[转发]乙型肝炎核心抗体定量检测操作规程

乙型肝炎核心抗体定量检测（Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen，anti-HBc/CORE）

1．检验目的

检测HBcAb主要是用于乙型肝炎的的诊断、了解乙肝病毒感染者的感染状况，另外还用于乙型肝炎的流行病学调查。

2．方法原理

采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析（MEIA），即以HBcAg包被微粒子（M-Ag）与标本中的HBcAb形成M-Ag-Ab复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，并与加入的碱性磷酸酶标记HBcAb结合，洗去未结合的游离物质，加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。

3．性能指标

MEIA定量检测HBcAb不精密度CVs为5.8-10.4%，检出限<1.0 PEI unit/ml），灵敏度1.0 PEI unit/ml，特异性对99.9%。

4．标本收集

4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。

4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。

4．4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管

4．5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。

4．6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。

5．分析系统

5．1分析仪器：为美国雅培公司提供的AXSYM全自动免疫分析仪，仪器校准请参见仪器操作规程。

5．2分析试剂：为美国雅培公司提供的配套的HBcAb试剂盒，规格为100test/盒，2-8℃贮存，有效期6个月；在效期内使用试剂。

5．3定标试剂：为美国雅培公司提供的配套的HBcAb试剂盒中所附带，2-8℃贮存，有效期6个月；每换一次不同批号试剂均应进行重新定标。

5．4质控试剂：为美国雅培公司提供的配套的质控品，分为高、低二个浓度，2-8℃贮存，有效期6个月；每天随常规工作一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。

5．5其他耗材：均为美国雅培公司提供，如MUP、Matrix cell液、4号液、探针清洗液、管道消毒液等，其中MUP为2-8℃贮存，其他均室温存放。

6．定标程序

6．1仪器开启后（开机程序参见仪器操作规程），从屏幕主菜单中选择ORDERLIST。

6．2选择F4（CAL）。

6．3选择要定标的项目——HBcAb。

6．4输入标本架的位置。

6．5输入标准品的批号和效期（可省略）。

6．6选择定标类型——INDEX曲线。

6．7选择F6（ADD）确认定标申请。

6．8返回主菜单，按RUN键运行即可。

6．9查阅定标结果：从主菜单选择STORED RESULTS/CALIBRATION REVIEW，选择F5（VIEW ALL），选择项目——HBsAg，查看定标内容，F6——查看详细内容。

7．标本申请操作程序

7．1开机以后检查库存是否足够（包括纤维杯、bulk soIUtions、标本架的有效性）和垃圾桶是否需要清理。

7．2从主菜单选择ORDERLIST。

7．3选择F6——PATIENT。

7．4输入标本架的位置编号，如果系统设定自动标本位置定义，则无须此步骤。

7．5输入标本编号，如果系统自动设定标本编号定义，则无须此步骤。

7．6输入以下信息（可选择）：病人编号、病人姓名、病人说明，根据需要可以不输。

7．7选择该标本要检测的项目或项目组合（同时检测多个项目的也可以手工选择），在此还可选择稀释模式、检测次数和是否急诊。

7．8选择F6——ADD，确认病人标本申请。

7．9如果还有标本需要申请，重复2-7步骤，如无则选择F1——EXIT返回病人项目申请（这时可以查看申请是否正确）。

7．10选择F1-EXIT返回主菜单。

8．质量控制操作程序

8．1质控品申请参照7“标本操作”步骤执行，即随常规标本一起申请检测。

8．2质控结果登记到本年度的“免疫室定量检测项目室内质控登记表”。

8．3每天一将测定的质控结果与质控允许范围进行比较：HBcAb质控血清一共有二个浓度（阴性0 PEI unit/ml、阳性0.5-2.0 PEI unit/ml），质控范围分别为1.700-2.500S/CO(-25.00-15.00%Inhibition)、7.00-63.00S/N(60.00-97.50%Inhibition)。

8．4一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析详见9“失控处理”。

8．5每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。

9．失控处理操作程序

9．1失控情况处理：操作者在分析质控结果时，如发现质控违背了控制规则，应填写失控报告单，上交专业室主管（组长），由专业室主管（组长）做出是否发出或重测与质控品相关的该批次病人标本检验报告的决定。

