白细胞分类计数

² 白细胞分类生理概要

　　　　正常外周血中常见白细胞，有中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞等五种。各种粒细胞起源于骨髓，粒细胞在骨髓内发育成熟后，释放入血液中，在血液内不到一天，即陆续分布到各组织中去，在4天内破坏死亡。在正常情况下，粒细胞的生成、成熟、释放和衰老死亡之间保持着动态平衡。粒细胞的寿命，如从原粒细胞算起至在组织中破坏死亡为10～15天。淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞两群。B淋巴细胞寿命较短，一般仅3～4天，主要生活于淋巴结和脾脏内，部分在血液中流动。T淋巴细胞寿命较长，可达100天以上，甚至超过20年，可在淋巴管和心血管系统中反复循环。单核细胞来源于粒细胞-巨噬细胞系统。成熟单核细胞进入血液几小时，最多几天就进入疏松结缔组织，继续分化为巨噬细胞。单核细胞从发育初期到在组织中死亡可达数月。

² 血球分析仪器法

l 仪器型号：Sysmex KX-21型多项目自动血球计数仪器

Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置

l 检测原理：

一、Sysmex KX-21

WBC粒度分布，采用4条辨别线划分3个区域来辨别小型白细胞、中型白细胞、大型白细胞。低辨别线（LD）在30-60fl之间的最合适位置上自动决定，高辨别线（UD）固定在300fl，用作粒度分布的异常监测。进一步求出在（LD）和（UD）之间的范围内的WBC粒度分布的谷值，最出的谷值识别为TROUGH辨别线1（T1），另一个谷值识别为TROUGH辨别线2（T2）。

⑴LYM#（小型白细胞数）：为辨别线（LD）到（T1）间的小型白细胞数，可认为与淋巴细胞数有很大关联。

⑵MXD#（中型白细胞数）：为辨别线（T1）到（T2）间的中型白细胞数，可认为与单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞的总数有很大关联。

⑶NEUT#（大型白细胞数）：为辨别线（T2）以后上的大型白细胞数，可以认为与嗜中性粒细胞有很大关联。

⑷LYM%（小型白细胞比率）：小型白细胞数占全部白细胞数的比率。

⑸MXD%（中型白细胞比率）：中型白细胞数占全部白细胞数的比率。

⑹NEUT%（大型白细胞比率）：大型白细胞数占全部白细胞数的比率。

二、Sysmex XE-2100

1、半导体激光器的流式细胞计数法：

一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。然后将该样品送入流动的池中。一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。前向散射光由光二极管接收，侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管（PMT）接收。光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。

⑴前向散射光和侧向散射光：当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时，该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。通过检测散射光，可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。与此同时，当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。散射光的强度，取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。对前向散射光进行检测，提供有关血液细胞体积大小的信息；同时对侧向散射光进行检测，提供有关细胞内部的信息。

⑵侧向荧光：当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。通过测量荧光强度，可以得到有关血细胞染色的信息。

2、RF/DC检测方法测量：

通过直流电阻的变化测定血细胞的大小，并通过射频电阻测定血细胞内的密度。一个血液样品经过吸液、定量、稀释为指定比，然后输送给相应的检测室。检测室内有一个称为“小孔”的圆孔，两侧均为电极。两个电极之间存在直流电核射频电流。稀释后样品中悬浮法血液细胞通过该孔，使两个电极之间的直流电阻核射频发生变化。通过直流电阻的改变测定血细胞的体积大小，而由射频电阻的变化检测血细胞内的密度（细胞核的大小与其他信息），这种检测是以电脉冲的形式进行的。根据这些脉冲大小的不同，可得到血细胞大小和内部密度的二维分布（散点图）。通过对这些分布的检测，可得到各种测量数据。

l 试剂：

一、Sysmex KX-21

⑴稀释液

⑵WBC／HGB用溶血剂

⑶2％EDTA二钾溶液

二、Sysmex XE-2100

⑴CELLPACK（EPK）

⑵STROMATOLYSER-4DL（FFD）

⑶STROMATOLYSER-4DS（FFS）

⑷STROMATOLYSER-FB（FBA）

l 标本吸入量：

一、Sysmex KX-21：全血模式50

二、Sysmex XE-2100：⑴手工模式130

⑵自动进样器模式200

l 静脉血采血方法：

抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K₂／ML）24小时室温保存。

l 操作步骤：

一、Sysmex KX-21

⑴仪器在全血模式（WB）下

⑵要在允许空白值内：

WBC	RBC	HGB	PLT
0.3 109/L	0.02 1012/L	1g/L	10 109/L

⑶检测质控数值合格。

⑷标本的测量：将待测标本充分混均，然后将吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。蜂鸣器“笛笛”响两声之后，当LCD画面上显示“正在测量”状态时可将试管取下。

⑸结果显示：标本被吸入后仪器将进行自动测量，约1分钟左右测量结束，被测标本的结果自动显示出来。同时LCD画面自动切换至“准备测量”状态，此时可进行下一份标本的测量。

二、Sysmex XE-2100

⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。

⑵要在允许空白值内：

WBC	RBC	HGB	PLT
0.3 109/L	0.02 1012/L	1g/L	10 109/L

⑶检测质控数值合格。

⑷标本的测量：

手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行MANUAL键，利用数字键输入标本的编号，按ENTER键确认。将待测标本充分混均，然后将吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。吸液管吸液完毕后听到三声报警声，将试管移开。

进样器自动模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行MANUAL键，利用数字键输入标本的编号，按ENTER键确认。将试管加放在自动进样器工作台上。机器开始自动混均、吸引和分析标本。

