[转发]ABO疑难定型

北京市红十字血液中心 　 范道旺





解决各种各样ABO定型不一致的具体措施要根据具体情况而定。

　　

一、ABO疑难血型鉴定的方法

　　（一）正反定型：
　　正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1
　　反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照
　　1.　ABO正定型中各种试剂用途
　　　　疑难定型中正定型用抗血清
　　　　抗-A及抗-B
　　　　抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应
　　　　抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型
　　　　抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测
　　2.　H抗原在红细胞上的分布
　　　　
　　3.　ABO反定型中各种试剂的用途
　　　　反定型中试剂红细胞的意义
　　　　A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体
　　　　O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型
　　　　自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)
　　　　A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下

　　（二）型物质测定
　　型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
　　标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16
　　中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟
　　检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.
　　结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。

　　（三）吸收放散
　　吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
　　吸收用的标准血清
　　将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次
　　用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
　　56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
　　用标准试剂红细胞检测放散液。

　　（四）O型筛选红细胞的应用
　　抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子
　　I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)
　　用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选
　　目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血

　　（五）自家冷凝集血样的ABO定型
　　正定型用红细胞的准备:
　　血样采集后,立即离心,获得压积红细胞
　　用37℃温盐水洗涤红细胞
　　45℃热放散3分钟
　　巯基试剂处理: 破坏IgM抗体
　　自家冷凝集血样的ABO定型
　　反定型用血浆或血清的准备
　　血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体
　　用自身红细胞吸收去除自身冷抗体
　　用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体

　　（六）获得性B
　　1.　获得性B及多凝集现象
　　　　获得性B:
　　　　肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体
　　　　肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面
　　　　多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)
　　2.　获得性B产生的主要机理
　　　　

二、ABO正反定型不符的问题分析

　　（一）ABO定型问题经常发生的情况为：
　　1.　明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：
　　　　(1) 新生儿血样
　　　　(2) 免疫缺陷、免疫紊乱
　　　　(3) 前带现象
　　　　(4) 血型型物质过多
　　　　(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体
　　　　(6) 亚型，反应是混合视野
　　2.　由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体
　　3.　明显多出抗原(或多出抗体)
　　　　(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1
　　　　(2) 自家凝集
　　　　(3) 获得性B

　　（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析
　　1.　技术因素：
　　　　(1) 试剂贮存不当
　　　　(2) 使用技术错误
　　　　(3) 使用错误的试剂
　　　　(4) 使用污染或失效的试剂
　　　　(5) 离心速度不当
　　2.　存在IgM性质的自家冷抗体
　　　　由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。可用DTT或2-ME来处理细胞及血清来解除此种IgM抗体引起的干扰。血清的反定型可在37℃进行，用O型红细胞作为对照。
　　3.　抗原表达弱或缺失：
　　　　(1) A、B抗原的表达可在下述情况下被抑制：
　　　　　　a.白血病
　　　　　　b.双胞胎
　　　　　　c.H基因变异
　　　(2) A、B抗原表达太弱：由于A、B抗原表达太弱，与抗-A或抗-B不反应，但确实存在A或B抗原，因此血清中无相应的抗体。
　　4.　高水平可溶性血型物质的病人：
　　　　极少数有卵巢囊肿的妇女，由于含高浓度的可溶性血型物质，使抗原减弱或消失，此血型物质分泌进入血液可以中和抗-A或抗-B。当使用未洗涤的RBC用于ABO 定型时，型物质就会中和抗-A或抗-B，引起假阴性反应。
　　5.　混合视野：
　　　　(1) 来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样
　　　　(2) 骨髓移植后不久
　　　　(3) Tn或A3型红细胞
　　6.　缺失或弱抗-A、抗-B
　　　　(1) 新生儿血清
　　　　(2) 免疫缺陷、紊乱病人
　　　　(3) 老年人
　　7.　前带现象
　　　　当抗-A或抗-B的效价（如35000）IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。解决方法：
　　　　(1) EDTA抗凝血浆结合钙
　　　　(2) 使用EDTA保存液悬浮细胞
　　　　(3) 将血浆于56℃灭活补体
　　　　(4) 血浆或血清用盐水1:10稀释
　　8.　多凝集：多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。起因是微生物酶引起膜的改变，以及膜上糖基合成不完善。
　　9.　不正常血清蛋白：
　　　　白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。
　　10. 血样血清中存在抗试剂成分的抗体：如抗防腐剂的抗体、抗EDTA的抗体等，此种抗体可以通过将红细胞洗涤而解除。

三、解决ABO定型不一致的指导原则

　　（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方案
　　出现弱/缺失抗原的可能情况
　　　　1.　A亚型、B亚型或AB亚型
　　　　2.　疾病状态：如白血病导致A或B抗原减弱，何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。
　　　　3.　过量的血型物质：由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌、卵巢囊肿）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗－A或抗－B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。通过洗涤红细胞可解决此问题。
　　　　4.　获得性B
　　　　5.　抗－A或抗－B试剂中存在低频抗原的抗体
　　出现弱/缺失抗原的解决措施
　　　　1.　洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是型物质的抑制
　　　　2.　酶处理红细胞再次试验
　　　　3.　吸收放散确定是否是亚型。
　　　　4.　了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野
　　　　5.　了解病情诊断（尤其是白血病）
　　　　6.　了解是否是骨髓移植受者
　　　　7.　了解是否是双胞胎
　　　　8.　是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定
　　　　9.　分泌型型物质检查
　　　　10. 进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离
　　　　11. 如果是弱A或弱B遗传，则检查红细胞上H抗原的表达

　　　　　　
　　　　　　患者的正定型与正常反应强度相比属于减弱的反应。从反定型中可以看出，患者血清中不存在ABO系统以外的抗体干扰，也不存在自身抗体的干扰，因和B细胞产生反应，表明红细胞上可能具有A抗原。在正定型中与国产的单克隆抗-A无反应活性，而和抗-AB有弱反应，暗示A亚型的可能。
　　　　　　通过吸收放散、型物质检查确认A亚型。可能是A3.

