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050071 河北省血液中心 葛红卫 王鸿捷 张爱红 井 瑞 汤玉泉
血液检测的核心是质量保证(QA)与质量控制(QC)。高品质的诊断试剂和一个全面标准化、规范化的操作过程(SOP)是保证血液检测质量的关键。笔者采用MicrolabAT&FAME全自动酶免疫分析系统(简称FAME系统)对献血者进行血液筛查试验,意在通过标准化、自动化的操作手段及操作过程,提高血液检测的质量。以卫生部临床检验中心质控血清及质控血清盘为试验对象,应用FAME系统的试验结果与常规酶免设备试验结果相比,HBsAg、抗-HCV试验的灵敏性分别提高了1.3%和5.0%,特异性分别提高了4.0%和8.3%,精密度分别提高了2.0%和2.24%。
1 材料和方法
1.1仪器 MicrolabAT&FAME全自动酶免疫分析系统(瑞士哈美顿公司);Bio-Tek312ei全自动酶标仪和ELP-40自动洗板机(美国宝特公司);恒温水浴箱(上海医疗仪器设备厂)。
1.2 试剂 HBsAg:上海科华960624
960728 961018,上海荣盛960702;抗-HCV:上海科华960628 960805 961115,厦门新创960628;抗-HIV:上海科华960615。
1.3 样品 献血者常规检测标本;HBsAg、抗-HCV质控血清及质控血清盘均购于卫生部临床检验中心。
1.4 方法 以全自动试验程序(FAME程序)和常规试验程序(常规程序)进行常规献血者的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1+2三项试验检测,并对试验结果进行综合分析比较。
2 结果
2.1 精密度比较
2.1.1 板间精密度 以HBsAg1ng/ml血清,抗-HCV2NCU/ml血清及抗-HIV1+2阳性对照血清为质控物,按FAME程序和常规程序做连续20板试验质控值(每板有1孔质控血清),求每一质控血清值相对于cutoff值的比率,并计算20个比率均值、标准差、变异系数,绘制质控图(图1~3),两种程序板间精密度比较如表1。从表和图可知,HBsAg、抗-HCV及抗-HIV1+2三项试验FAME程序质控结果均优于常规程序结果。表现在FAME结果质控值的摆动范围变窄,s和cv值均小于常规结果质控值的s及cv。
表1 两种操作程序质控指标比较(n=20)
2.1.2 孔间精密度 采用HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1+2三项试验的质控物测定,见表1。
表2 两种操作程序孔间精密度试验结果(n=48)
2.2 重复性比较 FAME程序和常规程序检测出的HBsAg、抗-HCV阳性标本,用同样的方法重复检测,比较两种程序初次反应(IR)和重复反应性(RR)标本对受检标本百分率的差异,见表3。两种ELISA试验的非重复反应率与两种操作程序之间的独立性测验表明:FAME程序对降低ELISA试验的非重复性反应、提高试验稳定性起了作用,χ2=15.06>χ20.05=3.84(P<0.05)。
表3 两种操作程序初次及重复反应性标本对比
2.3 灵敏性及特异性比较
2.3.1 以卫生部临床检验中心质控血清盘为试验对象,采用两种操作程序对其进行HB-sAg,抗-HCV检测(表4)。两种ELISA试验的灵敏性在两种操作程序的独立性检测中显示,χ2=5.038>χ20.05=3.84(P<0.05);特异性检测χ2=11.68>χ20.05=3.84(P<0.05)。2.3.2 选择两组分别具有一定HBsAg抗原浓度和抗-HCV抗体浓度的血清系列,用两种程序进行检测;见图4、5。HBsAg曲线分析表明,对具有横坐标ab区域内抗原浓度的血清进行检测,FAME程序结果为阳性,而常规程序
表4 两种操作程序panel灵敏性及特异性的比较
结果为阴性。抗-HCV曲线也有一个同样的区间。由此认为FAME程序使ELISA试验更灵敏,使更多的弱阳性标本易被检测。说明FAME程序的应用能够提高ELISA试验的检测质量及准确程度。
图4 HBsAg抗原浓度与s/co关系曲线
图5 抗-HCV抗体浓度与s/co关系曲线
2.4 用STAT统计软件绘制HBsAg、抗-HCV两项试验FAME程序和常规程序阴性标本OD值与cutoff值的比率的分布图(见图6、7)。
图7 抗-HCV阴性标本s/co分布图
3 讨论
ELISA免疫试验效果受多因素影响,首先是试剂盒品质,试剂的生产过程决定了试剂盒的质量及特性[1];其次为试剂的使用状况,即对试剂盒的操作过程,这一过程的成功与否,直接影响着试剂盒检测水平的发挥。因此,在完全按照试剂盒操作要求的前提下,均一、稳定的操作过程和试验条件是获得最佳试验结果的必要条件。所谓最佳试验结果是既有充分的灵敏性又有很好特异性。
我国ELISA免疫诊断试剂普遍存在某种程度的缺陷,主要表现在部分ELISA免疫试剂盒阴性对照物的检测值未被有效限定。因此,对于以阴性对照计算cutoff值的试验,其界限值常为定值。另外,常规操作中操作手法的不均一性,也造成试验结果变异过大,尤其造成阴性标本s/co比率曲线的拖尾严重(表1、2,图1~3、6、7)。为了减少试验的非特异性反应,即尽量减少将常规程序比率曲线中拖尾部分的标本判断为阳性结果,只有将整体曲线向远离1的方向移动。要达到此种效果,必须给予相对较强的洗板条件。但是,洗板条件的增强使试验体系中的弱阳性标本的反应程序相应降低,又由于国产试剂在cutoff值设置方向的局限,将造成部分弱阳性标本漏检。因此国产免疫诊断试剂与常规操作程序的结合,使试验的灵敏性和特异性成为一对不可兼得的因素,从而限制了检测水平的发挥。
FAME程序避免了常规程序的局限性,消除了人为误差,其结果是两项试验FAME曲线覆盖范围变窄,拖尾基本消失,提高了试验的精密度、特异性(图6、7),且曲线峰值较常规曲线前移,整个体系的反应水平升高,有利于弱阳性标本的检出。又由于曲线基本没有拖尾现象,尽管整个图形前移也不会产生更多的假阳性结果。FAME程序的非重复反应率降低(表3),结果灵敏于常规操作程序结果(图4、5)。血清盘试验为两种程序灵敏性、特异性的差异提供了明确的定量依据。因此,FAME程序的应用改变了ELISA试验在常规操作中灵敏性和特异性不能兼得的现象,使试验的精密度、重复性、灵敏性、特异性同时有所提高。八十年代末九十年代初,欧美国家相继将全自动ELISA免疫分析系统应用于献血者和患者的血液检测,为ELISA免疫试验提供了更好特异性的结果。但FAME系统对灵敏性的影响未见更多评价。全自动仪器对ELISA试验进一步的影响,尚待深入研究。
参考文献
1 郑怀竞,等.临床检验ELISA指南.北京医科大学.中国协
和医科大学联合出版社1994;23~47
(1997-05-05收稿,1998-04-30修回)
(本文编辑:王良华 校对:尚 云)
·124·中国输血杂志1998年第11卷第3期 |