⑸结果显示：标本被吸入后仪器将进行自动测量，被测标本的结果自动显示出来。同时屏幕切换至“准备测量”状态，此时可进行下一份标本的测量。

² 显微镜计数法

l 细胞受色原理（瑞氏染色法）：

血细胞的受色，有物理吸附作用和化学的亲和作用。各种细胞和细胞成份的化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，经过染色后的同一张血片上，可以看到不同的着色。例如：血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，易与酸性染料伊红结合，染为粉红色或红色，称为嗜酸性物质；嗜碱性颗粒为酸性蛋白质，易与碱性染料美蓝或天青结合，染为紫黑色，称为嗜碱性物质；中性颗粒可以同时与美蓝和伊红染料结合，染为淡紫红色，称为中性物质。

l 试剂：

⑴瑞氏染液：瑞氏染料粉0.1g、甲醇（AR）60ml。

⑵磷酸盐缓冲液（PH6.4-6.8）：磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钾0.2g、蒸馏水加至100ml。

l 末梢血采集方法：

⑴采血部位必须无冻疮、炎症、水肿、充血及循环障碍。成人以无名指为宜，半岁以上儿童手指为好，半岁以下婴幼儿通常自拇指或足跟两侧采血。轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤待干。紧控刺血部位，用采血针穿刺取血，动作应迅速，深度约2-3mm，稍加挤压，以血液能流出为宜。

⑵用干棉球擦去第一滴血，取末梢血1滴，置于玻片的一端，以边缘平滑的推片的一端，放在血滴前方，逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开。然后将推片与玻片保持30-45度角，平稳地向前推动至玻片的另一端，玻片上便留下一薄层血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞形态改变。采血完毕，用干棉球压住伤口，血止为止。

l 操作步骤：

⑴将制好的血片平放在染色架上晾干，干片固定对核着色有稳定的作用。

⑵先加瑞氏染液数滴，使覆盖整个血膜，固定细胞1.5-1分钟。

⑶按1:1或1:2加缓冲液，与染液混均，染色10分钟左右。

⑷用缓冲液或接近中性的水冲去染液，待自然干燥或用滤纸吸干后，用油镜观察。

l 注意事项：

⑴血膜干透后方可固定染色，否则细胞尚未牢固的附着在玻片上，在染色的过程中容易脱落。

⑵染色时间与染液和缓冲液的比例。

⑶所加染液不能过少，以免蒸发干燥，染料渣沉着于血膜上不易冲掉。

⑷冲洗时不可先倒掉染液，应以流水从一端缓缓冲去，以免染料渣沉着在血膜上。

² 正常参考范围

一、Sysmex KX-21

NEUT%（中性粒细胞比率）	46.0～63.0
MXD%（中间细胞比率）	7.0～13.0
LYM%（淋巴细胞比率）	24.0～47.0

二、Sysmex XE-2100

NEUT%（中性粒细胞比率）	46.0～63.0
MONO%（单核细胞比率）	1.0～7.0
LYM%（淋巴细胞比率）	42.0～47.0
EO%（嗜酸性粒细胞比率）	0～5.0
BASO%（嗜碱性粒细胞比率）	0～1.0
NEUT%（中性粒细胞比率）	46.0～63.0

二、显微镜计数法

中性杆状核粒细胞%	1.0～5.0
中性分叶核粒细胞%	5.0～70.0
嗜酸性粒细胞%	0.5～5.0
嗜碱性粒细胞%	0～1.0
淋巴细胞%	20.0～4.0
单核细胞%	3.0～8.0

² 临床意义

l 中性粒细胞变化：

⑴中性粒细胞增多：急性细菌性感染或化脓性感染，严重的组织损伤或大量血细胞破坏，急性大出血，急性中毒，肿瘤性或持续性增多，心肌更塞和血管栓塞等。

⑵中性粒细胞减少：某些传染性疾病，某些血液病，慢性理、化损伤与放射线损伤，自身免疫性疾病，脾功能亢进，过敏性休克，高度恶病质等。

l 嗜酸性粒细胞变化：

⑴嗜酸性粒细胞增多：寄生虫感染，过敏性疾病，药物过敏，皮肤病，某些血液病等。

⑵嗜酸性粒细胞减少、罕见：慢粒白血病，嗜酸性粒细胞白血病，嗜酸增多的急性粒单细胞白血病，急淋白血病，何杰金病，非何杰金病，嗜酸粒细胞增多的胃肠炎，溃疡性结肠炎，类风湿性关节炎，全身性硬皮病，嗜酸细胞增多蜂窝组织炎，肝癌，恶性黑色素瘤，免疫缺陷状态极其它引起复发感染的状态，遗传性嗜酸粒细胞增多症，结核，猩红热，一些细菌和病毒感染的恢复期，慢性移植物抗宿主反应等。

l 嗜碱性粒细胞变化：

⑴嗜碱性粒细胞增多：骨髓及骨髓外增殖性疾病和白血病，慢性粒细胞性白血病，真性红细胞增多症，骨髓纤维化，原发性血小板增多症，嗜碱性粒细胞白血病，机体的反应性嗜碱粒细胞增高，高敏状态，溃疡性结肠炎，自发性嗜酸细胞增多症等。

⑵嗜碱性粒细胞减少：骨髓异常增生综合征，骨髓增殖性疾病等。

l 淋巴细胞变化：

⑴淋巴细胞增多：某些传染病，某些细菌感染，淋巴系统疾病，药物过敏，脾切除，甲状腺功能亢进等。

⑵淋巴细胞减少：接触放射线及应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素。

l 单核细胞变化：

单核细胞增多常见于：某些细菌感染，某些寄生虫病，单核细胞白血病，粒细胞缺乏症恢复期，许多急性传染病的恢复期等。