[转帖]第二节 免疫放射分析

　　免疫放射分析（IRMA）是从放射免疫分析（RIA）的基础上发展起来的核素标记免疫测定，其特点为用核素标记的抗体直接与受检抗原反应并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段。IRMA于1968年由Miles和Heles改进为双位免疫结合，在免疫检验中取得了广泛应用。

　　一、基本原理

　　IRMA属固相免疫标记测定，其原理与ELISA极为相似，不同点主要为标记物为核素及最后检测的为放射性量。单位点IRMA的反应模式如图16-4。

图16-4 单位点IRMA原理示意图

　　抗原与过量的标记抗体在液相反应后加入免疫吸附剂，即结合在纤维素粉或其他颗粒载体上的抗原。游离的标记抗体与免疫吸附剂结合被离心除去，然后测定上清液的放射性量。

　　双位点IRMA的反应模式（图16-5）与双抗体夹心ELISA的模式相同，可参见图15-4。

图16-5 双位点IRMA原理示意图

　　受检抗原与固相抗体结合后，洗涤，加核素标记的抗体，反应后洗涤除去游离的标记抗体，测量固相上的放射性量。

　　不论是单位点还是双位点IRMA，最后测得的放射性与受检抗原的量呈正比。

　　二、IRMA与RIA的异同点

　　1．标记物在RIA中核素标记抗原，在IRMA中核素标记抗体。抗原有不同种类，根据其化学结构，标记时需用不同的核素和不同的方法。抗体为蛋白质，有利于碘化标记，不同抗体标记方法基本相同。标记抗体的比活度高，提高了分析的灵敏度。

　　2．反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比，在IRMA中标记抗体是过量的，而且不存在竞争性结合复杂的反应，所以反应速度较RIA快。在RIA中抗体量是微量的，所以一定要用高亲和力的多克隆抗体，而在IRMA中应用亲和力较低的单克隆体也能得到满意的结果。

　　3．反应模式RIA为竞争抑制，测得放射性的量与受检抗原呈反比。IRMA为非竞争结合，剂量反应曲线为正相关的直线关系。

　　4．特异性在比位点IRMA中，一般均应用针对不同位点的单克隆抗体，其交叉反应率低于应用多克隆抗体的RIA。

　　5．标准曲线的工作浓度通常RIA的工作范围为2～3个数量级，而RIMA可达3个数量级以上。

　　6．分析误差RIA中加入的抗体和标记抗原都是定量的，加样误差可严重影响测定结果。IRMA中标记和固相抗体在反应中都是过量的，只有受检标本的加样误差才会影响分析结果。因此，IRMA的批内和批间变异均比较小。

　　7．其他RIA可以测定大分子量与小分子量的物质，双位点IRMA只能测定在分子上具有2个以上抗原表位的物质。

　　在RIA中应用的多为克隆抗体，亲和力和特异性要求较高，但用量很少。IRMA中标记抗体和固相抗体用量较多，一般均用来源丰富、特异性较高的单克隆抗体。

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第三节　医学检验中的应用

　　放射免疫分析由于敏感度高、特异性强、精密度高、并可测定小分子量和大分子量物质，所以在医学检验中应用极为广泛，常用于测定各种激素（如甲状腺激素、性激素、胰岛素等）、微量蛋白质、肿瘤标志物（如AFP、CEA、CA-125、CA-199等）和药物（如苯巴比妥、氯丙嗪、庆大霉素等）等。各种检测项目均有试剂盒供应，而且仪器设备并不昂贵，所以在国内被广泛采用。但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，操作人员须经过特殊训练。另外由于核素有半衰期，试剂盒的货存期较短，因而放射免疫分析在应用中有诸多不便之处。特别是近年来其他标记免疫分析技术如酶免疫分析、发光免疫分析等在技术上有飞跃的进展，高级仪器的自动化程度已可与生化自动分析仪相媲美，因此从长远前景看，放射免疫分析有被取代的趋势。但在目前，从所需的设备和检测的费用上，放射免疫分析还有一定的优越性，还将在一定时期内被医学检验实验室所采用。