[转发]BI Prism®7000型荧光定量基因扩增仪仪器标准操作规程

一、仪器开/关机程序
1、开机程序
1.1 打开电脑，进入桌面。
1.2 打开ABI-7000仪器正面的电源开关。
1.3 双击桌面上的软件图标，进入软件的主菜单。
2、关机程序
2.1 保存数据，退出软件的主菜单。
2.2 关掉电脑，关闭ABI-7000仪器正面的电源开关。
二、程序文件的设置及打开
1、实验程序已预先设定
1.1 此时只需点击任务栏上的新建 ，在弹出的对话框“New Document Wizzard”中，点击“Browser”，找到相应的程序文件，单击打开。
1.2 回到对话框“New Document Wizzard”后，点击“完成”即可。
2、创建新的程序文件
2.1 点击任务栏上的新建 ，在弹出的对话框“New Document Wizzard”中，直接点击“完成”。
2.2 单击任务栏下的“Instrument”页面，进入程序编辑界面，输入相应的温度、时间、重复的循环数（Reps），以及反应体系（Sample Volume）,并可根据具体情况增加或删除步骤（Cycle和Step）。
2.3 另外7300须在“Data Collection”的下拉菜单中选择荧光收集的时间点。
2.4 编辑完成后，点击任务栏上的“File”下拉菜单，选择“Save As...”,在弹出的对话框中选择保存文件的路径，输入文件名，并在“保存类型”的下拉菜单中选择“SDS Templates（*.sdt）”，单击保存。
三、仪器操作程序
1、编辑样本
1.1 将装有反应液的PCR反应管放入PCR仪，记录样本摆放顺序。
1.2 点击任务栏下的“Setup”页面，利用Shift键和Ctrl键选择相应的孔位，
1.3 点击任务栏上的 ，进入“Well Inspector”对话框，点击“Add Detector”，进入“Detector Manager”对话框。
1.4 如检测所需的“Detector”预先已有设定，只需选择相应的“Detector”,单击“Add to Plate Document”,回到“Well Inspector”对话框,打钩即可。
1.5 若是第一次实验，则需创建新“Detector”，在“File”下拉菜单中点击“New”，在“New Detector”对话框中输入名称，选择荧光报告基团（Reporter Dye）和荧光粹灭基团（Quencher Dye），点击OK完成创建，回到“Detector Manager”对话框。选择相应的“Detector”,单击“Add to Plate Document”,回到“Well Inspector”对话框,打钩即可。
1.6此时输入相应孔位的样本名称，样本属性（Task），如标准品，则在“Quantity”中输入相应数值，在“Passive Reference”中选择所需的参比荧光；完成后，点击“close”退出。
2、运行
2.1 进入“Instrument”页面，单击 。
2.2 输入需保存的数据文件名，保存（SDS文件），点击“Start”。
3、数据分析
3.1单击 ，找到需分析的数据文件，点击打开。
3.2在“results”界面下，点击“amplification plot”，选中所有样本和标准。
3.3按照基线调整原则调整基线，点击“analyze”，点击“standard curve”，看相关系数R2的绝对值是否在0.98以上，点击“plate”,可以看到各标本的值，打印即可。