[转发]特殊染色技术的应用

现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用日益广泛，但由于这些技术要求一定的实验条件以及所需的试剂价格较为昂贵，对于一部分病人以及某一些基层医院是比较难以接受的。而组织化学技术则具有无需复杂的实验条件以及较为昂贵的试剂操作又比较简单的优势，在临床病理学诊断中具有重要的应用价值。比如，当细胞中出现色素，是黑色素还是含铁血黄素以及当组织中出现均一化学物质是否为淀粉类物质等，用组织化学技术区别起来很简单，所以组织化学技术，虽然已有几十年到几百年的历史，仍是一个很有实用价值的技术。
组织化学染色的方法很多，我们仅介绍几种常用的组织化学染色在病理诊断中的应用。
一、胶原纤维的染色
凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵引力而不致撕裂。胶原纤维是原胶原互相错开1/4平行排列交联成胶原原纤维，胶原原纤维再聚合成较宽的结构。按胶原的化学成分可分为15种，间质中的胶原纤维主要由I、Ⅱ、Ⅲ型胶原组成，新鲜时呈白色，故又称为白纤维。在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。
应用：
(1)器官硬化性疾病的观察：如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。
(2)瘢痕与淀粉样物质鉴别：前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。
(3)骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别：利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。

二、网状纤维染色
网状纤维是非常细而短的纤维，大量堆积时则形成致密的网状，故有网状纤维之称。疏松组织中网状纤维比较少，它多分布在结缔组织与其它组织交界处，如在上皮组织与结缔组织交界处的基膜内，毛细血管周围以及造血器官，内分泌腺的腺细胞团索和外分泌腺的腺末房周围等处均有丰富的网状纤维。
网状纤维的变化，反映了疾病的发生和发展的不同过程，对疾病的诊断有极大意义。网状纤维的多少、粗细紧密、疏松或断裂，都是病理检验的重要指标，尤其是在临床病理诊断中，可根据其存在和分布来鉴别癌与肉瘤。而在HE染色标本上，网状纤维不易显色。所以网状纤维的组织化学染色，在临床病理诊断上占着相当重要的位置。
应用：
(1)癌与肉瘤的鉴别：在网状纤维染色下可清楚显示出肉瘤每一个细胞周围有网状纤维围绕，或似为团状或巢状的瘤组织，但团巢内仍有破碎的网状纤维，癌显示为明显巢或索状，巢内无网状纤维。
(2)骨基质与浓缩的分泌物、血浆或水肿液的鉴别：骨基质内有网状纤维，而后者无。
(3)炎症细胞与癌细胞的鉴别：在支气管活检中有时挤压较重，一些深染的细胞挤压成团，难以判断是受挤压的炎症细胞。这种病例染网状纤维有利于鉴别，炎症细胞不成巢，小细胞癌可有巢状或索状结构。
(4)坏死与死后自溶的鉴别：在胰腺是生前坏死还是死后自溶有时很难鉴别，染网状纤维，前者网状纤维支架破坏较严重，结构塌陷，而后者虽然死后自溶严重，但网状纤维支架结构常可保存。
(5)血管性肿瘤的鉴别：有时血管内皮细胞瘤与血管周围细胞瘤常规染色较难鉴别，网状纤维染色，可显示清楚的血管结构，看清肿瘤细胞与血管关系有利于鉴别。内皮细胞性肿瘤，肿瘤位于血管壁的网状支架内，而外周细胞则围绕着血管壁或与之呈放射状排列。
（6）肝硬化及慢性肝炎肝细胞碎片状坏死或纤维化的鉴别：
a．慢性活动性肝炎坏死灶有时较难辨认，染网状纤维显示局部有网状支架的破坏与崩解，结合HE切片较易判断小灶状坏死。
b．慢性活动性肝炎轻度纤维化，在网状纤维染色下较易判断。
c.慢性淤血性肝硬变有时较难判断，网状纤维较易观察中央静脉及小叶下静脉通道上的网状纤维增生。增生较明显，有反包围现象，形成假小叶结构，就可诊断淤血性肝硬变。
（7）萎缩性胃炎的诊断：在HE染色胃粘膜有无萎缩较难判断，网状纤维染色可较清楚显示胃粘膜正常结构破坏，间质纤维增生，有助于胃粘膜萎缩的诊断。
（8）有助于癌浸润的诊断，有些上皮性肿瘤是否早期突破基底膜形成浸润，HE染色难以确诊，而网状纤维染色可较清楚显示基底膜，较易确定基底膜有无早期浸润破坏现象。
（9）脑内原发瘤与转移瘤的鉴别：脑内绝大多数肿瘤网状纤维很少，只有血管周围有少量网状纤维，而转移癌及肉瘤都有明显的网状纤维，故有利于鉴别。
（10）非干酪性结核与结节病的鉴别：后者结节内及结节周围较早出现明显的网状纤维，观察此有利于二者鉴别。
（11）淋巴结病变的判断：
a．良性滤泡性反应性增生与滤泡性淋巴瘤鉴别，染网状纤维后显示：后者滤泡间网状纤维减少且有受挤压现象，前者网状纤维增加且较紊乱。
b．判断淋巴结的正常结构：有时HE切片较难判断正常结构是否完整，染网状纤维。皮髓质及窦的结构较清楚，若为炎症或肿瘤性破坏则较难辨认。

