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电泳光密度扫描仪是为对电泳标本进行定性判断和定量分析所设计的仪器。该仪器由光路系统、标本传动系统、电路运算系统、双笔记录仪和稳压电源等五部分组成。
结构设计和工作原理:
根据光电比色原理设计的。当一束单色平行光照射到电泳标本上之后,一部分被标本上染色质点所吸收,一部分则透射过标本。当入射光强度I0恒定时,透射光I的强度与标本上染色质点的多少有关,其数目越多,则透射光的强度越低。对于这种在电泳标本上检测透射光的强度,从而定量染色质点多少的方法通常称为光密度测定法。根据此原理,将欲扫描的电泳标本置于聚焦的光路狭缝上,则狭缝光束透过电泳标本照射到光电管上。在光电管后面接有前置放大器。随着电泳标本的匀速运动,前置放大器的输出电压将随时间变化,其大小反映了光束在电泳标本上透过率T的大小。
E=lgI/T (其中T表示透过率;E表示光密度)。
可知,在前置放大器后若接有对数运算器的输出电压值即反应了电泳标本上光密度值的大小。本仪器将对数运算器的输出信号接至记录仪,做为标本上各部位光密度正值的输出。
比尔定律指明:在一定条件下,标本上光密度值与其上物质的含量成正比。为确定电泳标本上各蛋白含量的多少,就应计算该蛋白带范围内物质的含量,即计算光密度曲线在横坐标上所包围的面积值。为此,仪器中设有积分运算电路,其输出电压的大小(积分记录笔高度)就代表了标本上各区带的物质含量。
由于仪器的工作基于光电转换的原理,故对于蛋白电泳之外的其它色带或浓度图谱,也同样能比色扫描,进行定量分析。
光路系统
光源灯发出复合光,经过聚光镜后便成为一束平行光。这束平行光经滤光片选择,选择出分析所需要的单色光,经过入射狭缝进入胶合物镜会聚照射到平面反射镜上,偏转90°进入出射狭缝,投照到光电管上,将光电信号变成电信号。 |