[转发]SYSMEX XE-2100D血液分析仪白细胞分类检测原理及散点图应用

孙 奕
(嘉兴市第一医院浙江省嘉兴市314000)
中图分类号：TH776 文献标识码：C 文章编号：1003—8868(2007)03—0077—02
我院自2005年购入SYSMEX XE一2100D血液分析仪以来．在使用与维护过程中发现．由于仪器检测原理的特殊性，不仅平时要注意按照操作规程做好仪器的使用维护．而且需要注意积累对仪器五分类散点图及含义性报警的辨别经验。了解仪器的工作原理，能解释各类细胞群所出现的位置，以避免因为仪器不良工作状态引起检测报告的误报和错报。现就XE一2IOOD的白细胞分类检测原理和常见故障的处理介绍如下，供同行参考。
1 XE一21OOD的白细胞分类检测原理XE一2100D采用半导体激光的流式细胞技术结合聚次甲基染料进行染色技术来对白细胞进行分类的。即用一束半导体激光照射经过处理的细胞，根据每个细胞产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光信号来相互区分。前向散射光反映细胞体积：侧向散射光反映细胞内涵物，如核和颗粒；侧向荧光反映细胞脱氧核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)含量。
XE一2100D可将白细胞大致分成淋巴细胞(Lymp)、单核细胞(Mono)、中性粒细胞(Neut)、嗜酸性粒细胞(Eo)和嗜碱性粒细胞(Baso)等5大类。它是通过WBC／BASO通道检测WBC (白细胞数)和Baso；通过4DIFF通道进行4分类，即分辨出Lymp、Mono、Neut+Baso和Eo；通过计算得Neut， 即Neut=(Neut+Baso)一Baso.
(1)WBC／BASO检测通道：在此通道中， 特殊嗜碱性粒细胞溶血素试剂(STROMATOLYSER—FB)将血液中的红细胞和血小板溶解，形成影红细胞：将除嗜碱性粒细胞外的白细胞破坏．形成裸核白细胞。通过流式细胞检测，利用前向和侧向散射光信号，使嗜碱性粒细胞与其它细胞因体积差异而区分。
以前向散射光强度为纵坐标，侧向散射光为横坐标，在WBC／BASO散点图中则显示出影红细胞(Ghost)、嗜碱性粒细胞和其它白细胞等3个分群。其它白细胞即是除嗜碱性粒细胞的裸核白细胞(也将其称为WBC分群)。
白细胞数为嗜碱性粒细胞数与其它白细胞数之和。有核红细胞也包括在内。
(2)4DIFF检测通道：在4DIFF通道中。溶血素试剂(STROMATOLYSER一4DL)使得血液中的红细胞和血小板被溶解，成为影细胞；并将白细胞膜轻微破坏．即在白细胞膜上打出小孔。造成其通透性增加。FFS试剂(STROMA．TOLYSER一4DS．XE2100D也称为FFS试剂)中的聚次甲基荧光染料就能进入破损的白细胞内，与细胞内的核酸和细胞浆内的细胞器结合。染色后的细胞经波长633nm的激光照射。使侧向荧光强度与细胞内核酸含量成正比。FFS试剂中还含有一种有机酸．可与白细胞中嗜酸性颗粒特异结合，依据侧向散射光信号，得以区分嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。从而通过流式细胞检测，用侧向荧光和侧向散射光信号就能区分出4类白细胞。
以侧向荧光强度为纵坐标．侧向散射光为横坐标．4DIFF散点图中显示出影红细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性+嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞等几个分群。
2 白细胞分类系统的常见故障及处理
2．1 故障一
(1)故障现象：检测的白细胞数(WBC)极低，且不分类。此时，4DIFF散点图各分群分布位置很低，接近横坐标，各分群的颜色几乎没有区别。WBC／BASO散点图分群分布正常。
