浅谈库尔特（Coulter）五分类血细胞分析仪工作原理及配套试剂

中山市宝骏生物工程研究所 黄圣辉 库尔特五分类血细胞分析仪主要体现在白细胞分类部分的改进上，并增加了网织红细胞的直接检测。即在原电阻法三分类基础上发展为多项技术联合同时检测一个细胞，提供了较单一电阻法更精细的检测数据。实际就是在三分类配套试剂的基础上再增加相应的两种溶血剂。一种为只作用于成熟红细胞的碱性溶血剂和另一种起中和作用和固化作用的酸性溶血剂，加上原三分类的溶血剂，由这三种溶血剂与原三分类稀释液、清洗剂，组合而成五分类的配套试剂。通过VCS技术综合分析实验数据，得出较为准确的白细胞五分类结果。 具体地说，就是应用VCS技术即容量、电导、光散射法来检测血液细胞的一种新技术。 VCS技术可使血细胞未经任何处理，在与体内形态完全相同的自然状态下得出检测结果。仪器首先自动在样本内加入只作用于成熟红细胞的碱性溶血剂（erythrolyse）商品名称之为“网织红细胞试剂包”。使成熟红细胞溶解；而白细胞和网织红细胞均不被破坏。（因白细胞的核质和网织红细胞的颗粒为DNA即去氧核糖核酸，有耐酸碱特性）。然后再加入酸性溶血剂，称抗溶血剂（stabilyse）,商品名叫“白细胞试剂包”。对前溶血剂起中和作用。使白细胞表面即细胞膜 和细胞质及细胞大小，以及网织红细胞等特征仍然保持与体内大致相同的状态。 关于VCS原理与技术可作以下具体的分述： V：是代表体积容量（Volume）也就是库尔特氏首创发明的电阻抗原理，把电阻法微孔技术应用于计数血细胞和测定其体积的大小。 C：是代表传导性即电导（Conductivity）,指一束电磁波或称射频，穿透过细胞的传导性，它取决于细胞的大小和内部结构；经校正后的传导性叫opacity即“不透明性”，这时不再反映细胞大小，而是反映细胞内部的结构，像核的大小，核浆比例和密度等。 S：是代表散射（scatter）,指在不同角度测得的散射光强度。由于各类细胞的表面结构不同和颗粒大小不同而对光的散射各异，因此，通过上述VCS三种方式联合检测而导出不同细胞的特征信息。通过仪器内设计算机系统分析，便可加以识别，区分不同细胞。 仪器具体的运作是：根据流体力学的原理，应用鞘流技术使溶血后剩余的白细胞和网织红细胞单个通过检测器，接受VCS三种技术的同时检测。细胞体积测量使用的是电阻抗原理，而电导性是根据细胞壁能产生高频电流的性能，采用高频电磁探针测量细胞内部结构，细胞核及细胞浆的比例，细胞内质粒的大小和密度。因此，电导性可辨别体积完全相同而性质不同的两个细胞群。例如小淋巴细胞与嗜碱细胞两者的直径均在9～12um内。当高频电流通过这两种细胞时，尽管大小一致，由于它们的核浆比例不一样而呈现出不同的信号，借此便把它们区分开。光散射是根据细胞表面光散射的特点提供了着重于细胞类型的鉴别方式。来自激光光源的单色光束直接射入计数池的敏感区，在100～700时对每个细胞进行扫描分析，提供了细胞结构、形态的光散射信息。光散射特别具有对细胞颗粒的构型和颗粒质量的区别能力。细胞粗颗粒的光散射要比细颗粒更强。因此，这种光散射便帮助了仪器将粒细胞分开，完成五种细胞分类过程。在另两种试剂的协助下甄别出网织红，一种是新亚甲蓝，着色红细胞内RNA即核糖核酸；另一种为“透明”剂，使红细胞内血红蛋白溢出，成为“影细胞”减少测试的干扰。处理后的血液样本经VCS原理进行网织红检测而得出网织红细胞数，即绝对值（RET）、网织红细胞百分数（RET%）、网织红细胞平均体积（MCVr或MRI）和网织红细胞成熟指数（MI）等参数。 综上所述，库尔特五分类血细胞分析仪的Maxm型及Gen,s型等，是应用世界领先工艺技术水平的VCS三种方法对同一白细胞联合测试作为先进检测手段的先驱。而且是在单一通道上进行运作，避免了有些血液分析仪要设置好几个通道或加染色试剂的麻烦，因用VCS技术一般在三个方面完全一致的情形是极少见到的。加上仪器配置了先进的软件，可像流式细胞仪一样调校，设置门限，故可在三维图像上将细胞更好地分开，达到较准确的完成五分类及同时检测网织红细胞。此外，还可提示幼稚细胞及异形淋巴细胞等。Coulter的Gen,s型血细胞分析仪更可检测33项参数，测定速度更快，每小时可测100个以上的样本，精密度又有所提高；特别在防污染上考虑更周到，保证了操作者的安全，是现代高级实验室首选的血细胞分析仪器之一。 2004年7月8日