[转帖]比色计和分光光度计

光电比色计和分光光度计的比色分析法是根据朗伯-比尔定律来进行的。 　　若先配制一已知浓度的标准溶液，并用同样方法处理标准溶液与被测溶液，使其成色后在同样的实验条件下用同一台仪器分别测定它们的吸光度，则在标准溶液中As=KsCsLs，在待测溶液中Ax=KxCxLx，如测定时选用相同厚度的比色皿使L相等，并使用同一波长的单色光和相同的环境温度，则k也相等，即有 　　As/Ax=Cs/Cx 或 Cx=(Ax/As)Cs 只要能测出吸光度值就能测出被测溶液的浓度，这就是光电比色计的基本原理。 　　光电比色计工作在可见光区，只适合在有限个波长下测量，波长的半宽度大。分光光度法则是利用单色分光器产生波长可连续变化的电磁波照射溶液，因溶液中的分子吸收能量而在宏观上表现为透射光强度变小。若将照射前后光强度的变化转变为电信号并记录下来，就可以得到一张光强度变化对波长关系曲线图棗分子吸收光谱图。由于分子吸收光谱与物质本身的结构有关，吸光度的大小与物质的含量有关，利用吸收光谱的形状和吸收程度的大小即可对物质进行定性和定量的分析。这种方法就叫做分光光度法。 　　分光光度计有紫外－可见光分光光度计、光焰光度计、原子吸收分光光度计、荧光分光光度计等。 （摘自现代医学仪器）

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朗伯-比尔定律

单色光经过有色溶液时，透过溶液的光强度不仅与溶液的浓度有关，而且还与溶液的厚度及溶液本身对光的吸收性能有关： 　　　　　　A = KCb 　　其中 A 为消光值，是透射光强 I 和发射光强 I0 的比值的对数（反射光强度忽略不计），即 A= lg(I0/I)； 　　K 为某溶液的消光（吸收）系数，一种有色溶液对于一定波长（单色光）的入射光的 K 值具有一定数值。若溶液的浓度以 mol/l 表示，溶液厚度以 cm 表示，则此时的 K 值称为摩尔消光系数，它是有色化合物的重要特征之一； 　C 为溶液的浓度； 　b 为光程，即溶液的厚度。 　　该定律只适用于单色光和低浓度的有色溶液

完善一下：

A= -lg(I₀/I)；另：朗伯-比尔定律A = KCb只是在排除散射和背景吸收的前提下的理想表达式，如果存在干扰则应表达为：A = KCb＋Ai 　

　 Ai为待测溶液的散射或背景吸收光度数