三、弹力纤维染色
弹力纤维是结缔组织发生形成较晚的一种纤维，在创伤修复中一般在4——5周才有较明显的弹力纤维形成。弹力纤维艰固、较小而弹性较大，容易伸展，在结缔组织起弹性作用。弹力纤维由弹性蛋白组成，新鲜时呈黄色又称黄纤维。弹力纤维纤维分枝连成网，折光性强，含量多时在HE染片上呈折光性强的粉红色，量少的不显色。故量多时与胶原纤维不易区别，量少则不能观察。弹力纤维染色主要用于观察弹力纤维有无增生、肿胀、断裂、破碎及萎缩或缺如等病变。
应用：
(1）动静脉的辨认：在血管病变时是动脉还是静脉以及是否为血管壁难辨认时，弹力纤维染色有助于辨认。有弹力板者为动脉，有弹力纤维构成血管轮廓者为血管。弹力纤维抗损伤能力较强，故弹力性纤维构成血管轮廓不易损坏。
（2）弹力纤维瘤的诊断：弹力纤维染色可见瘤样病变内有大量弹力纤维增生，非真性肿瘤。
（3）心血管先天性弹力组织增生，这组疾病有先天性内膜炎及冠状动脉的弹力纤维组织增生。弹力纤维染色有助于诊断。
（4）弹力纤维损伤性疾病：这组疾病有肺气肿、动脉粥样硬化、大动脉中层炎症等，弹力纤维染色有助于这些疾病的观察诊断。
（5）一些与弹力纤维变化有关的皮肤疾病的诊断与鉴别诊断：这组疾病有皮肤松驰症，萎缩性硬化性苔藓等，其诊断与鉴别诊断常依赖于弹力纤维染色，以观察弹力纤维变化。

四、脂质染色
脂肪和类脂统称为脂类，它是构成机体的正常成份，脂肪主要积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在于脂肪细胞胞浆内。因脂肪溶于酒精，故在HE染色中则被溶解掉，因此对某些疾病不能判断，所以必须进行脂肪染色。
应用：
（1）心、脑、肾等组织器官的脂肪栓塞，脂肪染色即可判定栓子是否为脂肪滴。
（2）心脏、肝脏等脂肪变性：脂肪染色可显示变性细胞内的脂滴。
（3）脂肪肉瘤与其它间叶组织的恶性肿瘤的鉴别：脂肪染色即可显示脂肪肉瘤瘤细胞内产生的脂滴。

