谷成祥
(湖南省张家界市桑植县人民医院检验科,湖南张家界427100)
关键词:乙型肝炎;标志物;酶免疫分析
作者简介:谷成祥,男,1969年生,学士,主管技师,主要从事微生物、免疫学研究。
目前大多数医院利用酶免疫分析系统检测乙型肝炎标志物,为了使仪器在最短的时间内完成最大的工作量,我们对FAME自动酶免疫分析系统的工作表进行了优化设计,并对仪器的洗涤模式进行调整,寻找最佳的工作模式来提高仪器的灵敏度和特异度。
一、材料和方法
1.仪器 辉煌之星全自动酶免疫分析连体机24/30(瑞士HAMILTON公司),操作软件为MicrolabSTAR3.2英文版,FAME2.2英文版和AusLab2.5酶标实验室管理系统。
2.试剂 乙型肝炎5项血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(厦门新创生物有限公司),质控血清由卫生部临床检验中心提供,批号0301。
3.方法 标本经过条码扫描自动装载,通过STAR加样工作站实行标本和酶的快速分配,经机械手臂自动转运微板到FAME自动酶标仪,通过温育,洗板,比色,结果使用AusLab读板程序判读并通过LIS实验室管理系统实现网上发布结果,全过程自动化。采用u检验统计分析。
二、结果 1.FAME工作计划表设计 我们根据我室的工作量设计出一套90~360份标本的大容量的工作表,见表1。为方便表述将乙型肝炎5项血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)依次用1、2、3、4、5表示。通过编制这种大容量的工作表使标本量在90~360份之间均可使用本工作方案不必根据标本量的多少再行编制不同的工作计划表。这样设计的工作表经模拟后表现出较完美的阶梯式的运行图。
表1 90~360份标本乙型肝炎5项血清标志物检测的FAME工作计划表
2.FAME单元洗涤模式的选择和优化 选择临床标本400份(其中200份经手工法验证HBsAg阳性,S/CO1.01~88.6,及HBsAg浓度0.5ng/ml的临界值血清。固定孵育温度(37±2)℃,时间(25±5)min,显色时间8~10min,主波长450nm和参比波长620nm比色。泵动力高注低吸,浸泡时间20s,吸液高度0.1mm,洗涤高度距微孔底部3.0mm等参数不变,分别采用不同洗涤模式进行洗涤,检测HBsAg。结果显示,模式四(洗液总体积320μ,l洗板次数4次,底部扫洗体积300μ,l连续洗涤体积300μl)敏感度、特异度和准确性最高,见表2。
表2 不同洗涤模式下的HBsAg检测结果
3.对优化模式的检验 取HBsAg不同浓度的质控血清采用模式四分别测定20次,通过计算其S/CO、s及变异系数(CV),并与手工法进行比较来验证方法的灵敏度和重复性,见表3。采用优化后的洗涤模式后,检测不同浓度的HBsAg质控血清的S/CO均值均显著高于手工法(P<0.05),且CV值均低于手工法。
表3 优化后的仪器法检测不同浓度的HBsAg质控血清与手工法比较
三、讨论
在全自动酶免疫分析系统分析中,采用不同的工作表和工作模式的设计会带来不同的工作效率和质量,所以要在实践中不断摸索和优化,寻求一种最佳的模式使仪器发挥最大的效率。按本工作表操作,使得360份标本乙型肝炎5项血清标志物的检测可以在3h左右发出报告,较手工操作缩短了时间,提高了工作效率。而优化后的洗涤模式经标准品的验证,与手工操作相比S/CO均有所提高,说明其灵敏度较手工法高,CV普遍低于手工法,说明其重复性优于手工法,因此采用此洗涤模式使结果更加稳定可靠。
参考文献
[1] 葛红卫,王鸿捷.FAME全自动酶免分标系统的应用[J].中国输血杂志,1998,11:3.
[2] 杜晓青,左成华.自动化工作模式在乙肝标志物检测中的应用[J].华西医科大学学报,2001,16:3.
(收稿日期:2005-05-08)
(本文编辑:姜 敏)
·81·检验医学2006年第21卷第1期 LaboratoryMedicine2006,Vol21.No1.
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