在仪器控制电脑的Service界面中，DIFF项目下，Dif-y<30 （依次点击：Brower-Service-DifF）。
(2)原因分析：检测时标本稀释池内没有或只有少量的FFS染料，可能是：①FFs染料试剂用完；②FFs染料试剂通入标本稀释池的通道口有堵塞。
(3)处理方法：① 检查从FFS染料试剂到标本稀释池的胶管(胶管上套有黑色的皮管)，观察胶管内有没有浅蓝色的试剂。② 没有试剂或有断断续续的蓝色试剂．说明FFS试剂已用完。处理方法：换上新试剂，再进行试剂灌注程序，即Test—Replenish—FFS—Execute．可重复多次．直至浅蓝色试剂充满整个管路，其中没有空气。③ 有浅蓝色试剂，则说明通入稀释池内的金属管有堵塞。处理方法：把试剂胶管拔下，将次氯酸钠液用注射器从金属管口打入稀释池．浸泡片刻后，排除稀释池内液体，接好胶管，再做1次灌注程序即可。
2-2 故障二
(1)故障现象：白细胞分类数(WBC)比正常值低15％以上。调节系统的WBC放大系数，也不能完全解决问题。
此时。在WBC／BAS0散点图上应可见到，WBC分群(裸核白细胞)的位置偏低，WBC分群的聚集图形类似1个拉长的椭圆，且与Ghost分群明显相交。4DIFF散点图各分群分布正常。
在仪器控制电脑的Service界面中，DIFF项目下，Dif-y的值在40左右。WBC／BASO项目下，BASO—X<65，BASO—Y<65（正常情况下的经验值，65≤BASO—X、BASO-Y≤79)；BASO—WP>110(依次点击：Brower—Service—WBC／BASO)。
(2)原因分析：①更换了新的试剂；② 血样少；③鞘液注射器有渗漏；④ 光检测室污染；⑤ 激光光路有灰尘；⑥WBC／BAS0通道灵敏度低。
(3)处理方法：① 检查试剂的更换情况，并排除；②清洗分血的SRV阀。若故障依旧，可进行下一步；③拆开仪器左侧盖板。检查位于仪器左侧下方的白细胞分类鞘液注射器是否有渗漏。有渗漏．则需更换注射器的密封圈；无渗漏或更换了密封圈后问题还存在，那就需要清洗光检测室：④脱开联接光检测室的2个胶管的外接头。胶管位于仪器的左侧部位上端，管子上套有黑色的皮管，1根胶管的外接头联在鞘液注射器上方的位置．另1根连在2 阀处。从管口将次氯酸钠液体注入光检测室．经过浸泡和反复冲洗后，装回胶管。此后做标本测试，WBC，BASO散点图中的WBC分群应有明显的聚集．其椭圆的长轴有明显的缩短。即WBC／BASO—WP下降到90以下，当然有时略高于90也是可以的。关键是WBC分群应有明显的聚集．且WBC分群有与Ghost分群分开的趋势；⑤ 如果清洗过光检测室后，白细胞分类值还是偏低，散点图中的WBC分群聚集偏散．且WBC分群与Ghost分群之间没有分开，则要对激光光路进行清洁(注意，如果没有处理光学元件灰尘的经验，最好请厂家维修工程师来处理更妥些)。处理过程：打开激光室外罩．先清除罩内的灰尘，再用棉签粘酒精混合液(70％的纯酒精+30％的乙醚)．从光学元件的中心部位转圈擦到边缘，小心地擦拭光路中的各个镜片表面；⑥ 经过上述处理后，仪器WBC／BASO散点图中各分群的聚集性会有良好的改善， 问题也将得到解决。如果WBC分群的位置还有所偏低．即BASO—X、BASO—Y达不到65以上， 则需调节WBC／BASO通道的灵敏度。即拆开仪器右侧的盖板．调节相应灵敏度的电位器，使BASO—X和BASO—Y达N65以上．但不要超过79。关键是使WBC／BASO散点图上的WBC分群既不与Ghost分群相交重叠，也不和Baso分群相交重叠。
3 小结
近来五分类血液分析仪大都采用散点图来显示白细胞的分类情况．因此．维护人员很有必要了解和认识仪器的工作原理和散点图的作用，总结经验，有助于及时发现问题，有的放矢做好维护。
由于XE一2100D血液分析仪的白细胞分类是采用流式细胞术+染料的方式进行，所以要严格按照仪器的操作规定工作，平时还应注重对仪器光路的维护，一是环境清洁，二是每做4 000多个标本时主动做光检测室的清洁程序。三是坚持使用原厂试剂。