来源:山东农业大学
本文由生物秀根据山东农业大学的演示文档汇编而成,真诚的感谢原作者。 Ø利用显微摄影装置拍摄显微镜(或解剖镜)视野中物象的技术称为显微摄影。 Ø显微摄影技术主要包括两个方面: 1)拍摄: 需要一套完备的显微摄影装置 2)洗印放大:需要一个较好的暗室和成套的洗印放大设备。
一、显微摄影 •(一)仪器与设备 •进行显微摄影最基本的仪器是: •显微镜 •显微镜摄影仪
1.显微摄影的要求 •(1)载物台能在照相进行时粗微调,且坚固,不松动。载物台最好能作平面转动。 •(2)座架和支架均需稳固,能稳固地安装显微摄影仪,不易受外部振动的影响。 •(3)能进行聚光器的定心调整,并有孔经光阑与视场光阑。 •(4)须有内藏式光源,可调节光亮度,从低倍到高倍都能得到均称的照明,在高倍时能得到十分明亮的光。并备有放置滤色镜的地方。 •(5)具有优质的物镜和目镜。
2.显微摄影仪的必备条件 •(1)要有能够连接显微照相机的装置。 •(2)有一观察镜,能对显微镜视野进行观察,从观察镜中能清晰地看标本。 •(3)物象在观察镜中调至清晰时,也是胶片成象最清晰之时。 •(4)成象质量好,能较好地体现出原标本的情况。 • (好的显微摄影仪还附有测光强、测色温、自动控制曝光时间的装置) •(5)显微摄影装置应放置在灰尘少,振动少,干燥,半暗的房间中。放显微镜的桌子要坚固平稳。
(二)材料与试剂
•1.材料 •(1)活植物材料如幼小器官,活的组织切片,细胞和原生质体,细胞团、愈伤组织、植物表面等。材料新鲜无异物。 •(2)死植物材料如各种植物组织的永久切片(见树脂切片),被分离的细胞与细胞器,染色体的压片等。切片清洁无尘,无气泡。所摄部份完整清晰。
2.试剂 Ø显微摄影后胶卷需冲冼,显微摄影常用显定影液的配方见表1 Ø表1几种显微摄影常用显定影液的配方
(三)操作方法及注意事项 •1.安装显微摄影装置 •将相机,显微镜和照明设备连一起,并能在观察镜中看到所要拍摄的标本。 •安装时,需先细读说明书,熟悉仪器结构和功能,连接部位要稳固。
2.调整好显微镜 •(1)聚光器和光源灯的调中 –显微摄影通常采用中心亮视野透射照明法,摄影前,要把聚光器和光源灯调中,使聚光器中心与视场光阑的中心处于同一光轴上。光源灯的灯丝照明于视野中心。
聚光器的调中步骤: •①转动聚光器升降旋钮使聚光器升至顶点位置; •②接通光源灯的电源开关; •③将被摄的制片标本,放在载物台上,用4×或10×低倍镜聚焦在样品上; •④缩小镜座上的视场光阑,在视野中可见边缘模糊的视场光阑图象; •⑤微降聚光器,至视场光阑的图象清晰聚焦止; •⑥用聚光器两个调节螺杆推动聚光器,使缩小的视场光阑图象调至视野中心; •⑦开放视场光阑,使多角形的周边与视野边缘完全重合; •⑧反复缩放视场光阑数次,确认光阑中心和边缘与视野完全重合; •⑨使聚光器回复顶点位置。 光源灯调中方法可采用下法: •在视场光阑上面的滤色镜座上,放一毛玻璃,用以观察灯丝位置,转动光源灯位置,使灯丝位于视场光阑中心,然后固定光源灯。 (2)正确使用光阑 •显微镜的两种可变光阑, •即孔径光阑和视场光阑。 •①视场光阑的调节使用:
视场光阑位于镜座之中,其作用: 一是根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积 二是在显微摄影时起着增减影象反差的作用。 当光扩大到一定程度,照射到标本上的光即会有反射与不规则的散射,造成影象反差的损失。 当视场光阑收缩到取景框边缘外的时候,摄影图象的反差就会改进。 如果视场光阑收缩得过于接近取景框,图象的四角将被切去。因此,视场光阑应比取景框稍大些。 ②孔径光阑的调节: 安装在聚光镜中的光阑叫孔径光阑。它的作用是使图象的分辨率、反差和焦深处在最佳状态。大多数的标本,如想得到高质量的照片,孔径光阑要调节在物镜数值孔径的60%~80%之间(见图)。
在显微摄影时,通常用缩小孔径光阑方法来提高影象反差。 视场光阑随孔径光阑而变,总是外切孔径光阑。 •孔径光阑的功能 Ø孔径光阑放大,照片反差变小。 Ø孔径光阑收缩过小,照片反差增大,但分辨率变小。 Ø孔径光阑收缩不得低于物镜数值孔径的60%。
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