五、糖类染色
糖类从组织化学技术角度来分，可分为多糖、中性粘液物质、酸性粘液物质、粘蛋白及粘脂质。多糖主要指糖原，它是一种胶样液态存在于肝细胞、骨骼肌、心肌等处。因糖原在肝脏及心肌疾患及某些肿瘤的病变中分布和量都有一定改变，故糖原的染色在临床病理诊断上具有重要意义。
（1）肝及心肌糖原沉着症的诊断：糖原染色显示在肝或心肌细胞内有大量糖原存在即可确诊。
（2）糖尿病性肾小球硬化症或血管病的诊断。
（3）高雪氏病与尼曼——匹克氏病的鉴别：前者为阳性、后者为阴性，做此染色较易鉴别。
（4）骨内骨外尤文氏肉瘤的诊断：此瘤 80％细胞内有较多糖原，糖原染色为阳性，所以糖原染色为阳性（大多数细胞）可以协助诊断。
（5）腺泡状软组织肉瘤与化感瘤：前者棒状小体糖原染色为阳性。
（6）间皮瘤或滑膜肉瘤与其它癌的鉴别：前者分泌含透明质酸的粘液，糖原染色为阳性，但透明质酸酶消化后即呈阴性反应，如有此染色特点，即可有助于诊断滑膜肉瘤或间皮瘤而不是癌。
六、粘液染色
粘液从组织源上分上皮细胞分泌性及结缔组织粘液性两种。粘液染色能有助于某些疾病的诊断。
应用：
（1）水肿与粘液变性：皮肤真皮水肿与粘液变性有时较难以从组织学上区别，染粘液有助于鉴别。
（2）硬皮病与硬肿病的鉴别：后者胶原纤维增生，纤维之间粘液阳性物质增多，有助于这两者之间的鉴别。
（3）粘液细胞癌的诊断与鉴别：胃活检时，印戒细胞与黄瘤细胞或泡沫细胞不易鉴别，染粘液即可确定是否为印戒细胞。
（4）胃癌分型：有人将胃癌分为肠型及胃型，这种分型与流行病、年龄及预后有一定关系，利用AB/PBS染色，胃癌细胞分泌中性粘液为胃型，分泌酸性粘液为肠型。

七、色素染色（含铁血黄素及黑色素）
含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞，被巨噬细胞吞噬后，分解血红蛋白产生的颗粒，HE染色为棕黄色，故称为含铁血黄素。因有时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别，故做含铁血黄素染色。
应用：
主要用于同其它色素鉴别，若为阳性，显示陈旧性出血。
黑色素常见于皮肤色素细胞，恶性黑色素瘤常可产生黑色素。组织内大量存在时呈棕黑色，易于鉴别。但少量存在时便难与其它色素相鉴别，须作黑色素染色。
应用：
（1）黑色素瘤的诊断与鉴别诊断：肿瘤细胞内色素是否为黑色素，染黑色素有助于确定黑色素性质及肿瘤的定性诊断。
（2）血色病与黑便病：真皮内有色素沉着，黑色素阴性而含铁血黄素阳性者可能为前者。

八、神经原纤维染色
神经原纤维呈细线状，存在于神经细胞体及树突中，它们形成一个稠密的网状，轴突中的原纤维也互相交织在一起，且伸延至轴突全长。在HE染色中呈粉红色，难与胶原纤维相区别，故须作神经纤维染色。
应用：
（1）有利于观察神经原纤维的损伤。
（2）神经系统肿瘤的诊断与鉴别诊断：如神经母细胞瘤与未分化癌的区别等。

九、病原微生物染色
真菌和霉菌
真菌引起的病变虽然多种多样，但都不具有特异性，且真菌在HE染色中均显蓝色，故须作真菌染色。
应用：
在化脓性炎、坏死性化脓性炎及肉芽组织性化脓性炎或化脓性炎伴有巨细胞反应疑为霉菌感染时，找到霉菌的菌丝、抱子及菌体即诊断为霉菌性炎。
细菌
细菌在HE染色上不能分类，故须作细菌染色。
应用：
（1）一些疑为细菌感染性炎症，可用细菌染色进一步确定病原诊断。如伤寒肉芽肿性炎或葡萄球菌性炎等化脓性炎症的诊断中细菌染色有很重要的诊断价值。
（2）风病与结核病：均由菌体表面含蜡质膜的抗酸杆菌所感染形成，故须经抗酸染色才能着色，从而与其它疾病相鉴别。