　　（二）出现弱反应或缺失抗体的解决措施
　　出现弱反应或缺失抗体由四种情况引起
　　　　1.　年龄：新生儿及老人。
　　　　2.　低球蛋白血症：如白血病人、使用免疫抑止药物、低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性）、骨髓移植后病人。
　　　　3.　丙球缺乏血症：如免疫缺陷病人
　　　　4.　双胞胎嵌合体
　　解决方案
　　　　1.　延长反应时间
　　　　2.　于室温及4℃检查血清中的抗体。用A、B、O及自身红细胞进行检查
　　　　3.　于室温及4℃检查血清中抗体。用酶处理的A、B、O及自身细胞进行检查。可能需要在试验前进行冷抗体的自身吸收
　　　　4.　确定病人年龄及临床诊断（如新生儿、免疫病）
　　　　5.　确定输血史（非ABO同型的血浆输注）
　　　　　　
　　　　　　　　　　　　补充试验：正反定型分别在室温及4度孵育30分钟
　　　　　　　　　　　　可能血型为O型，但具有低效价的抗-A

　　（三）出现多余抗原（额外抗原）的解决方案
　　出现多余抗原的可能情况
　　　　1.　抗原发生改变：
　　　　　　（1）获得性B：肠道疾病患者，细菌作用导致
　　　　　　（2）多凝集现象：红细胞被掘大多数人的正常血清凝集
　　　　2.　红细胞已经被抗体包被：如自家免疫溶血性贫血、输血反应及HDN。
　　　　3.　非抗－A及抗－B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。（洗涤红细胞）如抗血清添加剂：染料的抗体与抗体结合附着在红细胞表面导致。
　　　　4.　混合视野：非同型输注，如O型红细胞给其他型输用，非ABO同型的骨髓移植，A3亚型等。
　　　　5.　低频率抗原抗体反应：定型血清中的存在低频抗原的抗体，与对应的低频抗原产生阳性反应。
　　解决措施
　　　　1.　将红细胞洗涤再进行试验，确定是否是病人或献血员的血清中存在针对ABO定型试剂成分的抗体
　　　　2.　用O型及自家红细胞于室温检查病人血清，确定血清中是否有冷自家抗体，如果有，则用2ME或DTT处理。
　　　　3.　用不同厂家的试剂检查洗涤的红细胞
　　　　4.　了解病人的临床诊断
　　　　5.　如果怀疑是获得性B，则用酸化的抗-B检查
　　　　6.　进行ABH分泌型型物质检查
　　　　7.　如果用多克隆抗-A检查结果是混合视野，则用蛋白酶处理RBC试验，考虑是否是多凝集
　　　　　　
　　　　　　解决方案: 询问病史,尤其是下消化道疾病，用酸化的抗-B(pH 6.0)检查
　　　　　　
　　　　　　在反定型试验中可以看出，O型红细胞和自身对照皆为阴性，表明反定型试验结果可靠，即为O型。而在正定型试验中均为阳性，可能出现的阳性反应不属于ABO系统的抗原抗体反应。需要了解定型血清是否是人血清来源，并了解被检者的疾病诊断，使用非人血清来源的标准定型血清来进行正定型。可能血型为O型的多凝集现象。
　　　　　　
　　　　　　可能血型Ｏ,由于抗-B染料丫啶黄和标清中的相应抗体形成复合物附着在红细胞表面，造成正定型中出现和红细胞产生3+的非特异性阳性反应。

　　（四）出现额外抗体：
　　产生未知的抗体反应的可能情况
　　　　1.　蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集：
　　　　　　血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高（多发性骨髓瘤），原发性居球蛋白血症，纤维蛋白原浓度升高，血浆扩容剂的使用以及何杰金氏淋巴瘤，新生儿脐血中的华通氏胶。
　　　　2.　冷反应性自身抗体：
　　　　　　存在ABO系统的意外抗体：如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗－A1，顺式AB人群中弱的抗-B,导致反定型试验多出抗体。
　　　　3.　被检者血清中存在ABO系统以外的特异性冷同种抗体，反定型时出现假阳性反应。（谱细胞鉴定抗体特异性）：如抗-M、抗-N等.
　　解决方案
　　　　1.　于室温及4℃检查，确定是否存在自身抗体或冷同种抗体
　　　　2.　洗涤红细胞再次进行试验，防止血清中有针对试剂红细胞保存液成分的抗体
　　　　　　
　　　　　　　在37℃定型，去除冷自生抗体干扰后定型，型物质检测
　　　　　　
　　
　　　　　　
　　　　　　解决方案: 使用抗-A1血清进行正定型鉴定
　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　 （2）或O型有ABO以外不规则抗体
　　　　　　　　　　　　　　解决方案:（1）在正定型中添加抗-H检查
　　　　　　　　　　　　　　　　　　 （2）不规则抗体鉴定

　　（五）混合视野凝集的解决方案
　　1.　确定是否近期怀孕或输血
　　2.　确定临床诊断（尤其是白血病）
　　3.　是否是骨髓移植受者
　　4.　是否是双胞胎
　　5.　用细胞分离术将两群细胞分开，分别定型
　　6.　ABH型物质检查
　　7.　了解输血史