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[转发]ABI-7000荧光定量PCR仪简易操作规程

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郑振寰 发表于 2007-1-30 15:04 | 显示全部楼层 |阅读模式

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ABI Prism®7000型荧光定量基因扩增仪仪器标准操作规程

一、仪器开/关机程序

1开机程序

1.1 打开电脑,进入桌面。

1.2 打开ABI-7000仪器正面的电源开关。

1.3 双击桌面上的软件图标,进入软件的主菜单。

2、关机程序

2.1 保存数据,退出软件的主菜单。

2.2 关掉电脑,关闭ABI-7000仪器正面的电源开关。

二、程序文件的设置及打开

1实验程序已预先设定

1.1 此时只需点击任务栏上的新建 ,在弹出的对话框“New Document Wizzard”中,点击“Browser”,找到相应的程序文件,单击打开。

1.2 回到对话框“New Document Wizzard”后,点击“完成”即可。

2创建新的程序文件

2.1 点击任务栏上的新建 ,在弹出的对话框“New Document Wizzard”中,直接点击“完成”。

2.2 单击任务栏下的“Instrument”页面,进入程序编辑界面,输入相应的温度、时间、重复的循环数(Reps),以及反应体系(Sample Volume),并可根据具体情况增加或删除步骤(Cycle和Step)。

2.3 另外7300须在“Data Collection”的下拉菜单中选择荧光收集的时间点。

2.4 编辑完成后,点击任务栏上的“File”下拉菜单,选择“Save As...”,在弹出的对话框中选择保存文件的路径,输入文件名,并在“保存类型”的下拉菜单中选择“SDS Templates(*.sdt)”,单击保存。

三、仪器操作程序

1、编辑样本

1.1 将装有反应液的PCR反应管放入PCR仪,记录样本摆放顺序。

1.2 点击任务栏下的“Setup”页面,利用Shift键和Ctrl键选择相应的孔位,

1.3 点击任务栏上的 ,进入“Well Inspector”对话框,点击“Add Detector”,进入“Detector Manager”对话框。

1.4 如检测所需的“Detector”预先已有设定,只需选择相应的“Detector”,单击“Add to Plate Document”,回到“Well Inspector”对话框,打钩即可。

1.5 若是第一次实验,则需创建新“Detector”,在“File”下拉菜单中点击“New”,在“New Detector”对话框中输入名称,选择荧光报告基团(Reporter Dye)和荧光粹灭基团(Quencher Dye),点击OK完成创建,回到“Detector Manager”对话框。选择相应的“Detector”,单击“Add to Plate Document”,回到“Well Inspector”对话框,打钩即可。

1.6此时输入相应孔位的样本名称,样本属性(Task),如标准品,则在“Quantity”中输入相应数值,在“Passive Reference”中选择所需的参比荧光;完成后,点击“close”退出。

2、 运行

2.1 进入“Instrument”页面,单击

2.2 输入需保存的数据文件名,保存(SDS文件),点击“Start”。

3数据分析

3.1单击 ,找到需分析的数据文件,点击打开。

3.2在“results”界面下,点击“amplification plot”,选中所有样本和标准。

3.3按照基线调整原则调整基线,点击“analyze”,点击“standard curve”,看相关系数R2的绝对值是否在0.98以上,点击“plate,可以看到各标本的值,打印即可。

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