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李丹玲 北京市大兴区人民医院检验科(邮编102600)
我们于2004年1 12月．应用酶联免疫法(ELISA)中的
一步法和两步法分别检测乙肝表面抗原(HBsAg)，以探讨两种方法的临床应用价值．报告如下
材料与方法
1．一般资料：收集本院肝炎科住院及门诊一步法检测乙型肝炎两对半的患者802份， 获得HBsAg阴性样品吸光度/临界值(s/co)<1.0．而HBeAg和HBcAb两项阳性的血清10份。
2．仪器与试剂：伯乐550酶标仪．KHB洗板机．上海实业科华生物有限公司提供的试剂盒
3．样品处理：用生理盐水将10份血清标本进行倍比稀释至1:1024．再分别进行一步法和两步法检测
4．检测：一步法检测严格按试剂盒说明书进行 两步法检测是用一步法试剂分两步进行．第一步加标本血清后．37℃温浴30min洗板后加酶标抗体，再37℃温浴30min洗板．然后加底物显色
结 果
在10份HBeAg和HBcAb两项阳性的血清样品中．两步法检测7份为阳性．而一步法不同稀释度时检出不同的结果， 即高浓度的HBsAg阴性，在稀释为1:1024时HBsAg阳性。3份血清两种方法的各稀释度检测HBsAg均为阴性，见表1。
7份血清吸光度，临界值在一步法、两步法中的变化不同，在一步法中随着稀释倍数的增加．s/co值增加至最高16左右后再下降。而两步法中随着稀释倍数的增加．s/co值从最高16逐渐下降
讨论
一步法测定时，如样本中HBsAg含量很高，过量HBsAg分别和固相抗体及酶标抗体结合．而不再形成“夹心复合物”，这种现象被称为钩状效应。此效应严重时．反应可不显色而出现阴性结果⋯。在两步法检测中，高浓度的HBsAg只与包被的固相HBcAb饱和性结合，形成抗原抗体复合物．多余的未结合的游离HBc舨被第一次洗板时洗涤掉。随后加人的酶标记抗体则与抗原抗体复合物上的HBsAg结合，形成酶标抗体一抗原一固相抗体的双抗体夹心复合物．加人底物后显色．呈现阳性结果而不被漏检研究发现，两步法从原血清至稀释为1:256时均为阳性．
而一步法中，7份血清样品中的1份血清因抗原浓度过高．直至稀释1:1024时才能出现阳性结果 由于稀释的原因．3份血清在稀释1:512处两种方法均为阴性。至于3份HBeAg和HBcAb阳性，一步法和两步法各稀释度HBsAg均阴性，其原因有待进一步确定
参考文献
1．郑怀亮．韩松．临床检验指南．北京医科大学中国协和医科大学联合出版社．1994-4-18
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