9．2失控原因分析：失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误、试剂、校准物的存贮条件改变、质控品的失效、仪器维护不良以及采用的质控规则、控制范围、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的该批病人标本报告可能作废，此时首先要查明导致失控的原因，是质控品本身的原因还是质控品以外的原因。如是质控品以外的原因则应判为真失控，与质控品相关的同批次病人标本重新检测；如是质控品本身的原因，则判为假失控，与质控品相关的同批次病人标本不必重测，可以发出报告。当失控信号出现时，可以采取以下步骤去寻找原因：

9．2．1立即重测同一质控品。此法主要用于查明人为误差，每一步都应该认真仔细的操作，以查明失控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的质控结果应在允许范围（在控），可以认为该批次的病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

9．2．2新开一瓶质控品，重测失控项目。如果新开的质控血清结果正常，那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染，此时可以认为该批次病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

9．2．3新开另一批质控品，重测失控项目。如果结果在控，则说明前一批血清可能都有问题，检查它们的有效期和贮存环境，以查明问题所在，可以认为该批次病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

9．2．4进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，检查光源是否更换，对仪器进行清洗维护，然后再测质控品，如在控，则说明是仪器原因，该批次的病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

9．2．5更换另一试剂盒，重测失控项目。检查试剂是否过期或贮存环境，更换试剂盒重新检测质控品，如在控则说明试剂存在问题，该批次病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

9．2．6重新校准仪器，重测失控项目。使用新的校准液校准仪器，重新检测质控品，在控则说明是校准问题，该批次病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

9．2．7请专家帮助。前6步都未能得到在控结果，如果其他同类型检验项目在控，则需要联系试剂厂家寻求技术帮助；如果其他同类型项目也失控，则需要与仪器厂家工程师取得联系了。

10．注意事项

10．1血清（浆）中含有颗粒（如红细胞、纤维蛋白丝等）会引起错误的结果，因此离心收集血清（浆）时应不能将这些颗粒的物质加样品杯中。

10．2加样时应避免标本产生气泡，放置试剂时也应避免试剂产生气泡。

11．结果计算

11．1 S/CO值表示。先计算Cutoff Rate值（CO）= Index Calibrator Mean Rate÷2.5，然后每次将病人标本的测定值（Sample Rate）与Cutoff Rate值相除得到S/CO，如果S/CO>1则认为该病人标本中含有HBcAb而被视为阴性结果，反之被视为阳性结果。

11．3 %Inh表示。%Inh= (Index Calibrator Mean Rate- Sample Rate)÷Index Calibrator Mean Rate，标本的%Inh<50%为阴性，反之为阳性。

12．参考区间

正常人HBcAb在1.0-3.0S/CO，或-50-49.99%Inh，或者大于1.0 PEI unit/ml检测限。

13．警告值

13．1当HBcAb检测值在0.6-1.1S/CO之间一般视为低浓度区或灰区。

13．2当HBcAb检测值在>3.00S/CO以上时，则标本应重新测定。

13．3当HBcAb检测值<-50%Inh时，则标本应重新测定。

14．结果解释

14．1标本的S/CO值小于1.0被认为HBcAb阳性，反之则被认为阴性结果。

14．2对处于灰区或可疑标本，应重复检测。

14．3对于假阳性结果的原因可能有：血清标本中含有颗粒性物质（红细胞）或纤维蛋白丝、前一份血清标本含有高滴度的HBcAb使得在加样时存在携带污染、非特异性反应存在。

14．4诊断乙型肝炎或鉴别诊断急性还是慢性乙型肝炎，HBcAb检测必须同时结合乙型肝炎其他血清标志物及病人的临床表现进行综合判断。

14．5由于灵敏度的局限性，对含极低浓度HBcAb（低于检测限）的标本不能检出而出现假阴性，或感染正处于早期的窗口期，或者存在基因突变。

14．6对于其他体液标本和血库库存血的检测结果只能作为参考。

14．7对于反复冻融的血标本或含有颗粒性物质的血标本应离心后再进行检测。

14．8肝素治疗病人的血标本可能由于部分凝固而存在潜在的纤维蛋白丝，因此可能产生错误的结果。

15．安全防护

15．1对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。

15．2一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。

16．常见的误差源

16．1仪器原因：仪器的性能、仪器的校准等。

16．2试剂原因：试剂过期、定标液过期等。

16．3标本原因：标本处理、收集不符合要求等。

16．4人为原因：结果填写错误等。

17．参考文献

17．1 Abbott AXSYM CORE MEIA kit 说明书。