数构建直方图:用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。

4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION , 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。

5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。

6.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

7.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。

(三)多色荧光分析的参数设置

1.选择参数:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS、SS、FL1、FL2、FL3等。

2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL1 LOG改为FITC,FL2 LOG改为PE等。

3.利用参数构建直方图:用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。

4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。

5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。

6.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

7.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。

(四)细胞DNA周期及倍体分析参数设置

1.选择参数:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将需要的参数点成黄色,如FS、SS、FL3、AUX(FL3 Peak)、RATIO、TIME等。

1.1选择AUX参数时,需先将SIG点亮,并选择对数FL3 Peak。

1.2选择RATIO对数时,需行将MUN、DEN点亮,并选择参数AUX、FL3,然后再点亮RATIO参数。

2.选择参数后,可利用屏幕右上方的USER Name将所选择的信号改成用户需要的名词,如将FL3 LOG改为PI。

3.如图示构建直方图,用鼠标将屏幕右上方的参数点亮,然后放在直方图的X、Y轴,创建需要的直方图。将所需要的分析直方图中NO SAVE改为SAVE。

4.设立分析区域:在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的RUN/REGION 单击鼠标左键,将需要设立分析区域的直方图放大, 将屏幕右下的REGION EDIT改为CREAT,在屏幕右侧选择分析区域类型,连续点击即可改变。

5.利用GATING建立直方图之间的关系:在设立分析区域的界面下,返回多张直方图显示状态。选择所需要的分析区域,如A,并将其点亮,放在所要GATED的直方图上方。

6.在直方图的上方点击一下,将出现一个对话框Enter Histgram Title,将所需要的标题写进即可。

7.选择数据采集的停止方式、打印方式、存储方式

8.存储分析参数:在Acquisition状态栏下上选择 Protocol下的SAVE AS,给此分析参数取名。



五)细胞免疫表型绝对计数参数设置

1CD34+细胞绝对计数的参数设置(ISHAGE方案)

1. 1根据上面同样方法设门( ISHAGE方案)


1.2在Set up Screen栏中选择Statics,将随FLOW-COUNT提供的微球应用浓度输入校准因子区域。

1.3 标记3管全血标本:Tube1(trol/45/34)加10ml CD45-FITC、10ml CD34-PE; Tube2(45/34)加10ml CD45-FITC、10ml CD34-PE; Tube3(trol/45/G1)加10ml CD45-FITC、10ml IgG1-PE;三管都加50全血标本,然后在 Tube1、 Tube2中加入100 ml StemTrol。混匀后室温避光15min,Q-Prep溶血。

1.4振荡混匀Flowcount,加100ml Flowcount到三反应管,注意不要带入气泡,并混匀,上机前必须重复振荡混匀一次。

1.5上FCM分析,并计算各类CD34+细胞,包括内参照及全血标本。标本上机后,当CAL区域计数FLOWCOUNT达应用浓度以上,各区域统计数据中的COUNT将自动转换为各分析区域绝对计数,单位为细胞数/ ml 。StemTrol结果经标准化因子(100ml /20ml =5)校正,与 StemTrol提供的标准值比较,差异在±15%以内通过。这样 Tube2测得的CD34+细胞数为全血标本的绝对CD34+细胞数

(六)数据分析的标准操作规程

1.DOS状态下SYSTEM 软件数据存储方式有两种:

1.1在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,于屏幕右下方用鼠标将LIST SAVE OFF 改为 LIST SAVE ON,即这种数据保存方式为 LISTMODE,这种存储方式可重新进行设门分析。

1.2在Acquisition状态栏下上选择SETUP SCREEN下的 Protocol,将直方图中NO SAVE改为SAVE, 这种数据保存方式为为HISTGRAM, 这种存储方式为单张直方图存储,不可进行重新分析。

2.EXPO32软件分析

2.1 WINDOWS状态应用 EXPO32分析软件,直接点击 EXPO32分析软件快捷方式,软件即会显示列出所有用户。

2.2选择所需要的路径及密码,然后点击NEXT继续

2.3直接点击Finish图标或从已建立好的方案,开始运行 EXPO32分析软件


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